實驗室生物安全操作及管理

1、實 驗 室生物安全操作及管理,,一、定義和概念,1. 生物因子 biological agents 微生物和生物活性物質(zhì)。2.危險 hazard 可能導(dǎo)致死亡、傷害或疾病、財產(chǎn)損失、工作環(huán)境破壞或這些情況組合的根源或狀態(tài)。3.危險識別 hazard identification 識別存在的危險并確定其特性的過程。4.風(fēng)險 risk 危險發(fā)生的概率及其后果嚴重性的綜合。,5.氣溶膠

2、 Aerosol 懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為 0.001-100μm的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的穩(wěn)定的分散體系。6.微生物危害評估Hazard Assessment for Microbes 對實驗微生物和毒素可能給人或環(huán)境帶來的危害所進行的評估。7.污染 contamination 物質(zhì)或事物由外來的物質(zhì)或因子而造成的不希望的影響。8.去除污染 decontamination

3、 為了安全，去除或減少污染物（原）或其影響的過程或方法。,9.傳染控制 control of infection plan 在實驗室建立的限制感染擴散的程序。 10消毒 disinfection 減少細菌芽胞除外的微生物的數(shù)量，不需殺滅或清除全部的微生物。11.滅菌 sterilization 有效致使目的物沒有微生物的過程。12.消毒劑 disinfectant,13.凈化

4、 clean 去除生物和非生物的所有類型污染的過程。14. 高效空氣過濾器 HEPA High Efficiency Particulate Air Filter 通常以0.3μm 微粒為測試物，在規(guī)定的條件下濾除效率高于99.97%的空氣過濾器。15.實驗室生物安全laboratory biosafety 實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)

5、及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標準等對實驗室生物安全責任的要求。,16. 物理防護設(shè)備Containment Device 用物理或機械方法防止病原體逸出的設(shè)備。 17. 排風(fēng)罩（煙罩） extraction hood（fume hood） 實驗室設(shè)備上面的排除空氣或煙霧的箱體或罩體，避免其在室內(nèi)循環(huán)。18. 安全罩 safety hood 覆蓋在生物醫(yī)學(xué)實驗室工作臺或儀器

6、設(shè)備上的相抵于環(huán)境為負壓的排風(fēng)罩，以減少實驗室工作者的危險。,19.生物安全柜biological safety cabinet，BSC 具備氣流控制及高效空氣過濾裝置的操作柜，可有效降低實驗過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠對操作者和環(huán)境的危害。20.個人防護裝備 personal protective equipment 用于防止人員受到化學(xué)和生物等有害因子傷害的器材和裝備，包括衣服。,21.生物醫(yī)學(xué)實驗

7、室 biological and medical laboratory 為人類健康和社會生產(chǎn)的發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)，進行人體和動、植物科學(xué)觀察和試驗的實驗室。22.生物安全防護實驗室 Biosafety containment for Laboratories 通過規(guī)范的實驗室設(shè)計建造、實驗設(shè)備的配置、個人防護裝備的使用，嚴格遵從標準化的工作操作程序和管理規(guī)程等，確保操作生物危險因子的工作人員不

8、受實驗對象的傷害，確保周圍環(huán)境不受其污染,確保實驗因子保持原有本性所采取綜合措施的實驗室。,23.獸醫(yī)實驗室 veterinary laboratory 一切從事獸醫(yī)病原微生物、寄生蟲研究與使用，以及臨床診療、檢疫、監(jiān)測的實驗室。24.人畜共患病 zoonosis 人和動物間相互傳播的傳染病。25.外來病 exotic disease 國外存在和流行的，但國內(nèi)尚未證實存在或已被

9、消滅的傳染病。26.壓力梯度 Relative Pressure 兩個壓力測量點間氣壓的差值。,27.實驗室分區(qū) classification of laboratory area 在生物安全實驗室中按照實驗因子污染的概率分區(qū)。27.1. 清潔區(qū) 在正常工作中沒有實驗因子污染的可能。27.2.半污染區(qū) 在正常工作中沒有污染，只是存有潛在輕微污染的可能。27.3.污染區(qū)

