雞馬立克氏病流行與防控

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院-哈爾濱獸醫(yī)研究所深圳2014年4月29日,雞馬立克氏病流行及防控,劉 長(zhǎng) 軍,雞馬立克氏病,1907發(fā)現(xiàn)--1961-病原-MDV、命名--中國(guó)-70年代主要感染雞和火雞淋巴細(xì)胞的溶細(xì)胞感染和T-細(xì)胞淋巴瘤最早出現(xiàn)在3-4周，高峰在12-30周年齡易感性--日齡越小易感性越高-- 1日齡雛雞比10日齡以上雛雞易感性高幾百倍水平傳播--羽毛囊上皮細(xì)胞--復(fù)制病毒--長(zhǎng)期排毒--通過(guò)空氣傳播發(fā)病率-- 5%～

2、30%,Map of the evolution of MD incidence. Colors represent the current existence of MD outbreaks as followed: red=current MD outbreaks; yellow=no current MD outbreaks; grey=data not available. The existence of MD outbre

3、aks during 1990s is indicated by vertical stripes,秘魯,俄羅斯,尼日利亞,摩洛哥,葡萄牙,中國(guó),雞馬立克氏病導(dǎo)致臟器腫瘤及神經(jīng)腫瘤,馬立克氏病引起免疫器官萎縮,胸腺,法氏囊,對(duì)照 vv vv+,Introduction,馬立克氏病病原-----MDV,MDV屬于α皰疹病毒科、馬立克氏病病毒屬。MDV粒子由核芯、

4、核衣殼、被膜和囊膜組成，在感染細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)直徑為85-160 nm的六邊形裸露顆粒即核衣殼。偶爾也能見(jiàn)到150-160 nm的有囊膜的病毒粒子；基因組為雙股線(xiàn)性DNA長(zhǎng)度約為166-180Kb 。,,MDV分類(lèi),Introduction,MDV的復(fù)制,早期溶細(xì)胞感染潛伏感染第二次溶細(xì)胞感染腫瘤增生-產(chǎn)生成熟病毒粒子,早期溶細(xì)胞感染,MDV在羽毛囊上皮細(xì)胞中的復(fù)制,淋巴器官 神經(jīng)組織、羽毛囊上皮

5、腫瘤,新特點(diǎn),宿主范圍擴(kuò)大—火雞感染發(fā)病混合感染—REV、ALV（雞病毒重組-LTR的插入）；NDV；細(xì)菌；霉菌毒力增強(qiáng)—突破不同MD疫苗的保護(hù)作用急性發(fā)病癥狀—3-4周齡即開(kāi)始出現(xiàn)腫瘤，8-9周齡時(shí)已很?chē)?yán)重，并能在3周齡引起特別嚴(yán)重的短暫麻痹，從而導(dǎo)致很高的死亡率 不同日齡雞感染性—Rosenberg等，注射和同居接觸19、34 和49日齡的SPF雞，出現(xiàn)臨床發(fā)病和腫瘤病變,Introduction,MDV毒力進(jìn)化,MDV毒力

6、越來(lái)越強(qiáng)：m—溫和型、v—強(qiáng)毒力型、vv —超強(qiáng)毒力型、vv+ —超超強(qiáng)毒力型,臨床癥狀由主要是慢性多發(fā)性神經(jīng)炎轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟l(fā)性神經(jīng)炎和內(nèi)臟淋巴瘤 、內(nèi)臟淋巴瘤、神經(jīng)癥狀、嚴(yán)重的腦水腫和急性死亡,國(guó)內(nèi)MD發(fā)病情況--黑龍江病例（多發(fā)性腫瘤）,圖1 ，2， 3分別為牡丹江地區(qū)病料（瘤化的卵巢、腸系膜和脾臟）。圖4，5分別為大慶地區(qū)病料（瘤化的卵巢和腫大的肝臟）,青腳黃雞3/3MD+， 1/3只AL+,270日齡，900只 海蘭褐，病死近1

