實驗診斷學2015臨床5年

1、實驗診斷學 臨床常用免疫學檢測,上海交大醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院趙榮平,,免疫學檢查由于具有特異性和敏感性，在實驗診斷中應用越來越廣泛。,,immune response,,抗原,B淋巴細胞,吞噬細胞,T淋巴細胞,致敏T淋巴細胞,cytokine,漿細胞,antibody,T 記憶細胞,B 記憶細胞,,,,,,,,,,,,NK,complement,其它,常用免疫檢測,常用免疫檢測方法,做免疫學檢查思考點,方法靈敏性(參考值不

2、一致性）,第一節(jié)：體液免疫檢查,體液免疫檢查主要包含：免疫球蛋白(immunoglobulin)補體(complement),一、免疫球蛋白測定,免疫球蛋白是一組具有抗體活性的球蛋白，由漿細胞合成分泌。免疫球蛋白基本結構 根據(jù)重鏈抗原性可分為5類（α、γ、μ、δ、ε），每個Ig只能和一種輕鏈結合（ κ或λ）。,IgG IgA IgM IgE特性,,免疫球蛋白合成、分泌及主要功能,,IgG IgA IgM IgE病理變化,,慢

3、性肝炎導致Ig增高機理,隨著肝炎病情的加重和時間延長，受損的肝細胞作為自身抗原刺激淋巴系統(tǒng)，分泌大量抗體，使IgG、IgM及IgA同時增高，以IgG增高為主。肝硬化時肝細胞發(fā)生片狀壞死，造成枯否氏細胞(Kupffer cell)功能失調，不能有效地發(fā)揮吞噬濾過作用，失去對抗原的處理能力，使門靜脈血中的抗原不能被清除，抗體形成增多。肝臟免疫系統(tǒng)功能嚴重失調，從而導致B淋巴細胞失控。,二、M蛋白檢測,M蛋白（monoclonal immun

4、oglobulins）：由一種單克隆B淋巴細胞異常增殖所產(chǎn)生，具有相同結構和電泳遷移率的免疫球蛋白分子或其分子片段（如輕鏈），一般不具抗體活性。簡述免疫球蛋白合成 正常情況合成一條重鏈需要18分鐘，合成一條輕鏈只需10分鐘，組成一條完整的Ig就會有一條多輕鏈過剩，過剩的輕鏈分泌到細胞外，10%腎小管內分解代謝，80%重吸收，10%排出體外（<20ug/ml)。正常合成Ig，一個Ig分子只能和一種輕鏈結合，Ig輕鏈

5、κ/λ 之比為2：1。,M蛋白檢測臨床意義,陽性主要見于1.多發(fā)性骨髓瘤 2.巨球蛋白血癥3.重鏈病 4.半分子病5.惡性淋巴瘤 6.良性M蛋白血癥,,,,,過敏原檢測,吸入性和食入性多項特異性IgE抗體檢測（I型過敏反應）特異性IgE指能與過敏原特異性結合的IgE。特異性IgE是尋找Ⅰ型過敏反應變應原、并進行治療較好方法。原理將各種過敏原（如花粉、牛奶）與患者血清反應，血清中存在特異性IgE

6、則呈陽性反應。 多項食物特異性IgG抗體檢測（食入性）（III型過敏反應）,其它臨床常用檢測項目介紹,血液、尿液免疫球蛋白總輕鏈檢測血液、尿液免疫球蛋白游離輕鏈檢測血液免疫球蛋白IgG4檢測,二、血清補體檢測（complement）,補體是主要由巨噬細胞分泌存在于新鮮血液中具有酶樣活性的球蛋白，補體不耐熱易降解，故補體檢測須用新鮮血清。補體有C1-C9(經(jīng)典途徑）及BF、DF、PF、HF、IF（旁路途徑）和補體調節(jié)因子組成。臨床

7、常作總補體活性（CH50）和單一因子C3、C4、BF及C1q檢測。,補體兩條激活途徑區(qū)別,經(jīng)典途徑：抗原抗體復合物激活C1和C4、2，形成C3轉化酶，然后是C5、6、7、8、9的激活，最后導致靶細胞溶解。  傍路途徑：是細菌的內毒素和其它有關因子，直接激活C3，再是C5、6、7、8、9的激活，最后導致靶細胞溶解。  不同點是路徑不一樣，傍路途徑可最快地發(fā)揮效應，達到溶靶細胞作用。  其次是激活物質不一