10、 在正常工作中一般沒有污染，但有一定的較大和較嚴重的污染機會。,28.氣鎖air lock 具備機械送排風(fēng)系統(tǒng)、整體消毒滅菌條件、化學(xué)噴淋（適用時）和壓力可監(jiān)控的氣密室，其門具有互鎖功能，不能同時處于開啟狀態(tài)。29. 單向鎖定 unilateralism lock 一個門鎖定后，另一個門才能開啟30. 安全資料數(shù)據(jù)單 material safety data sheets (MSDS) 詳細提供

11、的危險因素及預(yù)防信息的技術(shù)報告。,P3和BSL-3的不同31、P：physical containment level（lab.)的字頭,即（物理屏障水平（實驗室））32、BSL：biosafety level（或BL）即：生物安全水平—— P只強調(diào)物理屏障的作用，—— BSL—則反映必須采取綜合措施才能達到生物安全的本質(zhì)特點。,二、實驗室生物安全防護水平分級,根據(jù)對所操作生物因子采取的防護措施，將實驗室生物安全防護

12、水平分為4級： 1.安全防護水平I級 生物安全防護水平為一級的實驗室適用于操作在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物； 2.安全防護水平Ⅱ級 生物安全防護水平為二級的實驗室適用于操作能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物,3.安全防護水平III級

13、 生物安全防護水平為三級的實驗室適用于操作能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物 4.安全防護水平Ⅳ級 生物安全防護水平為四級的實驗室適用于操作能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。,三、生物危險評價,評價內(nèi)容 1. 微生物的傳染性和致病性 2.傳播途徑 3.微生物的穩(wěn)定性

14、 4.感染劑量 5.微生物濃度 6.來源 7.動物研究數(shù)據(jù)的可用性 8.預(yù)防和治療,微生物的危險評價常常是涉及以下范疇： 1.已知的傳染微生物 2.未知傳染微生物 3.基因修飾微生物 4未知是否有未知傳染性的生物材料 5.動物實驗,美國CDC/NIH對微生物指導(dǎo)性分類第一類，不引起健康成年人疾病第二類，可通過破損皮膚、消化道及粘膜暴露等方式引起人

15、 類疾病第三類，本土或外來的微生物，通過吸入途徑暴露時可以造 成嚴重或潛在致死性疾病第四類，可以引起嚴重且威脅生命的人類疾病，可通過氣溶 膠傳播，或相關(guān)的傳播危險性不明的微生物 生物安全防護實驗室根據(jù)不同的微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別。,,當建設(shè)、使用傳染性或有潛在傳染

16、性材料的實驗室前，必須進行微生物危害評估。 通過微生物危害評估確定對象微生物應(yīng)在哪一級的生物安全防護實驗室中進行操作。根據(jù)危害評估結(jié)果，制定相應(yīng)的操作規(guī)程、實驗室管理制度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。,四、生物安全,（一）生物安全水平1.生物安全水平分級,1.生物安全水平（biosafety level，BSL） 以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4（bio-safety l

17、evel，BSL）表示僅從事體外操作的實驗室的相應(yīng)生物安全防護水平 以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4（animal bio-safety level，ABSL）表示包括從事動物活體操作的實驗室的相應(yīng)生物安全防護水平。,2.生物安全的重要性,（1）    反生物恐怖的需要 （2）    應(yīng)對緊急衛(wèi)生事件的需要（3） &

18、#160;  防止外來生物危險因子侵入的需要（4）    實驗室工作的需要 （5）    防止醫(yī)院感染的需要（6）    防止人畜共患病的需要,3.生物安全的由來,生物恐怖醫(yī)院感染實驗室感染動物實驗室感染,動物實驗中的安全,（1）帶進實驗室的動物應(yīng)進行檢查處理,勿使帶有體外寄生蟲和傳染病。（2）已接種動物不得

19、與健康動物混合飼養(yǎng)。要單獨飼養(yǎng)在相應(yīng)安全級別的隔離室內(nèi)。（3）接觸動物時,特別是猴、狗等大動物,要戴防護手套和穿防護靴。要針對各種動物行為特點,采取相應(yīng)措施防止被其抓咬。 實驗室內(nèi)任何死亡動物必須經(jīng)技術(shù)人員鑒定后才可處理，一般都應(yīng)予以焚燒。實驗動物尸體焚燒前應(yīng)裝于密封塑料袋內(nèi)以防擴大污染 要強調(diào)的是，動物感染微生物時，安全防護的級別要比感染微生物原有危險級別提高一級。,能夠產(chǎn)生微生物氣溶膠的活動,接種環(huán)操作

