突發(fā)傳染病的實驗室診斷

1、突發(fā)傳染病的實驗室診斷,,全球預警和最新消息,埃博拉疫情新華社雅加達11月4日電 印度尼西亞研究人員在加里曼丹島的紅毛猩猩體內(nèi)發(fā)現(xiàn)埃博拉病毒。埃博拉病毒通常由血液和其他體液傳播，可以通過接觸傳染，傳播速度很快。這種病毒是人類迄今所發(fā)現(xiàn)致死率最高的病毒之一，目前尚無有效療法。,裂谷熱疫情,世界衛(wèi)生組織11月1日證實，非洲國家毛里塔尼亞自今年9月中旬起暴發(fā)裂谷熱疫情，截至10月30日，該國共報告34個病例，17人死亡。裂谷熱是

2、一種病毒性人畜共患疾病。,登革熱疫情,世界衛(wèi)生組織報告，葡萄牙近期暴發(fā)登革熱疫情。登革熱由感染了登革熱病毒的伊蚊通過叮咬傳播，人感染后3天~14天會出現(xiàn)癥狀。澳門特區(qū)政府衛(wèi)生局5日證實，再接獲1名新增登革熱本地病例報告，包括之前的14例病例，澳門至今已累計錄得15例登革熱確診病例。,變異型H3N2流感病毒,美國疾病預防控制中心報告，截至2012年8月31日，美國共有301個豬傳人的變異型H3N2流感病毒(H3N2v)病例報告，其

3、中2011年11個，2012年截至8月31日289個。在2012年7月至8月期間，共有15名病人需住院，1名病人死亡。感染個案癥狀和嚴重性類似季節(jié)性流感,新型冠狀病毒,世界衛(wèi)生組織報告，發(fā)現(xiàn)兩例與新型冠狀病毒感染有關(guān)的病例，兩名患者都曾在沙特阿拉伯逗留。國際旅行和出入境健康提示--新型冠狀病毒感染的預防,傳染病流行,傳染病在人群中發(fā)生流行的過程，即病原體從感染者排出，經(jīng)過一定的傳播途徑，侵入易感者機體而形成新的感染，并不斷發(fā)生、

4、發(fā)展的過程。傳染病在人群中發(fā)生流行需要三個基本條件，也稱三個環(huán)節(jié)，即傳染源、傳播途徑和易感人群。,,,,實驗室檢測 快速 準確 簡便 大樣本,重點傳染病-有國家規(guī)劃或項目覆蓋的病種 艾滋病、肺結(jié)核、血吸蟲病以及瘧疾、包蟲病、布病等確定控制目標和策略強有力的國家規(guī)劃和國際項目國家免疫規(guī)劃針對傳染病“五苗七病”基礎(chǔ)上增加到15種傳染病維持無脊髓灰質(zhì)炎狀態(tài)、消除麻疹逐步納入新的疫苗可預防傳染病

5、重點監(jiān)控傳染病 鼠疫、霍亂、SARS、HPAI 等發(fā)現(xiàn)個別病例，即采取強力控制措施，以防播散其它傳染病監(jiān)測與暴發(fā)的預防控制建立地區(qū)性控制項目或規(guī)劃新發(fā)傳染病 提高監(jiān)測和識別能力提高應(yīng)對能力，加強應(yīng)對準備降低發(fā)生風險,我國傳染病預防控制的策略框架,實驗室診斷策略,免疫學診斷技術(shù) Ag—Ab質(zhì)譜分析技術(shù)、納米技術(shù)、生物傳感器技術(shù),分子診斷技術(shù) DNA/RNA,一、免疫學診

6、斷技術(shù),1、抗原的基本特性 免疫原性和抗原性2、抗體特性： 1）特異性結(jié)合抗原 2）激活補體 3）結(jié)合細胞 4）可通過胎盤及粘膜 5）抗原性 7）Fc受體3、抗原抗體反應(yīng)的三大特征特異性、比例性、可逆性,,1、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,2011年諾貝爾獎——免疫活化的關(guān)鍵原理,2011年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予Bruce A