8、樣，經(jīng)典路徑激活物質是抗原抗體復合物，產(chǎn)生后才能激活C1，所以需要時間長。傍路途經(jīng)激活物質是內毒素，細菌感染后一經(jīng)釋放內毒素就能激活C3，所以有最快的反應。,,總補體溶血活性（CH50)檢測,增高 急性感染、急性組織損傷、惡性腫瘤和風濕病早期，補體增高常與其它血漿蛋白改變相伴隨。降低 自身免疫性疾病SLE的活動期 急性腎小球腎炎 冷球蛋白血癥等 嚴重肝病變 先天性缺乏,SRBC,Ab,c,SRBC,,Ab,C3

9、、C4、C1q、B因子檢測,,第二節(jié) 細胞免疫檢查,淋巴細胞占外周血白細胞總數(shù)的20%～40%，是機體免疫系統(tǒng)主要細胞，主要有TLC、BLC、NK、KC，淋巴細胞進一步可分為很多亞型。,淋巴細胞表面標志檢測,簇分化抗原CD（Cluster of differentiation）: 細胞在發(fā)育分化過程中，細胞表面抗原物質發(fā)生變化，CD抗原即指細胞變化過程中不同時期產(chǎn)生的抗原。目前臨床CD4（TH）與CD8（TS）檢測應用廣泛。簇分化抗原

10、檢測方法目前較多采用流式細胞儀技術進行分析，流式細胞免疫分析技術為特異抗體加標記技術加單細胞檢測。特點：特異性、靈敏性高、檢測精密度均較以前手工操作高很多。,流式細胞儀檢測簡介,,,一、T細胞表面標志檢測,CD3（總成熟T細胞）、E玫瑰花試驗檢測臨床意義 增高：甲亢、淋巴細胞性甲狀腺炎、重癥肌無力、器 官移植后排異反應 減低：AIDS、胸腺發(fā)育不良、聯(lián)合免疫缺陷、也可見 于放療和化療及免疫抑制類藥物治療

11、 CD4、CD8檢測臨床意義 CD4+增高：類風濕關節(jié)炎活動期，自身免疫疾病 CD4+減低：AIDS等病毒感染、免疫抑制劑治療、嚴重 創(chuàng)傷、大手術等 CD8+增高：傳染性單核細胞增多癥和巨細胞病毒感染 急性期、慢性乙型肝炎等 CD8+降低：部分自身免疫性疾病、Ⅰ型糖尿病等,T淋巴細胞表面標志檢測,E玫瑰花形成實驗（細胞表面受體概念）,,TC,SRBC,SRBC,SRBC,SRBC,SRB

12、C,SRBC,SER,SER,SER,SER,SER,SER,二、B細胞表面標志檢測,B細胞表面抗原和表面受體檢測臨床意義表面抗原CD19、CD20、CD21、CD22CD19增高：B細胞系統(tǒng)惡性腫瘤CD19降低：體液免疫缺陷疾病D20在B細胞激活后逐步降低CD21為EB病毒和CD3受體 CD22在B細胞激活時逐步增高 SmIg B細胞表面特異性標志SmIg增高：B細胞惡性增殖相關疾病，如慢淋、毛細胞白血病、巨球蛋白血

13、癥。SmIg降低：體液免疫缺陷相關疾病,CD4/CD8測定臨床意義,CD4/CD8測定臨床意義增高：多見于自身免疫性疾病，如類風關活動期、多發(fā)性硬化癥、SLE、器官移植后排異反應、膜性腎小球腎炎等降低：AIDS、瘤型麻風病、惡性腫瘤發(fā)作期、傳染性單核細胞增多癥、巨細胞病毒感染急性期、血吸蟲病等。,三、淋巴細胞功能檢測,NK細胞活性測定意義目前一般用流式細胞技術NK細胞無需抗原刺激可直接殺傷靶細胞，可釋放r干擾素（IFN-r）

14、、 β腫瘤壞死因子 （TNF-β）和集落刺激因子（GM-CSF）,在機體抗腫瘤和抗感染免疫中發(fā)揮重要作用增高：感染早期，器官移植干擾素等免疫增強劑治療。降低：惡性腫瘤，免疫缺陷疾病，使用免疫抑制劑?？贵w依賴性細胞介導的細胞毒測定（antibody dependent cell mediated cytotoxicity，ADCC）增高：自身免疫性疾病，移植免疫等降低：惡性腫瘤、免疫缺陷、慢性肝炎、腎功能衰竭等,三、細胞因子檢

15、查,細胞因子是由免疫細胞及相關細胞產(chǎn)生，特點高活性、多功能，一般為低分子蛋白。細胞因子種類繁多，功能復雜，多種因子可具有相同功能，各種細胞因子間可互相作用，細胞因子功能同時受到細胞因子受體功能影響，因此在選擇檢測項目和結果分析時要綜合考慮。,四、細胞因子檢查,細胞因子種類繁多，功能復雜，多種因子可具有相同功能，各種細胞因子間可互相作用，細胞因子功能同時受到細胞因子受體功能影響，因此在選擇檢測項目和結果分析時要綜合考慮。,,目前診治常用檢

