表達馬立克氏病病毒gI基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫保護作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究以MDV gI為研究對象,以雞痘病毒(FPV)中國株為載體,構(gòu)建表達MDV gI基因的重組雞痘病毒(rFPV),在構(gòu)建成功表達MDV gI的rFPV的基礎(chǔ)上,進一步分析rFPV-gI的穩(wěn)定性及雞對rFPV-gI的抗體反應(yīng)性,然后研究它的免疫保護效力,為研制rFPV-MDV-gI基因工程疫苗,進一步開發(fā)多價MDV基因工程重組疫苗奠定基礎(chǔ).根據(jù)MDV 648A株病毒基因組gI基因序列,我們設(shè)計了兩個引物,用PCR擴增出MDV gI基因

2、.通過瓊脂糖凝膠電泳,獲得一條1060 bp DNA條帶,與MDV gI基因的大小是一致.在此基礎(chǔ)上,用Qiagen公司膠回收試劑盒來純化PCR產(chǎn)物.結(jié)果顯示,rFPV感染的CEF有很強的熒光,而FPV(wt)感染的CEF沒有熒光.說明MDV gI得到表達,此表達MDV gI基因rFPV命名為rFPV-MDV 648gI.用rFPV-MDV648gI感染CEF,傳代20次后,此rFPV仍然能夠在CEF上穩(wěn)定復(fù)制.用10<'4>PFU r

3、FPV-MDV648gI及FPV(wt)分別接種1日齡SFP雞,飼養(yǎng)于帶正壓過濾空氣隔離器中,接種前及接種后20天采血收集血清,用間接免疫熒光法(IFA)分析血清與感染MDV的CEF反應(yīng)情況.結(jié)果表明接種FPV-MDV648gI后雞血清中含有抗gI抗體.此結(jié)果表明表達MDVgI基因的rFPV有一定程度的抗超強毒株免疫保護力.該研究是國內(nèi)外首次報導(dǎo)構(gòu)建表達MDV gI基因重組FPV,首次證實rFPV-MDVgI具有一定程度的抗超強毒株免疫

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