1,1,1-三氯乙烷(TCA)污染地下水及其富集培養(yǎng)物中脫氯細(xì)菌的定量與多樣性分析.pdf

1、TCA具有致癌性、致畸性，是我國(guó)最普遍的有機(jī)污染物之一，嚴(yán)重危害人體健康和生態(tài)環(huán)境，因此對(duì)TCA污染治理的研究十分必要。采用頂空-GC-FID法測(cè)定了某TCA污染場(chǎng)地的6個(gè)地下水樣品中的TCA、1,1-二氯乙烷(1,1-dichloroethane，DCA)和氯乙烷(chloroethane，CA)的濃度。所有樣品中均測(cè)得TCA的生物降解產(chǎn)物DCA和(或)CA，由此推測(cè)此6個(gè)采樣點(diǎn)的地下水中可能存在TCA的生物降解。采用特異性熒光實(shí)時(shí)定

2、量PCR分別測(cè)定6個(gè)樣品中Dehalobacter的豐度，結(jié)果表明，6個(gè)樣品中Dehalobacter的豐度差異較大，其中以樣品W6中Dehalobacter的豐度最高。以細(xì)菌16S rRNA基因通用引物27f和Dehalobacter屬特異性引物647r為上下游引物，對(duì)總菌DNA進(jìn)行擴(kuò)增，利用克隆文庫(kù)技術(shù)將所得擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建了6個(gè)樣品的Dehalobacter特異性克隆文庫(kù)，所得序列與GenBank中的代表性的16S rRNA基因參考序

3、列構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。6個(gè)克隆文庫(kù)共獲得41條序列，經(jīng)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，與它們最相似的已知分類(lèi)地位的16S rRNA基因序列全部屬于Dehalobacter屬。按照99％的相似性為標(biāo)準(zhǔn)，將所有序列劃分成7個(gè)可操作性分類(lèi)單元（OTU），其中OTU1(24 sequences)和OTU2(8 sequences)是最優(yōu)勢(shì)的兩個(gè)OTU，共占全部41條序列的78.0%。OTU1和OTU2的序列與已知能降解TCA的Dehalobacter sp.str

4、. TCA1的16S rRNA基因序列相似性達(dá)98%；將文庫(kù)中的3個(gè)OTU(OTU3、OTU5、OTU6)在GenBank中進(jìn)行16S rRNA同源性比對(duì)，最高僅為95~96%，表明該場(chǎng)地可能存在一些新的Dehalobacter細(xì)菌類(lèi)型。本研究表明該 TCA污染場(chǎng)地地下水中存在Dehalobacter屬細(xì)菌，其多樣性較豐富，可能與TCA生物降解有關(guān)。
　　對(duì)4個(gè)TCA污染的地下水水樣W1、W2、W4、W6在實(shí)驗(yàn)室條件下的降解做了探

5、索。將原始地下水樣品W1、W2、W4、W6轉(zhuǎn)入血清瓶中，加入維生素B12和酵母提取物作為生長(zhǎng)因子，在厭氧、25℃、110 r/min震蕩、避光條件下培養(yǎng)九周。培養(yǎng)分為兩組，一組加入外源混合電子供體“MEAL”（EA組），另一組不加任何外源電子供體（NE組）。運(yùn)用頂空-GC-FID法測(cè)量培養(yǎng)九周后各個(gè)樣品中氯代烷烴的降解率，發(fā)現(xiàn)在上述培養(yǎng)條件下，EA組中各個(gè)樣品的氯代烷烴的降解率均高于相對(duì)應(yīng)的NE組樣品，可見(jiàn)外源電子供體的添加可加速各樣品