天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知實(shí)驗(yàn)要求二實(shí)驗(yàn)室規(guī)則三

1、天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知（一）實(shí)驗(yàn)要求 （二）實(shí)驗(yàn)室規(guī)則（三）實(shí)驗(yàn)室安全注意事項(xiàng) （四）實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式,實(shí)驗(yàn)一 藥用植物化學(xué)成分的提取一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 了解天然藥物成分的分析方法2 掌握預(yù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)二 實(shí)驗(yàn)原理：1 單項(xiàng)預(yù)試法：尋找特定成分。2 系統(tǒng)預(yù)試法：在未知情況下對(duì)可能含有的各類成分進(jìn)行全面檢查。,三 實(shí)驗(yàn)步驟：1 制備樣品試液 （1）石油醚提取液 —— 揮發(fā)油、油脂、甾醇三萜（2）

2、乙醇提取液 —— 黃酮內(nèi)酯、生物堿、酚類香 醇、萜類內(nèi)酯、強(qiáng)心苷、鞣質(zhì)、有機(jī)酸（3）水提取液 —— 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類、皂苷有機(jī)酸2 選擇合適的展開(kāi)系統(tǒng)3 薄層層析 取長(zhǎng)春花粉末20g,加70%乙醇150ml加熱回流0.5h,抽濾，濾液減壓濃縮至浸膏。 展開(kāi)系統(tǒng)： 氯仿：甲醇=10：1,實(shí)驗(yàn) 二 薄層層析及中藥成分預(yù)實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 了解薄層層析的原理及應(yīng)用。2 掌握薄層層析的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

3、 二 實(shí)驗(yàn)原理薄層色譜即TLC，屬固液吸附色譜，利用吸附劑（硅膠）對(duì)不同組分吸附能力的差異，從而達(dá)到分離目的的方法。三 TLC的應(yīng)用1 可用于判斷兩個(gè)化合物是否相同。2 可用于確定混合物中含有的組分?jǐn)?shù)。3 可用于為柱色譜選擇合適的展開(kāi)劑。4 可跟蹤有機(jī)反應(yīng)。,實(shí)驗(yàn)步驟1 點(diǎn)樣：畫出起點(diǎn)線，即距離薄層板一端約1cm處。2 展開(kāi)：浸入深度0.5cm,待展開(kāi)劑前沿離頂端1cm處，取出用鉛筆畫出展開(kāi)劑前沿

4、。 展開(kāi)劑：氯仿：石油醚=5：1 顯色：（1） 紫外燈；（2）碘缸；（3）5% 硫酸乙醇溶液4 計(jì)算比移值 Rf = 原點(diǎn)距斑點(diǎn)中心距離/原點(diǎn)距展開(kāi)劑前沿距離思考題：1、在混合物的薄層色譜中，如何判定各組分在薄層上的位置？2、展開(kāi)劑的的高度若超過(guò)了點(diǎn)樣線對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有何影響？3、對(duì)一個(gè)未知混合物如何選擇展開(kāi)劑？,實(shí)驗(yàn)三 硅膠柱層析一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、 了解硅膠柱層析的原理。

5、 2 、掌握硅膠柱層析的技術(shù)。二 實(shí)驗(yàn)原理 硅膠柱層析屬吸附色譜，是利用吸附劑硅膠對(duì)被分離物質(zhì)的吸附能力不同，用溶劑洗脫，以使組分分離。,三 實(shí)驗(yàn)步驟1 裝柱 濕法：量取一定量體積的洗脫劑（V0），倒入色譜柱中，然后，將硅膠放置于燒杯中，加入一定量的洗脫劑攪拌至無(wú)氣泡，加入柱內(nèi)，并將活塞打開(kāi)，一邊沉降一邊加，直到加完硅膠，仍使洗脫劑流滴一段時(shí)間，使色譜柱中高于硅膠的溶劑幾乎全部留入接收瓶中，正確計(jì)量接收器中

6、的溶劑量（V1），計(jì)算色譜柱的保留體積（V0-V1）2 上樣 干法： 稱取一定量硅膠（色譜柱中硅膠量的10%），置于蒸發(fā)皿中，用滴管慢慢加入樣品溶液，用滴管慢慢加入樣品溶液，邊加邊攪拌，待硅膠已完全被樣品溶液濕潤(rùn)時(shí)，在水浴鍋上蒸除溶劑，蒸除溶劑后的吸附有樣品的硅膠在1000C加熱除去水分，,3 洗脫 樣品加完后打開(kāi)活塞放出液體至柱面相同時(shí)，加入洗脫劑至液面高出柱面約10cm,在柱面上加入一個(gè)小濾紙片，再加

