血液標(biāo)本采集

1、上課啦,,,臨 床 檢 驗 基 礎(chǔ),clinical laboratory technology,臨床檢驗的概念 臨床檢驗的發(fā)展簡史 臨床檢驗在醫(yī)學(xué)中的作用   學(xué)習(xí)臨床檢驗基礎(chǔ)的目的和要求,緒 論 INTRODUCTION,一、概念（Concept or Definition)醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)中的重要分支，醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的主干課程之一“臨床檢驗學(xué)”“臨床檢驗基礎(chǔ)” Rick于1986曾撰寫 “醫(yī)

2、學(xué)顯微鏡技術(shù)(medical microscopy)” 1995年衛(wèi)生部會議（青島） 專家們推薦使用“臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)”,臨床檢驗基礎(chǔ),借助先進(jìn)的檢測技術(shù)，對來自離體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、化學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡形態(tài)學(xué)的檢查，以簡便、快速的檢測結(jié)果，滿足臨床醫(yī)學(xué)檢驗篩檢疾病的要求,二、簡史 (History)公元前400年，希臘名醫(yī)Hippocrates 感官直覺17世紀(jì)末荷蘭人Leeuwenhoo

3、k 顯微鏡 19世紀(jì)末Ehrlich和Romanowsky 染色技術(shù) 1928年 Papanieolaou 脫落細(xì)胞學(xué)現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗的特點,從手工檢測步入儀器自動化、電腦化檢測床邊檢測試劑批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化檢驗方法的標(biāo)準(zhǔn)化全面的質(zhì)量管理和質(zhì)量保證,三、應(yīng)用 (Utilization),1．為準(zhǔn)確診斷、及時治療提供證據(jù),2． 為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù),3．為預(yù)防疾病提供資料4

4、．為配合臨床科研提供可靠數(shù)據(jù),四、臨床檢驗的一般方法,目視檢查： 直接觀察被檢標(biāo)本 理學(xué)檢查： 借助物理學(xué)方法 化學(xué)檢查： 用定性和定量分析的方法 顯微鏡檢查：臨檢的主要檢查手段 自動化儀器檢查,要 求 (Request),1．掌握檢驗的基礎(chǔ)理論2．掌握檢驗的實驗技能3．熟悉檢驗的方法學(xué)評價 4 .了解檢驗項目的參考值5. 熟悉檢驗項目的臨床意義,第一章 血液一般檢驗,第一節(jié) 血液標(biāo)本采集與處理

5、 采血方法 靜脈采血 皮膚采血 真空采血,,血量＜0.1ml的檢驗項目：RBC計數(shù)、WBC計數(shù)、 BPL計數(shù)、Hb測定等,皮 膚 采 血 法,Skin puncture for blood colle

6、ction,[采血部位]WHO推薦采取外周血以左手無名指或中指指尖內(nèi)側(cè)1、手指采血：　 優(yōu)點：方便→獲較多血量→檢查結(jié)果比較恒定　 缺點：與靜脈血仍在某些差異。2、耳垂采血：　 優(yōu)點：痛感輕→ 方便→ 適用于反復(fù)采集　 缺點：血循環(huán)差→受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定　　　　 RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，　　　　特別是冬季。,3、其他部位：　 拇指、拇趾或足跟采血 —— 半歲以下嬰幼兒　 皮膚完

7、整處 —— 嚴(yán)重?zé)齻?[采血針] 三棱針或?qū)Ｓ玫摹安裳槨睘楹?，使用前者?yīng)高壓滅菌， 一人一針。,一、皮膚采血器材（vacuum blood collector ）,2008-10-21,采血器材,[注意事項]1、采血部位皮膚完整。2、無菌技術(shù)操作：防采血部位感染， 一人一針防肝炎、艾滋病。3、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。4、多項檢查時，采

8、血次序為：BPL計數(shù)（不擦第一滴血） →RBC計數(shù)、Hb→WBC計數(shù)與分類。5、取血用于自動化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入 堵塞儀器。,靜 脈 采 血 法 (venipuncture for blood collection),凡需血量較多的檢查＞0.5ml　　如：ESR、Hct、凝血因子的測定等。,[部位] 淺表靜

9、脈均可 常用肘部靜脈，不明顯時可用手背、踝 部， 幼兒可用頸外靜脈。,P4,[注意事項]1、采血前應(yīng)向病人作適當(dāng)解釋：2、檢查注射器：3、止血帶壓迫時間不能過長：4、抽血時，只能向外抽，不能向內(nèi)推：,兩種采血方法的優(yōu)缺點比較,皮膚采血,靜脈采血,缺點,限制了重復(fù)實驗和追加實驗，標(biāo)本量少，局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入,不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響

10、有形成分的形態(tài),優(yōu)點,價廉、快速、操作簡便，標(biāo)本可直接測定,標(biāo)本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實驗和追加其他實驗,,三、真空采血法（40年代，美國BD公司）（vacuum tube for blood collection）,套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點：血樣無需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少 溶血現(xiàn)象，保持血液標(biāo)本的完整 性，使檢驗結(jié)果更加