7、00只，,吉林省病例（多發(fā)性腫瘤）圖1為發(fā)病雞，2和3為系膜瘤，4為肝臟瘤。,長(zhǎng)春，8/11 MD+，5000只，至110日齡，死1000,遼寧省病例（混感） 圖1為肌肉瘤， 2為瘤化的腺胃， 3為瘤化的肝臟。,4萬(wàn)套，海蘭褐蛋種雞，110日齡發(fā)病，A亞群ALV 9/11 AGP-2/11，MD+，PCR-3/8MD+ 公雞40%A亞群,江蘇病例（烏雞和麻雞）腎臟腫,,40和60日齡，10

8、%,山東,110日齡，10000只，發(fā)病20-30%，9/10 MD+,腺胃腫瘤化為特征的病例,大連,沈陽(yáng),腺胃腫瘤化為特征的病例,哈爾濱,牡丹江,脾臟腫瘤,2011 -2013年MDV流行病學(xué)檢測(cè),---我國(guó)MDV呈經(jīng)常性、普遍性散發(fā)狀態(tài),省 雞場(chǎng) 病料 陽(yáng)性雞場(chǎng) 陽(yáng)性病料 陽(yáng)性率,,,MDV與REV、ALV和CAV的混合感染（2011 -2013）,---混合感

9、染是常見(jiàn)現(xiàn)象,MDV分離毒株特性,注：NA表示未知，“—”表示未檢測(cè)。,MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）符合強(qiáng)、弱毒的分子特征,177bp,10株MDV分離毒株對(duì)SPF雞的致病性,MDV流行毒株對(duì)雞具有高致病性,5株MDV分離毒株對(duì)免疫雞（CVI988疫苗）的致病性,---MDV致病性增加；現(xiàn)有疫苗對(duì)某些毒株不能提高完全保護(hù)。,MDV與REV混感和分子重組,一個(gè)混感感染病例 2011年某雞場(chǎng)商品蛋雞，40日齡開(kāi)

10、始發(fā)病。癥狀--腺胃炎，腺胃腫；雞瘦小；有死亡；無(wú)明顯腫瘤。送檢雞--52日齡。檢測(cè)結(jié)果—MDV+、REV+,電鏡,負(fù)染,切片,,,MDV,REV,存在MDV和REV病毒粒子,----高發(fā)病率、高致死率、高腫瘤率；突破疫苗保護(hù).,致病性,分離株攻毒 -腺胃MDV腫瘤特征,腫瘤組織病理學(xué)觀察,組織上以多形態(tài)的淋巴細(xì)胞增生浸潤(rùn)為基礎(chǔ)，包括小型、中型和大型淋巴細(xì)胞。即，細(xì)胞的大小不一，形態(tài)各異。細(xì)胞核淡明，核仁大

11、而明顯。浸潤(rùn)范圍廣泛，取代原來(lái)的正常組織（腺胃）。腺胃的腫瘤細(xì)胞可見(jiàn)多數(shù)的異常核分裂像。同時(shí)可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞的壞死（核濃縮）,CVI988-分離株組,-----腫瘤的差異REV腫瘤特征,腫瘤細(xì)胞為成淋巴細(xì)胞。細(xì)胞大小均一，細(xì)胞核淡明，核仁1-數(shù)個(gè)。細(xì)胞漿淡染，細(xì)胞界限不明顯。未見(jiàn)核分裂像。腫瘤細(xì)胞呈占位性，呈局灶性浸潤(rùn)。腫瘤組織病灶通常呈圓形或類(lèi)圓形。未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞凋亡和壞死。,背景：反轉(zhuǎn)錄病毒—REV在皰疹病毒MDV基因組中的插入,

12、重組基礎(chǔ)混合感染現(xiàn)象---商業(yè)雞群---多致瘤病毒共感染共同的宿主---淋巴細(xì)胞和相同的微環(huán)境，MDV-感染B和T淋巴細(xì)胞，轉(zhuǎn)化T；ALV引起骨髓細(xì)胞轉(zhuǎn)化MDV和ALV都在成纖維細(xì)胞中復(fù)制，ALV胸腺，法氏囊中復(fù)制；REV，淋巴細(xì)胞或網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞中復(fù)制反轉(zhuǎn)錄病毒為了自身復(fù)制，可以整合到任何雙鏈DNA中（宿主、MDV、HVT、禽痘病毒）,細(xì)胞中相同的復(fù)制位置,REV在MDV基因組中的插入驗(yàn)證Hot-Spot