20、，吸管操作，針頭和注射器操作： 培養(yǎng)和劃線培養(yǎng)，混合微生物懸液;吸管操作液體溢出在固體表面，排除注射器中的空氣;從塞子中拔出針頭;接種動物;針頭從注射器上脫落噴出毒液;離心;使用攪拌機、混合器、超聲波儀和混合用的儀器;打開培養(yǎng)容器；感染性材料的溢出；在真空中凍干和過濾；接種雞胚和培養(yǎng)物的收取。,4.生物威脅的來源,生物安全與生物威脅是雙胞胎： 首先，各種致病微生物的威脅, 其次，是外來生物入侵。據(jù)199

21、9年康乃爾大學(xué)公布的研究結(jié)果說明，美國外來生物入侵所造成的直接經(jīng)濟損失每年都達1226億美元。 再次，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，世界上出現(xiàn)了越來越多的轉(zhuǎn)基因生物，轉(zhuǎn)基因生物存在著一定風(fēng)險。體健康。 第四, 生物恐怖事件,5.保障生物安全的主要措施,A.區(qū)域劃分，圍場操作，避免逃逸。B.負壓過濾，通風(fēng)，高空排放。C.滅菌消毒D.初級防護 E. 次級防護,（二）生物安全條件,1.國際常見市售生物安全

22、柜及其型號 BSC BSC-1 BSC-2 IIB-1 IIB-2 IIB-3 BSC-3,2.II級生物安全柜的安裝,(1)生物安全柜在安裝搬運過程中，嚴禁將其側(cè)倒放置和拆卸，到搬入安裝現(xiàn)場后拆開包裝。(2)生物安全柜安裝位置在設(shè)計未指明時應(yīng)避開人流頻繁處，并應(yīng)避免房間氣流對操作口空氣幕的干擾。 (3) 如果實驗室有窗戶，應(yīng)始終保持關(guān)

23、閉。安全柜不能安裝在房間通風(fēng)系統(tǒng)的進口，以免氣流直接吹到安全柜正面的操作口和排風(fēng)濾器上。(4) 安全柜的周圍應(yīng)留出12英寸(304.8 mm)的空間，以便于清除贓物。如果由于空間限制，至少應(yīng)在兩邊留出3英寸(76.2 mm)，背面留出1.5英寸(38.0 mm)。應(yīng)在安全柜的電源處留出足夠的空間，以便于在不移動安全柜的情況下，就可以進行維修。(5)安裝的生物安全柜的背面、側(cè)面離墻壁距離應(yīng)保持在80～300mm之間。底面和底邊緊貼地面

24、的安全柜，所有沿地邊的縫隙應(yīng)加以密封。(6)生物安全柜的排風(fēng)管道的連接方式，必須以更換排風(fēng)過濾器方便來確定。,3.II級生物安全柜的檢測試驗,下列情況之一時，必須對II級生物安全柜進行現(xiàn)場檢測：（1）實驗室施工時，在II級生物安全柜搬到指定位置后。（2）II級生物安全柜移動位置時。（3）對II級生物安全柜進行檢修后。（4）II級生物安全柜更換過濾器后。（5）II級生物安全柜的一年一度的常規(guī)檢測。,4.現(xiàn)場檢測的必測項目,垂

25、直氣流速度斷面測定。所用儀器方法是：（1）儀器：準確度為讀數(shù)±3%的熱球風(fēng)速儀。（2）方法：測點為柜內(nèi)送風(fēng)口下方0.15m處，為均勻測點。測點間距不大于0.12m.測點布置不少于3行，靠內(nèi)壁的行距內(nèi)壁0.15m,每行不少于7個測點。（3）判定：垂直氣流均勻區(qū)所測平均風(fēng)速與生產(chǎn)廠家給定值之差±0.025m/s,且單點風(fēng)速與所測平均風(fēng)速之差不大于20%為合格。,5.工作窗口進風(fēng)風(fēng)速測定,（1）方法：采用JGJ