16、查提問,,診斷試驗評價的幾個常用指標,敏感度（ Sensitivity）特異度（specificity）受試者工作特征曲線（ accuracy operating characteristic）,敏感度,Clinical Sensitivity指由標準診斷法（金標準）確診的病例組中經(jīng)所選實驗查出陽性例數(shù)，余下既為假陰性。,,,,100%,特異度,Clinical Specificity指標準診斷方法確診無病的對照組中經(jīng)所選實驗方法查

17、出陰性例數(shù)，余下為假陽性。,,,,100%,試驗敏感度和特異度選擇,一個理想實驗方法，最佳臨界值，從理論上講特異度和敏感度最好都為100%，而實際上是不太可能的。敏感度和特異度一般呈反比關系，通常采用統(tǒng)計學理論結合具體疾病選擇最合適特異度和敏感度。高敏感度實驗適用于： 初篩、初步診斷或排除診斷為目的。高特異度試驗適用于： 確診為目的時一般選擇高特異度。凡假陽性結果會導致病人精神和肉體上嚴重危害，例如腫瘤、HIV

18、攜帶者要選擇高特異度。,理想狀態(tài)試驗敏感度和特異度,,真陽性,例數(shù),,,,,真陰性,假陰性,假陽性,定量試驗結果值,金標準+,金標準-,臨界值特異度100%敏感度100%（理想）,,,,臨界值,假設：某項目檢測臨界值為15ng/ml,真陽性,例數(shù),,,,,真陰性,假陰性,假陽性,試驗結果值,金標準+,金標準-,臨界值15ng/ml,,,,臨界值,假設：高敏感度情況（臨界值降低為5ng/ml）,,真陽性,例數(shù),,,,,真陰性,假陰

19、性,假陽性,試驗結果值,金標準+,金標準-,臨界值5ng/ml,,,,臨界值,用ROC曲線選擇臨界值和試驗方法,ROC曲線在評價臨床檢驗指標時，可表示該指標敏感度與特異度之間關系。根據(jù)曲線不僅可得到?jīng)Q定區(qū)分正常與異常臨界點的重要信息，還可用于針對同一疾病不同診斷試驗間比較。,同一腫瘤二種腫瘤標志物選擇,,,ROC曲線,,,,,,,,,,,,,,第三節(jié) 腫瘤標志物檢測,腫瘤標志物概念：一般而言，TM是指存在于腫瘤細胞內或腫瘤細胞表達及脫

20、落的物質，或是宿主對腫瘤反應而產(chǎn)生的物質。由于腫瘤發(fā)生、發(fā)展原因至今尚未完全解決，提示腫瘤的標志也并未完全明確，所以腫瘤標志物概念還有待補充和修正。,,廣義上腫瘤標志物是指與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、消亡相關的各種物質。腫瘤細胞本身產(chǎn)生的腫瘤標志物常分為兩類： 1）當理化、病毒、遺傳等因素引起正常細胞內基因突變而發(fā)生癌變時，癌變細胞內及表達在其表面的蛋白質等成份發(fā)生某種變化，形成腫瘤抗原，這種抗原可以表達在正常細胞，而腫瘤細胞表達高。也可因

21、腫瘤導致組織結構變化，腫瘤抗原進入血液，如PSA ；或僅在胚胎組織中表達，正常成人細胞中不表達，在發(fā)生腫瘤時又重新表達，如AFP、CEA。,,2）由腫瘤細胞產(chǎn)生的特殊抗原，這種抗原在性質上與正常細胞所表達的抗原不同。癌基因的發(fā)現(xiàn)證明正常細胞有癌基因存在，只是處于不表達狀態(tài)，其一旦被激活，就失去正常調控，使細胞發(fā)生癌變。而由于癌基因表達產(chǎn)物與腫瘤抗原的關系至今未完全清楚，所以目前未發(fā)現(xiàn)很特異的腫瘤抗原。,,一般鑒定各種TM的方法為利用所制

22、備的特異Ab從體液或細胞組織中檢測各種腫瘤相關抗原。目前也有利用T細胞受體（T cell receptor TCR）識別腫瘤抗原方法。,腫瘤標志物的分類,瘤標志物目前有100多種。尚未有統(tǒng)一全面的分類標準。常分為血清/血漿腫瘤標志物和組織腫瘤標志物。,血清腫瘤標志物,人體器官與腫瘤標志物,,理想腫瘤標志物的要求,TM檢測臨床意義,輔助臨床早發(fā)現(xiàn)、早診斷幫助區(qū)分區(qū)分良性與惡性腫瘤協(xié)助臨床腫瘤類型鑒定及腫瘤部位鑒別幫助臨床對腫瘤病程判

