總結(jié)ctdna檢測(cè)

1、基于分子標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)的 NSCLC 精準(zhǔn)治療實(shí)踐,林能明 杭州市第一人民醫(yī)院 杭州市轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心,,概述,生物標(biāo)記物(Biomarker)是近年來(lái)隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)和基因組學(xué)技術(shù)的發(fā)展而提出的一類與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、疾病發(fā)生等有關(guān)的標(biāo)志物。生物標(biāo)志物能反映正常生理過(guò)程或病理過(guò)程或?qū)χ委煾深A(yù)的藥物反應(yīng)，在早期診斷、疾病預(yù)防、藥物靶點(diǎn)確定、藥物反應(yīng)以及其他方面發(fā)揮作用。尋找和發(fā)現(xiàn)有價(jià)值的生物標(biāo)記物已經(jīng)成為目前腫瘤

2、領(lǐng)域研究的一個(gè)重要熱點(diǎn)。,基于分子標(biāo)志物的腫瘤靶向治療,,概述,靶基因檢測(cè)是實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)個(gè)體化治療的關(guān)鍵,,概述,靶人群,臨床獲益,延長(zhǎng)有效率延長(zhǎng)生存改善生活質(zhì)量,靶向治療：有明確的靶向目的基因的藥物、靶人群及有效的檢測(cè)方法。而準(zhǔn)確的檢測(cè)是實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療的基礎(chǔ)與關(guān)鍵,敏感高效的驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè),靶向目的基因藥物,基于臨床分期的經(jīng)典NSCLC治療方案,,概述,驅(qū)動(dòng)基因分型成就NSCLC個(gè)體化精準(zhǔn)治療,肺癌分期從組織分型到分子分型的變革，以EG

3、FR突變?yōu)榇淼腡KI治療是靶向治療前驅(qū)與典范易瑞沙對(duì)EGFR突變患者受益率達(dá)71.2%，效果明顯優(yōu)于化療，對(duì)無(wú)突變患者受益率僅為1.1%,,概述,,Li TH et al. J Clin Oncol 2013 31 1039-1049,作為金標(biāo)準(zhǔn)的組織靶基因檢測(cè)亦存在局限性,,一、ctDNA檢測(cè)技術(shù),外周血中游離腫瘤DNA的來(lái)源,,ctDNA檢測(cè),組織與血液配對(duì)標(biāo)本EGFR突變的研究回顧,,ctDNA檢測(cè),外周血（DHPLC）檢測(cè)與

4、組織檢測(cè)EGFR突變及其與TKI靶向藥物治療的療效,外周血（ARMS）檢測(cè)與組織檢測(cè)EGFR突變及其與TKI靶向藥物治療的療效,,,外周血檢測(cè)EGFR突變與TKI治療療效,Mok T, et al. 2013 Lancet Oncology,Bai , et al. J.Clin.Oncol:2009,Overall Survival,,ctDNA檢測(cè),ARMS技術(shù)：血液ctDNA基因檢測(cè),,ctDNA檢測(cè),非小細(xì)胞肺癌EGFR突變陽(yáng)性

5、患者經(jīng)TKI治療失敗后血漿游離腫瘤DNA中T790M突變頻率及豐度的前瞻性觀察研究 多中心研究 PI: 馬勝林教授 研究發(fā)起方：杭州市第一人民醫(yī)院集團(tuán),,,ctDNA檢測(cè),TKI治療失敗的不同臨床模式下的耐藥分子模型,科學(xué)問(wèn)題：耐藥的分子模式尚未明確研究方法：ARMS檢測(cè)技術(shù)結(jié)合ddPCR技術(shù),研究目的:非小細(xì)胞肺癌EGFR突變陽(yáng)性患者經(jīng)TKI治療失敗后，觀察：血漿游離腫瘤DNA中T790M突

6、變頻率及豐度不同進(jìn)展模式下突變頻率及豐度的差異,,ctDNA檢測(cè),男性或女性患者（>18歲）組織或細(xì)胞學(xué)確診NSCLCTKI治療前為IIIB-IV期TKI治療有效后出現(xiàn)PD（符合Jackman耐藥標(biāo)準(zhǔn)）,取外周血5ml X 4管,收集患者臨床病理資料記錄腫瘤不同進(jìn)展模式無(wú)癥狀疾病進(jìn)展有癥狀疾病進(jìn)展胸內(nèi)局部進(jìn)展顱內(nèi)進(jìn)展其它進(jìn)展,ARMS法檢測(cè),ddPCR法檢測(cè),主要指標(biāo)：觀察TKI治療失敗后患者血漿游離腫瘤DNA