7、. Beutler, Jules A. Hoffmann an和Ralph M. Steinman.,ELISA技術(shù)在傳染病診斷的應(yīng)用,血清中抗原抗體的檢測雙抗原夾心法用于檢測HIV抗體雙抗體夾心法檢測HBsAg、間接法用于檢測HCV抗體等,2、免疫層析診斷技術(shù),膠體金的標記硝酸纖維膜（NC膜）層析技術(shù)免疫層析診斷技術(shù)快速、操作簡單、穩(wěn)定性好、成本低靈敏度低于ELISA,膠體金免疫層析技術(shù)在傳染病診斷的應(yīng)用,常規(guī)的乙肝五

8、項檢測項目HCV抗體、HIV抗體等檢測項目甲型H1N1流感抗原膠體金試劑,3、化學發(fā)光技術(shù),化學發(fā)光（chemiluminescence）：又稱為冷光，它是在沒有任何光、熱或電場等激發(fā)的情況下由化學反應(yīng)而產(chǎn)生的光輻射。常見的化學發(fā)光劑和化學發(fā)光體系：魯米諾過氧化草酸酯酸性高錳酸鉀四價鈰吖啶酯化合物,魯米諾早在1853年就被合成出來了。1928年，化學家首次發(fā)現(xiàn)這種化合物有一個奇妙的特性，它被氧化時能發(fā)出藍光。,刑偵學

9、應(yīng)用在檢驗血痕時，魯米諾與血紅素hemoglobin，發(fā)生反應(yīng)，顯出藍綠色的熒光。這種檢測方法極為靈敏，能檢測只有百萬分之一含量的血。,化學發(fā)光技術(shù)在傳染病診斷的應(yīng)用,化學發(fā)光分析法結(jié)合ELISA技術(shù)國內(nèi)企業(yè)：乙肝 HBsAg、HCV抗體、HIV抗體試劑獲準上市法國生物梅里埃公司的HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑VIDAS HIV Duo、VIDAS HIV Ultro已在我國獲準上市羅氏診斷的HIV抗原抗體試劑,4、時間分辨免疫

10、熒光分析法,芬蘭的Wallac公司建立，其標記物為Eu3+標記的抗原或抗體，在熒光增強液的作用下，抗原抗體復合物上結(jié)合的Eu3+離子從免疫復合物解離，迅速與熒光增強液中的配體整合并進入疏水內(nèi)核，使得半衰期較長的Eu3+熒光得以成千萬倍的放大，從而產(chǎn)生高靈敏度的免疫分析。,時間分辨熒光免疫分析法在傳染病診斷的應(yīng)用,國內(nèi)兩家企業(yè)，HBsAg、HCV抗體、HIV抗體試劑等獲準上市。,5、免疫組織化學法,免疫組織化學（Immunohistoch

11、emistry，IHC）是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應(yīng)使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。,二、分子生物學診斷技術(shù),分子生物學診斷技術(shù)：應(yīng)用分子生物學方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達水平的變化而做出診斷的技術(shù)。分子診斷的材料包括DNA、RNA核酸。常規(guī)技術(shù)種類 1）聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）；

12、 2）DNA測序（DNA sequencing）； 3）熒光原位雜交技術(shù)（FISH）； 4）DNA印跡技術(shù)（ DNA blotting ）； 5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）； 6）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）； 7）基因芯片技術(shù)（gene chip）。,聚合酶鏈式反應(yīng),聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction)，簡稱PCR，用于放大特定的DNA

13、片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復制。1995年，美國科學家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學獎，他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。,,,1995年，美國科學家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學獎，他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。心靈裸舞,應(yīng)用于傳染病診斷的分子生物學技術(shù),靶序列的擴增 DNA/RNA PCR/RT-PCR（DNA） NASBA(RNA)

14、 LAMP(DNA)信號擴增 bDNA技術(shù),RT-PCR,N基因RT-PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳鑒定M：DNA marker DL2000；1：PCR product of SARS-N gene form gargle；2：PCR product of SARS-N gene form lung tissue；3：PCR product of SARS-N gene form spleen

15、tissue。,,bp 2 0001 000750500250100,,M 1 2 3,,,1287bp,,,pcdna3.1-N sep,NASBA,,三、納米技術(shù),納米技術(shù)的迅速發(fā)展也為微生物診斷提供了重要的手段。如用固相納米粒子結(jié)合四色熒光進行超速的DNA測序。納米生物芯片和微陣列用于微生物鑒定。納米共聚焦分光鏡分辨微生物感染細胞。用