23、斷治療效果觀察，提前判斷復發(fā),甲胎蛋白,AFP由胚胎卵黃囊、胚胎肝細胞及其他內胚層分化的胃腸組織合成。發(fā)生在妊娠12周，出生后降低。當肝細胞或生殖腺胚胎組織發(fā)生惡性病變時，相關基因重新被激活，細胞重新合成AFP，血液中含量增加。臨床應用： AFP增高為原發(fā)性肝癌重要指標之一。特異性強、敏感度高相對較高。AFP常用于原發(fā)性肝癌臨床檢查及普查。大部分患者呈持續(xù)性高水平升高，部分患者呈低水平增高。,,AFP陰性并不排除原發(fā)性肝癌，據(jù)

24、統(tǒng)計18%-20%的原發(fā)性肝癌患者血清AFP正常。此時需結合臨床及其他檢測指標來降低假陰性。年齡因素：AFP對原發(fā)性肝癌的診斷率隨患者年齡的增加而逐漸下降。對老年人AFP正?；蜉p微升高不能排除肝癌的可能性。預后：原發(fā)性肝癌血清AFP水平與預后有關。肝癌切除后AFP能否正?；蛏仙桥袛囝A后的關鍵因素。,,其他腫瘤 部分卵黃囊腫患者血清AFP上升，胃癌、結腸癌等內胚層衍生的組織發(fā)生的癌，即使未發(fā)生肝轉移也合成AFP。而非內胚層衍

25、生組織的癌，即使轉移到肝臟也不合成AFP，血清AFP是否上升與癌的原發(fā)部位有關。與絨毛膜促性腺激素聯(lián)合檢測有助于生殖細胞腫瘤的分類與分期。,,肝臟良性病變 肝臟良性病變時，AFP也可增高。病毒性肝炎患者AFP輕度增高，慢性肝炎患者約有20%AFP增高。暴發(fā)性肝炎患者AFP明顯增高。病理檢查時可發(fā)現(xiàn)AFP升高與肝細胞再生，同時肝臟受損有關系。,CEA檢測,癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是一種MW

26、為150K～300KD的糖蛋白，1965年Gold和Freedman首先自人結腸癌組織發(fā)現(xiàn)，是胚胎性癌抗原。主要存在于胎兒消化道上皮組織、胰臟和肝臟。正常成人血清中CEA含量極低，惡性腫瘤的癌細胞分泌CEA進入血液和淋巴，導致血中CEA水平增高。 臨床應用： 結腸癌患者70%～90%顯示CEA高濃度陽性，對于CEA升高的結腸癌患者，血清CEA水平與癌腫大小、有無轉移存在一定關系，當發(fā)生肝轉移時，CEA升高更為明顯。,,

27、血清CEA水平變化與結腸癌分期密切相關。明顯升高時主要見于中晚期腫瘤，進展期結腸癌（Duke分期 C、D期）時陽性率可達70%以上，而Duke A、B期時敏感性只有30%左右其他腫瘤 其他消化道腫瘤也可檢測到CEA陽性，如：大腸癌患者可達65%-75%的陽性。CEA與大腸癌的Duke分期有明確關系，可用于治療效果的監(jiān)測；內胚層衍生的癌，如胰腺癌、肺癌以及胃癌可導致CEA水平增高。非內胚層衍生的癌，如乳腺癌和子宮癌也能使CEA水平

28、增高。,,良性腫瘤10%-20%，以及某些內胚層發(fā)生的重癥可以導致CEA增高。CEA檢測對腫瘤術后復發(fā)敏感性很高，可達80%以上。往往早于臨床、病理檢查、X光檢查等。非腫瘤疾病 腸道炎癥、腎功不全、結腸息肉、肝硬化、慢性肝炎、閉鎖性黃疸等也可導致CEA水平增高 CEA并非一種癌的特異性抗原，而是癌的一種相關抗原。缺少特異性，作為篩選指標時應注意。常用于腫瘤患者的監(jiān)測，療效的判斷。,前列腺特異抗原（PSA）,PSA為一種絲氨

29、酸蛋白水解酶，存在于前列腺腺泡和導管上皮細胞胞漿中。在血液中以3種不同分子形式存在，即游離PSA；與a1-抗糜蛋白酶（ACT）結合形成PSA-ACT；與a2-巨球蛋白結合形成PSA-a2M。血液中主要為PSA-ACT。正常情況下前列腺腺泡內容物（富含PSA）與淋巴系統(tǒng)間存在由內皮層、基底細胞層和基底膜構成的屏障相隔。當腫瘤或其他病變破壞了這道屏障時，腺管內容物即可漏入淋巴系統(tǒng)并隨之進入血液，導致血中PSA水平增高。,,臨床意義前列腺癌

