表達(dá)雞傳染性喉氣管炎強(qiáng)毒gB基因的重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫效力.pdf

1、雞傳染性喉氣管炎(ILT)是由雞傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)引起的雞的急性上呼吸道傳染病。該病分布于世界各地，可引起雞的死亡和產(chǎn)蛋下降而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，被國(guó)際獸醫(yī)局(OIE)列為B類疾病。目前國(guó)內(nèi)外防制本病普遍采用弱毒疫苗。該疫苗雖然具有較好的免疫效果，但所有的弱毒疫苗都存在：毒力普遍偏強(qiáng)，接種后反應(yīng)大；也能引起潛伏感染，使雞終生帶毒；可以由接種雞傳染給非接種雞，在傳播過程中毒力會(huì)返強(qiáng)等缺點(diǎn)。國(guó)內(nèi)雖已有商業(yè)化的表達(dá)ILTV糖蛋白g

2、B的重組雞痘病毒，但免疫效果受FPV母源抗體的干擾。因此，急需研究更安全、有效的疫苗用于防制和消滅ILT。 本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，外源基因插入不同復(fù)制非必需區(qū)影響重組雞痘病毒抵抗母源抗體干擾的能力，其中利用本室構(gòu)建的轉(zhuǎn)移載體p12LS獲得的rFPVs都表現(xiàn)出較大的抗母源抗體干擾優(yōu)勢(shì)。糖蛋白gB是ILTV的205kDa糖蛋白復(fù)合物，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的體液免疫和細(xì)胞免疫，是ILTV的主要保護(hù)性抗原和感染所必需蛋白，與病毒吸附和穿

3、入細(xì)胞有關(guān)。本研究根據(jù)已發(fā)表的ILTV中國(guó)王崗株的gB基因序列，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物，通過PCR方法擴(kuò)增了ILTV中國(guó)王崗株的gB基因，并將之克隆入pGEM-Teasy載體后進(jìn)行測(cè)序，得到了陽性質(zhì)粒pTgB。將pTgB中的ILTV糖蛋白gB基因再亞克隆至雞痘病毒(FPV)轉(zhuǎn)移載體p12LS中，得到了p12LSgB。將p12LSgB轉(zhuǎn)染被親本雞痘病毒LP感染的CEF。經(jīng)藍(lán)斑篩選、純化后獲得的同源重組病毒rFPV-ILTVgB通過PCR方法

4、鑒定，證明其基因組中含有ILTV糖蛋白gB基因，間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)也證明該重組病毒在其感染的CEF中表達(dá)了ILTV糖蛋白gB。 用該重組病毒rFPV-ILTVgB、商品化的ILTV弱毒苗及FPVLP株分組免疫35日齡的SPF雞(每組10只雞，分組隔離飼養(yǎng))。并設(shè)非免疫對(duì)照組(5只雞)。其中rFPV-ILTVgB和FPVLP株以106PFU/只的劑量、ILTV弱毒苗以1羽份/只的劑量進(jìn)行免疫接種。免疫后21天用ILTV中國(guó)

5、王崗株以0.4mL劑量喉內(nèi)接種攻毒，通過檢測(cè)免疫后ILTV抗體水平、攻毒后發(fā)病率與死亡率等指標(biāo)評(píng)價(jià)疫苗的免疫保護(hù)效力，比較重組雞痘疫苗與常規(guī)弱毒苗之間的免疫效力差異。從攻毒后的免疫保護(hù)情況看，重組雞痘病毒(50％的發(fā)病率和0％的死亡率)比非免疫對(duì)照組(100％發(fā)病率和60％死亡率)和FPVLP免疫組(100％的發(fā)病率和10％死亡率)好，但比弱毒免疫組(30％的發(fā)病率和0％的死亡率)差一些。這可能與重組疫苗僅表達(dá)gB基因，抗原相對(duì)單一，糖