7、中T790M突變頻率及豐度，并比較不同進(jìn)展模式下突變頻率及豐度的差異,次要指標(biāo)：評(píng)估T790M突變頻率及豐度與患者臨床病理特征的相關(guān)性,篩選入組,入組后處理,T790M突變檢測(cè),結(jié)果分析,數(shù)據(jù)分析,,,,研究方案,N＝300,,ctDNA檢測(cè),,,ctDNA檢測(cè),現(xiàn)有方法血液檢測(cè)特異性90%以上 假陽(yáng)性率低但靈敏度從43-100%不一 尚有提升的空間,對(duì)現(xiàn)有方法的進(jìn)一步優(yōu)化, 探索高靈敏度的檢測(cè)方法, 以提高血液檢測(cè)的靈敏

8、度積累前瞻性的臨床研究數(shù)據(jù),以進(jìn)一步推動(dòng)血液檢測(cè)在臨床的應(yīng)用實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)血液活檢, 更好預(yù)測(cè)療效或耐藥是方向,小 結(jié) (1),,ctDNA檢測(cè),經(jīng)驗(yàn)性多藥聯(lián)合方案，方案的合理、有效性無(wú)法預(yù)見(jiàn)。同病不同治、同人不同治如何判定？在取得療效的同時(shí)，如何避免或減輕副作用？成本和療益相關(guān)性不好，加重國(guó)家和個(gè)人經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。,腫瘤個(gè)體化治療越來(lái)越受到臨床醫(yī)生、患者及其家庭的關(guān)注,傳統(tǒng)化療的困境與挑戰(zhàn),,二、CD-DST技術(shù)（膠

9、滴腫瘤藥敏檢測(cè)技術(shù)）,原代培養(yǎng)成功率、試驗(yàn)成功率低藥物接觸濃度過(guò)高→ 真陽(yáng)性率低 （藥敏試驗(yàn)判斷為敏感的抗癌藥物實(shí)際臨床效果不顯著）無(wú)法區(qū)分混在一起的成纖維細(xì)胞和癌細(xì)胞缺乏臨床驗(yàn)證數(shù)據(jù),,CD-DST技術(shù),傳統(tǒng)體外抗癌藥物敏感性試驗(yàn)的問(wèn)題點(diǎn),新型體外抗癌藥物敏感性試驗(yàn)幫助化療藥物選擇,,medium,新型體外抗癌藥物敏感性試驗(yàn)方法：CD-DST法,,CD-DST技術(shù),CD-DST技術(shù)實(shí)現(xiàn)個(gè)體化化療方案制定,方法要點(diǎn) 體

10、外藥物敏感性檢測(cè)技術(shù) 膠原凝膠液滴包埋技術(shù) 原代腫瘤細(xì)胞三維維培養(yǎng) 在凝膠滴外添加藥物 圖像分析系統(tǒng),檢測(cè)流程,,,CD-DST技術(shù),檢測(cè)流程,21,比較兩組無(wú)復(fù)發(fā)生存,對(duì)象：stage II-IIIB非小細(xì)胞肺癌病例,,根治手術(shù),術(shù)后輔助化療,,,,CD-DST試驗(yàn),,versus,(n=41),大阪府立成人病中心　呼吸器外科,非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助化療,,CD-DST技術(shù),22,Days aft

11、er operation,大阪府立成人病中心　呼吸外科＆腫瘤內(nèi)科,,75%,治療方案；CDDP+VNRCDDP+DOCCBDCA+PACCDDP+GEM,31%,2年無(wú)復(fù)發(fā)生存率A群75% vs　 P=0.05B群31%※復(fù)發(fā)幾率降低,對(duì)象：p-Stage II-IIIB 非小細(xì)胞肺癌切除病例,P=0.05,PFS,非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助化療,,CD-DST技術(shù),CD-DST技術(shù)采用膠原凝膠三維立體及無(wú)血清

12、培養(yǎng)體系，從技術(shù)原理上彌補(bǔ)了傳統(tǒng)體外抗癌藥物敏感性試驗(yàn)法的缺陷，可較客觀的再現(xiàn)體內(nèi)的藥物敏感性。目前有大量關(guān)于CD-DST指導(dǎo)化療預(yù)后改善的臨床驗(yàn)證數(shù)據(jù)，并應(yīng)用于臨床。在非臨床領(lǐng)域，CD-DST技術(shù)可應(yīng)用于抗腫瘤新藥的研發(fā)及新型藥敏標(biāo)志物的篩選等。,小 結(jié) (2),,CD-DST技術(shù),腫瘤實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的困難與挑戰(zhàn),如何有效的監(jiān)測(cè)，使用什么手段進(jìn)行監(jiān)測(cè)？,,三、CTC檢測(cè),腫瘤實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的意義,Nature Medicine V