30、60-90%血清t-PSA增高術后t-PSA無明顯降低或再次增高，提示預后較差或腫瘤轉移和復發(fā)。前列腺增生、前列腺炎等良性疾病也會有輕度增高。肛門指檢、前列腺按摩、前列腺手術等也會引起增高，注意鑒別，必要時數(shù)周后進行PSA再次檢測。f-PSA/t-PSA檢測比值下降時對前列腺癌診斷意義較大。,CA 19-9,CA19-9(carbohydrate antigen 19-9)是一種粘蛋白型的糖類蛋白腫瘤標志物，為細胞膜上的糖脂質，

31、因由鼠單克隆抗體116NS19-9識別而命名。是迄今報道的對胰腺癌敏感性最高的標志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮等處。,,臨床應用：消化道惡性腫瘤 胰腺癌、肝膽系癌、胃癌、結直腸癌的CA 19-9水平分別是正常均值的幾百倍。而陽性率以胰腺癌為最高，故CA19-9是胰腺癌較好的標志。胰腺癌診斷中的應用： 大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明顯增高。如果

32、以正常參考范圍上限（37 U / mL）為診斷標準，敏感性和特異性均可達90%以上。CA19-9水平與腫瘤的階段有關，血清中含量的高低提示手術的難易程度，術前CA19-9水平對預后有一定提示作用，低者預后較好，術后CA19-9水平降至正常者生存期長于未下降者。,,腫瘤復發(fā)時，CA19-9可再度升高，并且發(fā)生于影像學診斷之前。因此可用作監(jiān)測腫瘤的復發(fā)。其他惡性腫瘤 卵巢癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、食管癌、乳腺癌的陽性率較低。胃癌的陽性率

33、約為25%-60%，且與腫瘤分期有關。對于胃癌患者，同時檢測CEA可提高陽性率。直腸、結腸癌患者，陽性率為18%-58%，與腫瘤分期有關。,,同時測定CEA可提高敏感度，如果治療有效，CA19-9下降速度較CEA快。膽囊癌、膽管癌、膽道癌的CA19-9陽性率較高，使用原則：CA19-9與AFP、CEA聯(lián)合檢查，有助于提高胃腸道腫瘤的診斷效率非腫瘤性疾病 低濃度增高、一過性增高可見于慢性胰腺炎、膽石癥、肝硬化、腎功能不全等。,C

34、A 15-3,屬于糖蛋白類抗原，主要用于乳腺癌的監(jiān)測和篩選，以及用于評價患者預后情況的指標。 臨床應用： 乳腺癌：乳腺癌患者30-50%增高，有轉移灶者增高可達80%，發(fā)現(xiàn)癌轉移的敏感性比癌胚抗原和組織多肽抗原高，且早于臨床發(fā)現(xiàn)轉移。 CA15-3是監(jiān)測病人術后復發(fā)情況，特別是癌癥轉移患者的術后監(jiān)測的重要指標，血清CA15-3水平增高，提示乳腺癌的局部或全身復發(fā)，且增高早于核素檢查和臨床檢查。,,可與CA125聯(lián)

35、合檢查，用于卵巢癌復發(fā)的早期診斷，與CEA聯(lián)合檢測時，可提高乳腺癌早期診斷的敏感性和特異性。其他惡性腫瘤 肺癌、卵巢癌、結腸癌、肝癌等，也可出現(xiàn)血清CA15-3增高。非惡性腫瘤疾病 良性乳腺疾病、卵巢疾病等可引起CA15-3的水平增高。,,2.結直腸癌 結直腸癌在歐美國家發(fā)病率較高。在我國隨著人民生活水平提高，結直腸癌發(fā)病率也呈增高趨勢。主要腫瘤標志物有：（1）CEA：局限性或早期可手術根治的結直腸癌CE

36、A升高低于<10%，而在遠處轉移的患者中CEA增高者可達90%。（2）CA19-9（3）CA72-4（4）CA242（5）組織多肽抗原（TPS）,腫瘤標志物的選擇建議,幾種腫瘤標志物檢測意義,,幾種腫瘤標志物檢測意義,,腫瘤標志物作為體檢項目問題,惡性腫瘤呈上升趨勢的今天，迫切需要簡便、廉價、適用于腫瘤初篩及大規(guī)模人群普查的腫瘤指標。遺憾的是目前實驗室開展的腫瘤標志物檢測項目，普遍不適合于腫瘤普查。所以要避免盲目、隨意、無