11、準(zhǔn)確，也有 利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的 交叉感染和環(huán)境保護(hù)。 缺點：真空采血管價格較高,2.真空采血器材 I.采血針,2008-10-21,II.持針器,2008-10-21,2008-10-21,醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站www.med126.com,III.真空采血管,2008-10-21,血液標(biāo)本采集的質(zhì)量保證,一、采血服務(wù) 1.環(huán)境要求 a）

12、 空間 b）窗口 2.生物安全 a）防止交叉感染 b）履行環(huán)境消毒,二、患者狀態(tài)要求（自學(xué)）,三、采血操作對檢驗結(jié)果的影響,1.采血時間2.采血部位3. 采血體位4.壓脈帶使用5.輸液6.溶血,血標(biāo)本溶血：　 ①注射器和容器：干燥、清潔。　②抽血速度不能太快?！、鄢檠獣r避免產(chǎn)生大量泡沬?！、艹檠髴?yīng)先拔針頭，再注入。?、菘鼓荒苡昧φ袷帯！、揠x心速度不能過高。,一、血液標(biāo)本

13、運(yùn)輸 1.唯一標(biāo)識原則 2.生物安全原則 3.盡快運(yùn)輸原則二、標(biāo)本拒收,,血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存與處理,三、血液檢驗前的預(yù)處理,1.分離血清或血漿2.分離細(xì)胞,分離后的標(biāo)本 ： 一般應(yīng)置于4℃，保存一個月的標(biāo)本 ， 應(yīng)-20 ℃冰箱。保存3個月以上的標(biāo)本，分離 后應(yīng)該-70 ℃保存。立即送檢標(biāo)本檢測后的標(biāo)本標(biāo)本

14、信息的保存,四、血液標(biāo)本保存,二、抗凝劑選擇,1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）,2. 草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）,a. 抗凝原理：草酸鈣沉淀,b. 使用方法： 草酸鈉 0.1mol/L 和血液1：9,c. 適用范圍： 止血學(xué)檢驗 (制備正吸漿)。,d. 不適用于：對凝血因子V保護(hù)功能差， 影響PT測定；沉淀物影響 自動凝血儀的使用。,5.

15、乙二胺四乙酸（EDTA）鹽,a. 抗凝原理： 螯合鈣離子,b. 使用方法： 15g/L濃度EDTA 和血液 1：10,適用范圍： 對血細(xì)胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、 Hct,不適用于：影響血小板聚集和白細(xì)胞吞噬功能, 不宜凝血象檢查和血小板功能試驗。,物理方法抗凝 脫纖維蛋白：

16、 將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動， 纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血 成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗和紅斑性狼瘡 細(xì)胞檢查。,第二節(jié) 血涂片制備和細(xì)胞染色,血涂片的制備方法血涂片制備的注意事項血液細(xì)胞染色細(xì)胞染色時注意事項,一、血涂片的制備技術(shù),血涂片的用途： 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗、網(wǎng)織紅、 異常細(xì)胞、寄生蟲檢驗。,2. 血涂片制備步驟：（手工推片法）,〈一〉玻片清潔： 1、新

17、玻片處理：　有游離堿質(zhì)。 2、用過玻片處理： 3、使用中玻片處理：只能持玻片邊緣， 保持清潔、干燥、 中性、無油膩。,P 6,〈二〉血涂片制作：,揮動使之干燥，而后在血膜上寫編號或病人姓名。,,將推玻片向1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的寬度后，以一定

18、均勻的速度向2的方向滑動。,〈三〉影響因素：,二、血液細(xì)胞染色,細(xì)胞染色技術(shù),（一）染料 （天然染料和人工染料） 發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染 組織親合。,堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核 的染料。如亞甲藍(lán)、天青。,酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒 烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩

19、類，能結(jié)合 細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、 嗜酸性顆粒成分等。,3. 復(fù)合染料： 同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料,（二）細(xì)胞染色原理：,1. 物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等,化學(xué)作用： a. 染料的化學(xué)成分： 助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的

20、酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。,b. 蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)： 蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同 數(shù)量的氨基（-NH2）和 羧基（-COOH），同時還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時， -NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負(fù)電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。,c. 周圍環(huán)境的酸堿度： 如環(huán)境pH＜pI（ pI 為等電點），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸

21、性染料；反之， pH＞ pI，則結(jié)合堿性染料。 PH↓→　H＋增多　→　易與伊紅結(jié)合　→　染色偏紅 PH↑→　H＋減少　→　易與美藍(lán)結(jié)合　→　偏藍(lán),（三）細(xì)胞染色法的類型 1. 普通染色法： 經(jīng)物理和/或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合 2. 熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡 3. 細(xì)胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等 4. 細(xì)胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)

22、顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分。 細(xì)胞免疫化學(xué)染色法 （應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)）,瑞氏染色法,（一）染色原理 分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青 B與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、

23、 血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。,（二）試劑 1. Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml,磷酸鹽緩沖液（PBS）： （PH6.4－6.8） 磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g, 蒸餾水加到1000ml。

24、 配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。,,,,,,,,,,,1,2,3,3. 染色方法： a. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10 分鐘。 d. 用清水沖洗，待干后鏡檢。,注意事項： a. 血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落

25、 b. 染色時間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)， 一般染液淡、染色時間長些效果好。 c. 染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。 d. 沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料 沉著。沖洗時間也不能長。 e. 染色過淡，可復(fù)染。 f. 染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色,姬姆薩染色法,（一）染色原理： 基