16、熒光標記的納米量子點(QD)檢出細胞內(nèi)病毒或其他微生物。量子點技術(shù)快速檢測HCV核心抗原。,四、生物傳感器技術(shù),國際上用生物傳感器技術(shù)檢測環(huán)境(空氣、飲用水、食品等)中的微生物已取得巨大進步。常用的傳感器有電化學、壓電、光學傳感器等?；驹硎窃诮饘倌ど献R別與檢測能起相互作用的物質(zhì)發(fā)生信號變化。表面等離子體諧振(surfase plasmon resonesonance，SPR)生物傳感器技術(shù)。SPR技術(shù)在金屬膜或芯片上固定標記

17、的特異性核酸探針．與被檢的核酸結(jié)合后，入射光作用下發(fā)生共振信號，儀器檢測到其反應(yīng)動力學的參數(shù)。已有報告用SPR芯片檢測常見病原微生物，包括：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、淋病奈瑟菌、銅綠假單胞菌，脲原體及人乳頭瘤病毒等，與培養(yǎng)的結(jié)果一致。用此技術(shù)也可檢測金黃色葡萄球菌的腸毒素B。,五、宏基因技術(shù)等,宏基因組學也稱環(huán)境基因組學或群體基因組學，是利用現(xiàn)代基因組技術(shù)直接研究自然狀態(tài)環(huán)境中的微生物有機體群落，而不需要分離培養(yǎng)成單一的微生物。

18、宏基因組學為研究微生物生態(tài)學、微生物與環(huán)境的關(guān)系、微生物間的關(guān)系及感染形成的原因具有重要的價值。,原位雜交技術(shù),肺組織免疫電鏡（ 18nm 135 000 × ）,肺組織SARS-N蛋白原位雜交,病毒分離技術(shù),流感病毒分離,雞胚尿囊腔接種法病毒的動物接種法－小白鼠腦內(nèi)接種,國內(nèi)快速診斷研究趨勢,埃博拉病毒,埃博拉病毒可在人間造成嚴重的病毒性出血熱疫情。病毒性出血熱疫情的病死率高達90%。埃博拉出血熱疫情主要發(fā)生在中非和

19、西非靠近熱帶雨林的邊遠村莊。該病毒通過野生動物傳播到人，并且通過人際之間傳播在人群中蔓延。大蝙蝠科果蝠是埃博拉病毒的自然宿主。無論對人還是對動物都沒有治療辦法或者疫苗。,埃博拉出血熱重大疫情年表（截至2012年5月）,,埃博拉病毒實驗室檢測,酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）抗原檢測試驗血清中和試驗?zāi)孓D(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）通過細胞培養(yǎng)進行病毒分離檢測取自病人的樣本具有極端生物危害風險，只有在最高級別的生物防護條

20、件下才可進行操作。,癥狀和體征,埃博拉出血熱是一種嚴重、急性病毒性疾病，其特征往往是起病急，有發(fā)熱、極度虛弱、肌肉疼痛、頭痛和咽喉痛癥狀。隨后會出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、皮疹、腎臟和肝臟功能受損，某些情況下會有內(nèi)出血和外出血?；灲Y(jié)果顯示白血細胞和血小板計數(shù)降低，而肝酶則會升高。人的血液和分泌物中含有病毒時就會具有傳染性。實驗室獲得性病例在起病后高達第61天時，仍從其精液中分離到了埃博拉病毒。潛伏期（從獲得感染到出現(xiàn)癥狀的時間間隔）從2天至2

21、1天不等。發(fā)生埃博拉出血熱疫情時，病死率在不同的疫情之間存有差別，處于25％和90％之間。,裂谷熱,裂谷熱是一種病毒性人畜共患病，主要影響的是動物，但也能傳染人。傳染可導致人畜患染嚴重疾病。該疾病因裂谷熱感染的牲畜死亡和流產(chǎn)，也會造成重大經(jīng)濟損失。絕大多數(shù)人間感染是與受感染動物的血液或器官直接或間接接觸所造成的。有證據(jù)顯示，人若攝入未經(jīng)高溫消毒或未煮過的被感染的動物的奶，也可能感染裂谷熱。受感染蚊子叮咬也會導致人間感染，通常是伊