37、根據(jù)的挑選腫瘤標志物進行篩查。針對特定區(qū)域某種腫瘤高危人群的檢查，也要選擇特異度及敏感度相對較好腫瘤標志物。也可在體檢其它檢查可疑的基礎上，再以腫瘤標志物檢測。 用蛋白芯片技術注意特異性較差，需用其它方法復查。,目前診治常用檢查提問,,人類具有完善的免疫系統(tǒng)，正常情況下，免疫系統(tǒng)具有識別自我與異己的功能，因而能夠防御異物入侵，而對自身組織不產(chǎn)生或產(chǎn)生極微弱的免疫應答反應，稱自身耐受。一旦機體外部或內部因素發(fā)生改變，可使

38、免疫耐受受到影響，導致免疫系統(tǒng)對自身組織產(chǎn)生明顯的免疫應答反應。如是低限度和非持久性，一般影響不大，高限度和持久存在則引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清學檢測方法很多，特異性較差，動態(tài)檢測可幫助臨床對預后及療效觀察。,第四節(jié)： 自身抗體檢測,熒光免疫技術,目前常用于免疫組化和自身抗體檢測，特點可用于定位。,細胞核,,細胞核,,,,熒光標記抗人Ig,,,,,,,,自身抗體,免疫印跡試驗抗核抗體檢測,2.可提取核抗原抗體檢測 免疫

39、印跡試驗抗核抗體檢測,,自身抗體,,,酶標記抗人Ig,,,,,,,,,,,E,E,,底物,,,E,抗核抗體檢測,1.間接免疫熒光抗體法檢測抗核抗體特點：敏感度高、特異性差，常用于篩查自身免疫性疾病 原理：以Hep-2和鼠肝作為抗原，固定于載玻片上，與受檢者血清反應，血清中抗體與載玻片上抗原結合，再加入熒光標記抗人Ig。在熒光顯微鏡下觀察細胞核上熒光模型。熒光模型主要有：（1）核均質型：相關抗體為抗ds-DNA，抗組蛋白和

40、核小體抗體（2）核膜型：抗核孔復合物和抗板層素（3）顆粒型：抗U1-PNP、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B（4）核點型：P80盤曲蛋白抗體、Sp100抗體、（5）著絲點型：與著絲點抗體相關（6）核仁型：RNP抗體、抗Scl70抗體等相關,ENA自身抗體譜免疫印跡檢測,常見可提取核抗原抗體雙鏈DNASm核糖體Scl-70Jo-1SS-BSS-ARNP,常見自身抗體檢測及臨床意義,名稱

41、 臨床意義類風濕因子（RF）類風濕性關節(jié)炎及其它免疫性疾病抗ds-DNA抗體 SLE的較特異性抗體抗Smith抗體 SLE的較特異性抗體抗組蛋白抗體 藥物性狼瘡及其它免疫性疾病抗核糖核蛋白抗體 混合結締組織病、SLE等抗SS-A和SS-B抗體 干燥綜合癥、SLE、RA等抗Scl-70抗體 系統(tǒng)性硬化癥等抗線粒體抗體 與自身免疫性肝病相關,常見自身抗體檢測及臨床意

42、義,名稱 臨床意義Jo-1抗體 肌炎和間質性肺纖維化抗中性粒細胞胞漿抗體 血管炎癥、自身免疫 性肝病等抗血小板抗體 血小板減少癥抗平滑肌抗體 自身免疫性肝病抗精子抗體 男子不育癥抗心磷脂抗體 SLE、RA等疾病HLA-B27

43、 強直性脊椎炎等,常見自身抗體檢測及臨床意義,名稱 臨床意義抗肌動蛋白抗體： 自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化抗腎小球基底膜抗體： 為抗基底膜抗體腎小球腎炎特異抗體抗中性粒細胞胞漿抗體： 主要見于血管炎癥壞死相關的系列疾病抗心磷脂抗體檢測：與SLE相關，并與血小板減低和自發(fā)性流產(chǎn)相關抗平滑肌抗體檢測： 主要見于自身免疫性肝病抗甲狀腺球蛋白抗體（Tg

44、Ab）：本氏甲狀腺炎、Graves病等促甲狀腺激素受體抗體（TRAb）：Graves病等甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）： 本氏甲狀腺炎等甲狀腺自身抗體檢測要結合激素測定和影像學,第五節(jié)： 感染免疫檢查,人體感染病原體后經(jīng)過一段時間產(chǎn)生抗體一般可持續(xù)數(shù)月或數(shù)年，因此抗體檢測可判斷現(xiàn)癥感染和既往感染情況。,風濕熱是一種變態(tài)結締組織疾病，常見有風濕性心臟病、風濕性關節(jié)炎等。風濕熱常由A 組溶血性鏈球菌引起，此菌可產(chǎn)生一種“O”溶血素