7、2cm厚的硅膠，再加一團(tuán)脫脂棉。 洗脫劑：石油醚：乙酸乙脂：=3：1 洗脫收集：每份洗脫液按30ml收集 顯色合并：,槐花米中蘆丁的提取分離,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)蘆丁的提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理與操作。了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法了解UV在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用,實(shí)驗(yàn)原理,蘆丁溶于熱水，難溶于冷水，且分子具較多酚羥基，顯弱酸性，在堿液中易溶，在酸中易析出沉淀，故可采用堿提酸沉法提取蘆

8、丁。,實(shí)驗(yàn)方法,1、蘆丁的提取、精制,槐米粗粉（40g）,,置1000ml燒杯中，加水600ml，攪拌下加入石灰乳，調(diào)pH8—9，加熱至微沸，保持30分鐘，趁熱抽濾。,,,,殘?jiān)?濾液,,,,,在60—70℃下用濃鹽酸調(diào)pH4—5，靜置1小時(shí)，抽濾,沉淀（粗品蘆丁）,濾液,粗品蘆丁,,將沉淀懸浮于蒸餾水中，加熱煮沸15min，趁熱 抽濾,,,,殘?jiān)?濾液,,在60—70℃下用濃鹽酸調(diào)pH4—5，靜置1小時(shí)，抽濾,蘆丁精品,注：①加

9、石灰乳時(shí)pH不能過(guò)高，否則鈣能與蘆丁形成螯合物而不溶于水而析出；②加熱過(guò)程中須不斷補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分，以保持pH8—9；③pH過(guò)低會(huì)使蘆丁形成鹽而降低產(chǎn)率；④可利用蘆丁在冷熱水中溶解度差別來(lái)達(dá)到結(jié)晶目的。得到的沉淀要粗稱一下， 按蘆丁在熱水中1：200溶解度加蒸餾水進(jìn)行重結(jié)晶。,2、蘆丁的鑒定,（1）蘆丁的定性反應(yīng)： 取蘆丁3~4mg，加乙醇5~6ml使溶解，分成三份做下述試驗(yàn)。 ① 取上

10、述溶液1~2ml，加2滴濃鹽酸，再酌加少許鎂粉注意觀察 顏色變化情況。 ② 取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并詳細(xì)記錄 顏色變化情況。 ③ 取上述溶液1~2ml， 加等體積的10%α—萘酚乙醇溶液，搖勻， 沿著管壁滴加濃硫酸，注意觀察兩液界面的顏色變化,思考題,苷類結(jié)構(gòu)的鑒定大體程序如何？怎樣確定蘆丁結(jié)構(gòu)中糖基是否聯(lián)結(jié)在槲皮

11、素3-O-上？怎樣證明蘆丁分子中只含有一個(gè)葡萄糖及一個(gè)鼠李糖？,大黃中蒽醌類成分的提取分離,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1．掌握PH梯度萃取的原理及操作技術(shù)；2．掌握蒽醌類化合物鑒定方法；3.了解液液萃取法分離混合物的實(shí)驗(yàn)方法；,實(shí)驗(yàn)原理,利用乙醇為提取溶劑，可把不同類型性質(zhì)互異的蒽醌類成分提取出來(lái)；總蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得總提取物可用乙醚提取總苷元；根據(jù)蒽醌衍生物的酸性強(qiáng)弱，用不同的堿液進(jìn)行萃取，最后得到不同的蒽醌苷

12、元。,實(shí)驗(yàn)方法,1、大黃中總蒽醌成分的提取分離,大黃粗粉100g,,置1000ml 圓底燒瓶中，加入95%乙醇250ml，回流提取2hr，趁熱抽濾,,,,醇液,藥渣,,加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr，趁熱抽濾,,,,醇液,藥渣,,,,,,,乙醇提取液,,靜置冷卻，抽濾,濾液,,減壓回收乙醇至糖漿狀，將濃縮物轉(zhuǎn)移至250ml三角瓶中,乙醇總提物,,放冷，加入乙醚60ml冷浸，振搖20′將乙醚液傾入500ml三角瓶中,,,,乙

13、醚層,浸膏,,,,,40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）,乙醚層,浸膏,,,,,乙醚總提液,2、游離蒽醌的分離,乙醚總提液,5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、30、30ml，至水層顏色變淺,,,,,乙醚層,堿水層,5%Na2CO3水溶液萃取3次，每次40、35、35ml,,,,,堿水層,乙醚層,2%NaOH水溶液萃取3次，每次30ml，,,,,,乙醚層,堿水層,滴加HCl酸化，靜置沉淀，抽濾，水洗至中性，干燥,,沉淀

14、I，大黃酸,酸化，抽濾水洗，干燥,,沉淀Ⅱ大黃素,酸化，抽濾水洗，干燥,,,沉淀Ⅲ大黃素甲醚、大黃酚,3、蒽醌類化合物的檢識(shí),（1）薄層鑒別 吸附劑：硅膠 展開(kāi)劑：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水 （25：75：5：35：6：25） 顯 色：紫外燈下觀察，斑點(diǎn)為黃色,（2）呈色反應(yīng) ① 滴加2%NaOH水溶