22、蚊叮咬。嗜血（食血）蒼蠅也有可能傳播裂谷熱病毒。迄今尚無文件證明有裂谷熱在人間傳播的病例，在采取了標準感染控制預防措施后，也未見有關(guān)裂谷熱傳播給衛(wèi)生保健人員的報道。沒有證據(jù)顯示在城市地區(qū)暴發(fā)裂谷熱。,裂谷熱的實驗室檢測,急性裂谷熱可采用不同方法進行診斷。酶聯(lián)免疫分析一類的血液檢測（ELISA），可證實存在特異性IgM病毒抗體。采用各種不同方法，包括病毒傳播（在細胞培養(yǎng)或接種過的動物身上）、抗原檢測試驗和擴增核糖核酸基因組（RT

23、-PCR），在發(fā)病早期階段或在尸體解剖組織中，均可檢出此種病毒。,臨床癥狀,人體輕度感染裂谷熱癥狀： 裂谷熱潛伏期（從感染到出現(xiàn)癥狀）為2至6天。 受感染者一般無任何檢出癥狀，也可出現(xiàn)輕度的疾病反應(yīng)，有發(fā)燒癥候，即突然感冒發(fā)燒、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)疼痛和頭痛。 一些患者出現(xiàn)脖子僵硬、畏光、食欲減退和嘔吐癥狀；這些人在發(fā)病初期可能會被誤診為腦膜炎患者。 裂谷熱癥狀通常持續(xù)4至7天，此后通過抗體出現(xiàn)即可

24、檢出免疫反應(yīng)，血液中的病毒也隨之逐漸消失。人體重度感染裂谷熱癥狀： 盡管大多數(shù)人間病例病情相對較輕，但仍有少數(shù)患者出現(xiàn)相當嚴重的癥狀。通常會出現(xiàn)三種明顯綜合征中的一種或多種癥候：眼部（眼睛）疾?。?.5-2%的患者）、腦膜炎（不到1%）或出血熱（不到1%）。不同流行病的總的病例致死率差異很大，但總體來說，記載的這些致死率不到1%。大多數(shù)死亡是有出血性黃疸癥狀的患者。,治療和疫苗,由于大多數(shù)裂谷熱人間病例病癥相對較輕且持續(xù)

25、期短，這類患者不需要任何特定的治療。對于較為嚴重的病例，主要的治療方法是一般支持性療法?，F(xiàn)已開發(fā)出一種用于人體的滅活疫苗。不過，此種疫苗沒有獲得許可證，因而尚未投放市場。作為實驗，它用于保護有接觸裂谷熱極大危險的獸醫(yī)和實驗室人員。目前正在對其他候選疫苗進行研究。,登革熱和登革出血熱,登革熱是一種蚊媒病毒感染。感染導致流感樣癥狀，有時還會發(fā)展為可能致命的并發(fā)癥，稱為重癥登革熱。近幾十年全球登革熱發(fā)病率大幅度增長?，F(xiàn)在，約有一半世界

26、人口面臨登革熱的危險。登革熱發(fā)生在全球熱帶和亞熱帶氣候地帶，多在城市和半城市地區(qū)。重癥登革熱在亞洲和拉丁美洲一些國家是導致兒童嚴重患病和死亡的一個主要原因。對登革熱/重癥登革熱沒有特異治療辦法，但及早發(fā)現(xiàn)和適宜的醫(yī)護可將死亡率降到1%以下。預防和控制登革熱取決于有效的病媒控制措施，包括個人防護、持續(xù)的病媒控制措施和化學控制。,臨床癥狀,登革熱是一種嚴重流感樣疾病，影響嬰兒、幼兒和成人，但極少引起死亡。如果高熱（40°