45、具有抗原性，ASLO就是檢測機體產(chǎn)生的抗溶血素“O”抗體。鏈球菌感染后抗“O”的產(chǎn)生一般在一周左右，4-6周達高峰?？梢娪陲L濕性心臟病、風濕性關節(jié)炎、急性腎小球腎炎、呼吸道感染等。ASLO動態(tài)檢測對病程及療效觀察意義較大，結合CRP和ESR檢測臨床意義更大。,抗鏈球菌溶血素“O”檢測（anti-streptolysin O ASLO）,傷寒是由傷寒桿菌引起的急性腸道傳染病。傷寒桿菌有兩種抗原，即菌體抗原“O”抗原和鞭毛抗“H”原。肥達氏

46、反應就是檢測由上述兩種抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體。 肥達氏反應用于輔助診斷傷寒和副傷寒感染，由于抗體產(chǎn)生需要一定時間，故第一周陽性率10%，第二周達60%-70%，第四周達90%。臨床常以二次標本（早期和中期或恢復期）的凝集效價變化來判斷是否感染。傷寒病人的“O”抗體較“H”出現(xiàn)早，存在時間短，“H”相反。預防接種可引起“H”增高，“O”正常。,傷寒和副傷寒沙門氏菌免疫檢測,,肥達氏試驗,流行性腦脊髓膜炎免疫學檢測,流行性腦脊髓膜

47、炎由腦膜炎奈瑟菌所致。檢測腦脊液、血清、尿液中抗原或抗體可輔助流腦的臨床診斷。如檢測到腦膜炎奈瑟菌抗原可作為流腦確診，抗體在感染一周后出現(xiàn)，二月后逐漸下降。接種疫苗抗體可維持一年以上。,結核分枝桿菌主要引起細胞免疫，但也可引起體液免疫產(chǎn)生特異性IgG抗體，臨床常用ELISA方法檢測特異性IgG抗體，PCR方法檢測結核DNA，但兩種方法均存在部分假陽性，樣本找結核桿菌方法最為經(jīng)典。結核菌培養(yǎng)時間長，敏感度低，目前T-SPOT試驗認為對

48、診斷結核敏感度和特異性均較高。,結核抗體和DNA檢測,幽門螺桿菌檢測,幽門螺桿菌（Hp）感染是人類最常見的慢性感染之一，與胃十二指腸等消化系統(tǒng)疾病密切相關。由于HP感染具較大危害性，故近幾年HP檢測方法被高度重視，也取得飛速發(fā)展。目前診斷幽門螺桿菌感染的方法很多，依據(jù)是否需做內窺鏡檢查分為侵入性和非侵入性兩大類 。侵入性常做尿素酶試驗。非侵入性試驗除C13或C14 呼氣試驗外，目前血清學HP是診斷現(xiàn)癥感染較好方法，易于兒童HP感染檢測和

49、體檢普查，現(xiàn)癥感染特異性抗體檢測意義較大。,,布氏桿菌病凝集試驗 布氏桿菌感染病。牧區(qū)多見柯薩奇病毒抗體檢測 心肌炎、手足口病輪狀病毒抗體檢測 嬰幼兒腹瀉嗜異體凝集試驗 EB病毒檢測取代，傳染性單核細胞增多癥漢坦病毒IgM抗體 腎綜合癥出血熱,TORCH感染免疫學檢測,梅毒血請學檢測,當機體感染梅毒螺旋體后，會產(chǎn)生二種抗體，一種為抗類脂抗體，另一種為抗螺旋體抗原抗體，后者較前者特異性強。由于目

50、前螺旋體體外培養(yǎng)較難，故血清學檢測是目前臨床常用檢查方法。常用方法有快速血漿素反應（RPR）和梅毒螺旋體血凝試驗（TPPA），后者特異性高一般用于確定試驗，RPR一般作為現(xiàn)癥感染標志。,梅毒血清學檢測,非特異性與特異性梅毒螺旋體血清學試驗        感染梅毒螺旋體后，人體能夠產(chǎn)生兩類抗體，即非特異性抗體和特異性梅毒螺旋體抗體。   

51、             機體產(chǎn)生的非特異性抗體叫反應素（reagin），是梅毒螺旋體破壞人體組織過程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機體所產(chǎn)生的抗體。一般在感染后5～7周產(chǎn)生，經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。另一種為特異性抗體，既抗梅毒螺旋體抗體，感染兩周后即可測出，IgG類抗體可維持很長時間，有些可終身陽性。梅毒血清學試驗根據(jù)抗原