13、olume: 19, 1450–1464,,方面一：監(jiān)測(cè)腫瘤動(dòng)態(tài)，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù),方面二：療效的及時(shí)評(píng)價(jià)，耐藥及機(jī)制的檢測(cè)，及時(shí)調(diào)整并選擇有效治療方案,,CTC檢測(cè),循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC),實(shí)體瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞在外周血循環(huán)中大多數(shù)短期內(nèi)發(fā)生凋亡，或被吞噬，極少數(shù)高度活力與轉(zhuǎn)移潛能的存活下來(lái)發(fā)展為轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞進(jìn)入外周血循環(huán)是發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移先決條件，外周血中檢測(cè)到腫瘤細(xì)胞預(yù)示著發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能,Canc

14、er Res. 2003;63: 3805-11.；Breast Cancer Res. 2009;11:R46.；Am J Pathol. 2011;178:989-96.,,CTC檢測(cè),,美國(guó)FDA相繼批準(zhǔn)CellSearch用于前列腺癌、結(jié)直腸癌患者的預(yù)后評(píng)估,,,1986年,2004年,2007/2008年,2012年,1986年Thomas Ashworth首次在1例轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到CTC,美國(guó)FDA批準(zhǔn)

15、CellSearch用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預(yù)后預(yù)測(cè),中國(guó)CFDA批準(zhǔn)CellSearch用于乳腺癌患者的預(yù)后 分析,CTC檢測(cè)發(fā)展歷程,,CTC檢測(cè),CTC檢測(cè)技術(shù)實(shí)現(xiàn)腫瘤動(dòng)態(tài)檢測(cè),,CTC檢測(cè),CTC 用于實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),,我們的研究團(tuán)隊(duì)對(duì)接受放射治療的非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行外周血CTC監(jiān)測(cè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)：放療前，放療期間，放療后。隨訪4周,CTC數(shù)量的變化與疾病狀態(tài)的變化密切相關(guān),,CTC檢測(cè),合作伙伴益善生物提供,游離CTCs

16、作為TNM輔助分期,,CTC檢測(cè),Clin Cancer Res. 2009 Nov 15;15(22):6980-6,CTC數(shù)量和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移呈密切的相關(guān)性CTC提高TNM輔助分期準(zhǔn)確性，成為指導(dǎo)肺癌治療和判斷預(yù)后的敏感指標(biāo)？,對(duì)腫瘤疾病狀態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的影響 CTCs動(dòng)態(tài)的計(jì)數(shù)，分型使得能夠其在傳統(tǒng)診療技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化對(duì)腫瘤狀態(tài)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)對(duì)實(shí)時(shí)個(gè)體化治療的影響 CTCs的分子分析，有望綜合反映腫瘤分子

17、病理學(xué)背景，實(shí)時(shí)提供腫瘤分子信息，推進(jìn)腫瘤實(shí)時(shí)的個(gè)體化治療個(gè)體化治療時(shí)代腫瘤實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的實(shí)現(xiàn) 還需要突破性技術(shù)對(duì)CTCs進(jìn)行分離、分型和分析，將腫瘤狀態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和腫瘤個(gè)體化治療有機(jī)結(jié)合,小 結(jié) (3),,CTC檢測(cè),術(shù)前新輔助治療,術(shù)后輔助治療,手術(shù),,,,,,,,四、總結(jié),ctDNA檢測(cè)、CD-DST技術(shù)和CTC檢測(cè)在NSCLC治療中的綜合應(yīng)用,檢測(cè)外周血ctDNA,活檢組織標(biāo)本+手術(shù)標(biāo)本,2、篩選體外敏感的化

18、療藥物,1、篩選適用EGFR-TKI的靶人群,外周血捕獲CTC,3、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤發(fā)展、藥物響應(yīng),,調(diào)整治療方案,,局部晚期治療,,,,總結(jié),ctDNA檢測(cè)、CD-DST技術(shù)和CTC檢測(cè)在NSCLC治療中的綜合應(yīng)用,手術(shù)或活檢組織標(biāo)本,三維培養(yǎng)原代細(xì)胞,2、篩選對(duì)放療敏的人群,1、體外篩選敏感的化療藥物,外周血捕獲CTC,3、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤發(fā)展、藥物響應(yīng),,調(diào)整治療方案,,ctDNA檢測(cè)、CD-DST技術(shù)和CTC檢測(cè)在NSCLC治療中的

19、綜合應(yīng)用,晚期治療,檢測(cè)外周血ctDNA,活檢組織標(biāo)本,2、篩選體外敏感的化療藥物,1、篩選適用EGFR-TKI的靶人群,,,外周血捕獲CTC,3、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤發(fā)展、藥物響應(yīng),,調(diào)整治療方案,,,總結(jié),,Population Screening,,Targeted Therapy,Optimal Chemotherapy,OR,,Fluid Biopsy Analysis,,Regimen Optimization,,總結(jié),Precis