27、C）伴隨以下癥狀中的兩種，則須考慮登革熱：嚴重頭痛、眼球后疼痛、肌肉和關(guān)節(jié)痛、惡心、嘔吐、腺體腫脹以及出疹。癥狀通常在被感染蚊子叮咬之后經(jīng)4-10天潛伏期后出現(xiàn)，持續(xù)2-7天。重癥登革熱是一種有可能因血漿滲漏、積液、呼吸窘迫、嚴重出血或器官損傷導致死亡的并發(fā)癥。最初癥狀出現(xiàn)3-7天后會在溫度（38°C）下降的同時出現(xiàn)一些預警跡象，包括：嚴重腹痛、持續(xù)嘔吐、呼吸急促、牙齦出血、全身乏力、煩躁不安、嘔吐物帶血。隨后24-48小時

28、為治療關(guān)鍵階段，患者可能死亡，需要進行適當醫(yī)護處理以避免并發(fā)癥和死亡風險。,登革熱的實驗室診斷,病毒分離：將急性期患者血清接種于新生（1～3日齡）小白鼠腦內(nèi)、猴腎細胞株或白紋伊蚊胸肌內(nèi)分離病毒，第1病日陽性率可達40%，以后逐漸減低，在病程第12d仍可分離出病毒。最近采用白紋伊蚊細胞株C6/36進行病毒分離，陽性率高達70%。補體結(jié)合試驗分型，可達到快速診斷的目的。RT-PCR：在病毒感染后5-6小時即可診斷，在病毒感染2日內(nèi)可進行

29、病毒分型，具有敏感性高、特異性強、檢測時間短等優(yōu)點，但易出現(xiàn)假陽性，未在臨床廣泛應(yīng)用。,治療和疫苗,沒有針對登革熱的特異治療方法。對于重癥登革熱，具有經(jīng)驗，并且了解該病情況和進程的醫(yī)生和護士可以挽救生命 - 把死亡率從20%多降低到不足1%。重癥登革熱醫(yī)護的核心在于保持患者的體液量。尚沒有預防登革熱的疫苗。,變異型H3N2流感病毒,流感病毒最初是在1932年分離出來，屬于正黏液病毒科的單株成員，據(jù)世界衛(wèi)生組織稱，它每年在每個國家按季

30、節(jié)或零星出現(xiàn)，導致25萬到50萬人死亡，另有幾百萬人因此罹患重癥。實際上，大流行性H1N1病毒已經(jīng)在豬身上與H3N2病毒重配，形成變異的H3N2（H3N2v）病毒，自2011年7月以來，在美國有12個人受到感染，雖然人際傳播有限，但構(gòu)成了潛在的大流行威脅。,新型冠狀病毒,冠狀病毒屬于一類大型家族病毒，已知該病毒可使人和動物患病。以前從未在人間或動物中發(fā)現(xiàn)這一新型毒株。截至2012年9月28日，已確定發(fā)生兩例病例。這兩例病例為：今年6

31、月死亡的一名沙特阿拉伯公民，以及一名具有去沙特阿拉伯王國旅行史的卡塔爾公民。該卡塔爾公民于9月11日用飛機被轉(zhuǎn)運到英國，現(xiàn)在英國住院。有報道稱，最新確定的新型冠狀病毒與SARS類似。這是否正確？ 該新型冠狀病毒在基因方面與SARS存有很大不同。目前，尚沒有證據(jù)表明這一新型冠狀病毒已經(jīng)出現(xiàn)人與人傳播。然而，正在對感染者的接觸者進行追蹤，一旦完成了這方面工作，情況會愈加清晰。癥狀 就兩例確診病例而言，出現(xiàn)的癥狀為

32、急性、嚴重呼吸道疾病，伴有發(fā)熱、咳嗽、氣短及呼吸困難。衛(wèi)生工作者是否面臨新型冠狀病毒的風險？ 到目前為止，沒有證據(jù)表明該病毒可在人與人之間傳播，這包括衛(wèi)生保健工作者。世衛(wèi)組織建議，衛(wèi)生保健工作者應(yīng)當采取與其它急性呼吸道感染相同的感染控制措施。,今后傳染病防控工作的重點,改進監(jiān)測系統(tǒng)，提高傳染病暴發(fā)早期發(fā)現(xiàn)能力加強傳染病實驗室監(jiān)測體系建設(shè)持續(xù)提高暴發(fā)調(diào)查和處理能力加強傳染病流行病學、實驗室診斷技術(shù)、疫苗與免疫、疾病臨床