52、不同分為兩類，一類是非梅毒螺旋體抗原血清試驗，如快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (RPR)、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST)等。另一類為特異性梅毒螺旋體抗體檢測，目前常用實驗為梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA) 。,輪狀病毒抗體或RNA檢測,輪狀病毒分為7組，A組主要引起嬰幼兒腹瀉，B組引起成人腹瀉。快速金標記法糞便中輪狀病毒檢測應用最為廣泛。輪狀病毒IgM抗體檢測，陽性可提示現(xiàn)癥感染。IgG抗體陽性表示既往感染。PCR檢測RN

53、A特異性強，但時間長，影響治療。,傳染性單核細胞增多癥檢測,傳染性單核細胞增多癥由EB病毒感染所致。目前臨床應用EBV-IgM檢測替代嗜異體凝集實驗，特異性較強。少兒期一般都曾經(jīng)感染EBV，在機體抵抗力下降時，或應用免疫抑制劑時會導致EBV復燃，引發(fā)傳染性單核細胞增多癥。,日本血吸蟲抗體檢測機體感染血吸蟲后可產(chǎn)生特異抗體，可作血清IgG、IgM、IgE檢測，幫助臨床診斷和流行病調查。常用方法：環(huán)卵沉淀試驗， ELISA法特異抗體

54、檢測血吸蟲感染早期引起肝、脾腫大，晚期發(fā)展為門脈高壓、巨脾和腹水。簡介囊蟲抗體檢測 豬肉絳蟲的幼蟲寄生人體,機體產(chǎn)生特異抗體.,寄生蟲感染免疫學檢測,CRP是一種急性時相蛋白，由肝臟合成，能激活補體促進細胞吞噬等免疫功能。近年來CRP檢測被廣泛應用。CRP增高特點為：急性期增高明顯，預后降低迅速，且受其它因素影響很小，特異性較差。明顯增高：急性細菌性感染、嚴重創(chuàng)傷、燒傷、大手術、風濕病活動期等。輕度增高：病毒感染、惡性腫瘤

55、、心血管疾 病、肝炎、移植等。 降鈣素原：,丙反應蛋白和冷球蛋白及循環(huán)復合物檢測,艾滋病血清血檢查,艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合癥（acquired immunodeficiency syndrome ADIS）機體感染艾滋病病毒后血清中產(chǎn)生抗體，實驗室一般首先用過篩試驗進行檢測，發(fā)現(xiàn)陽性再作確診試驗。過篩試驗常用酶免疫法，要求敏感性高，不能有假陰性，允許少量假陽性。確定試驗一般用蛋白印跡法，要求敏感性高、特異性高。遇到可疑

56、標本，一般病人三月后復查,我國感染HIV較多為?型。RNA檢測用于檢測病毒載量。,,HIV病毒檢測目前主要為二類：HIV抗體檢測和HIV病毒核酸檢測。篩查試驗：ELISA試驗確診試驗：免疫印跡試驗核酸檢測：PCR,HIV與CD4+T細胞,,第六節(jié) 移植免疫檢查,人類白細胞抗原（human leukocyte antigen,HLA)：由HLA基因復合體所編碼的產(chǎn)物。目前已確定HLA復合體共有372個等位基因，每個基因編碼一種特異性

57、抗原，主要表達在細胞膜上，也有以游離狀態(tài)存在于血液和其它體液中。 HLA可分為Ⅰ類抗原和Ⅱ類抗原。 Ⅰ類抗原存在于所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高，是組織排斥反應的主要抗原。 Ⅱ類抗原主要存在于B細胞和巨噬細胞及其他抗原提呈細胞膜上，與免疫應答和免疫調節(jié)有關。,PCR方法HLA配型,由于免疫學組織配型存在：1）分型用抗血清來源困難 2）受檢者標本必須為新鮮活淋巴細胞 3）實驗干擾因素多，實驗誤差大，目前已較少應用。而PCR基因分

58、析方法目前有標準商品試劑提供，實驗誤差小，簡單快捷，易于標準化。供體和受體之間HLA位點不同易導致急性排斥反應，堿基順序1個或多個不同易導致慢性排斥反應或急性排斥反應。,特定細胞群反應抗體檢測,特定細胞群反應抗體檢測（PRA)是將多種已知抗原淋巴細胞與受體血清和補體共同孵育，如血清中存在與淋巴細胞表面抗原結合的抗體，在補體存在情況下，細胞會發(fā)生溶解。從而判斷患者的免疫狀態(tài)和HLA抗體的特異性。結果以PRA值表示，PRA>50%提示