13、 PCR（REV和MDV上下游交叉引物檢測(cè)，病毒重組的驗(yàn)證）,MDV pBAC-C全基因組序列,IRs區(qū)插入的相對(duì)位置（MDV Md5）,,,,,,,,LTR,MDV086（細(xì)胞質(zhì)蛋白）,MDV085 （預(yù)測(cè)蛋白）,MDV083（反義RNA蛋白）,MDV084 （ICP4）,,,,MDV087 （MDV1 S2 ）,MDV088 （ICP22）,MDV089 （Us10 ）,,IRs區(qū),TRs區(qū)

14、插入的相對(duì)位置（MDV Md5）,,,LTR,,MDV097 （MDV1 S2 ）,,,MDV096 （gE ）,,MDV095 （gI ）,,MDV098 （細(xì)胞質(zhì)蛋白）,,MDV099 （預(yù)測(cè)蛋白 ）,,MDV101 （反義RNA蛋白）,,MDV100 （ICP4 ）,,TRs區(qū),插入重組的意義：反轉(zhuǎn)錄病毒是混亂宿主和皰疹病毒遺傳物質(zhì)的元件之一。這種重組可能改變MDV的組織趨向性、傳

15、播方式、致病性、疫苗保護(hù)性---MDV的進(jìn)化？,MDV meq序列-88株，測(cè)定序列-63株（2006-2013）參考序列-25株（中國(guó)分離毒株-11株，國(guó)外毒株-14株）我們測(cè)的63株中除了3株位于弱毒分支外，其他的60株位于一個(gè)獨(dú)立進(jìn)化分支（不同于國(guó)外的毒株）。,MDV meq,我國(guó)MDV流行毒株處于一個(gè)獨(dú)立的進(jìn)化分支,,,,A： MDV毒株的長(zhǎng)重復(fù)區(qū)遺傳進(jìn)化樹(shù),B：MDV毒株的短重復(fù)區(qū)遺傳進(jìn)化樹(shù),,,15株MDV（

16、全基因組）分子進(jìn)化,,,,,MD的防控,防止雛雞MDV野毒早期感染控制混感---重組、加重MD？免疫特點(diǎn)---非清除性抗腫瘤免疫、占位干擾作用---超感染和超感染抑制？---控制傳播疫苗---毒株？---感染程度？免疫劑量二次免疫,控制污染源 - 抗病力 - 免疫,MD疫苗株的應(yīng)用,Four generations of MD Vaccines:致弱的血清1型毒株(1970)HVT (197

17、0s)雙價(jià)苗HVT+ SB1 (1983)CVI988 (Rispens株) (1990s)，“814”株,我國(guó)MD疫苗使用情況,曾經(jīng)使用的疫苗： HVT、CVI988、“814”、HVT+SB1、HVT+Z4、HVT+SB1+“814”、 CVI988+ HVT,當(dāng)前主要使用的疫苗：種雞、蛋雞-CVI988、“814”、HVT、CVI988+ HVT 肉雞-主要為HVTHVT-IBDV-VP2---“立克法”

18、“威力克”,814弱毒疫苗種毒株的建立,策略：自然弱毒中篩選、建立---弱毒疫苗種毒株優(yōu)點(diǎn)---安全性好、穩(wěn)定性好和免疫效力好。黑龍江省牡丹江（白洛克和來(lái)航）---多年沒(méi)有發(fā)生MD--毒株培育：K株---DEF、CES；---“814” S株---DEF、QEF--毒株血清型和致病性：血清1型，自然弱毒株,安全性：（1）接種雞12個(gè)月-（2）回歸易感雞10代免疫原性：實(shí)驗(yàn)

19、室免疫攻毒（J-1株）K株的KC25和45代（穩(wěn)定性）--PI：88.9傳代特點(diǎn):1.KC50-非融合細(xì)胞---50-120代也很少見(jiàn)2.病毒粒子的數(shù)量較多-幾乎每個(gè)細(xì)胞都有病毒粒子3.容易見(jiàn)到---有囊膜的完全病毒粒子母源抗體干擾---HVT、“814”免疫雞群,MD疫苗“814”株---凈化凈化必要性---強(qiáng)細(xì)胞嗜性---禽源RNA病毒、支原體污染---免疫失敗的主要原因之一 ---MDV 814病毒