26、-90潔凈室施工及驗收規(guī)范中所規(guī)定方法 測定生物安全柜對應(yīng)工作窗口進風(fēng)風(fēng)量的排風(fēng)風(fēng)量（見下注），再除以生物安全柜工作窗口面積, 便可計算出進風(fēng)風(fēng)速。 注：某些型號的生物安全柜除從工作窗口進風(fēng)以外，還有另外的進風(fēng)口。從排風(fēng)管的總排風(fēng)量扣除進風(fēng)口進風(fēng)量即為對應(yīng)工作窗口進風(fēng)風(fēng)量的排風(fēng)風(fēng)量。（2）判定：所測進風(fēng)風(fēng)速與生產(chǎn)廠家給定值之差小于0.025m/s為合格。,6.煙霧試驗：用發(fā)煙物作直觀判斷,(1)在工作表面中線上方高于工作

27、窗口上沿0.15m處, 從側(cè)壁的一端到另一端,邊發(fā)煙邊移動，煙霧運動應(yīng)為垂直流線，不得有死角和回流。(2)距觀察窗內(nèi)表面0.15m處從一端到另一端發(fā)煙，應(yīng)為垂直流線，不得有死角和回流，也無煙霧從安全柜溢出。(3)距工作窗口外沿0.04m,沿窗口發(fā)煙，吸入的煙無溢出，工作表面無煙霧。(4) 如為推拉式工作窗口，應(yīng)檢查邊沿密封情況。,7.安全泄漏試驗,（1）壓力試驗:試驗前使生物安全柜處于全關(guān)閉狀態(tài)，即將風(fēng)管和工作窗口關(guān)閉（可用

28、密封膠帶密封）。斷電時對生物安全柜內(nèi)部充氣加壓至500Pa后停止加壓，觀察壓力保持情況。壓力30分鐘下降小于10%為合格。 （2）壓力滲漏試驗：應(yīng)確認所有接縫的氣密性及整個設(shè)備沒有漏氣。 （3）其他檢測,8.生物安全柜的操作,1、一切操作動作都不能破壞安全柜的定向氣流。 2、操作人員在安全柜前的走動速度不可過快，如果安全柜附近放置有電扇、加熱器、空調(diào)器或空氣凈化器等設(shè)備，也會影響安全柜的氣流方向。

29、3、正常使用過程中也要每6個月或每年檢測一次。 4、安全柜必須進行標準所規(guī)定的各項檢測內(nèi)容，必須進行滿足生物性能、使用時間、可靠性、安全性以及操作維護和潔凈度要求的各項測試。,五、實驗室生物安全管理制度,（一）實驗室內(nèi)設(shè)置和準入在主實驗室內(nèi)應(yīng)合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)非實驗有關(guān)人員和物品不得進入實驗室實驗室工作人員、外來合作者、進修和學(xué)習(xí)人員在進入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準,（二）實驗室工作人

30、員資格和培訓(xùn),實驗室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術(shù)人員。在獨立工作前須在中高級實驗技術(shù)人員指導(dǎo)下進行上崗培訓(xùn)，達到合格標準，方可開始工作實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接收實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程三級和四級生物安全防護實驗室的工作人員留本底血清進行相關(guān)檢測，以后定期復(fù)檢。,（三）實驗室特殊管理,對可能的危險因素，制定保證安全的工作程序事前

31、進行有效的培訓(xùn)和模擬訓(xùn)練對于意外事故要能夠提供包括緊急救助或?qū)I(yè)性保健治療的措施，足以應(yīng)付緊急情況實驗室事故處理及上報,六、不同實驗室的要求,一級生物安全實驗室 BSL-1二級生物安全實驗室 BSL-2三級生物安全實驗室 BSL-3四級生物安全實驗室 BSL-4,（一）一級生物安全防護實驗室 1,實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于操作在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物；包含微生物舉例 大

32、腸桿菌 格魯伯耐格里原蟲 感染性犬肝炎病毒 枯草桿菌,一級生物安全防護實驗室 2,實驗室設(shè)施和設(shè)備要求：實驗室的門應(yīng)有可視窗并可鎖閉，門鎖及門的開啟方向應(yīng)不妨礙室內(nèi)人員逃生。應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近實驗室的出口處。在實驗室門口處應(yīng)設(shè)存衣或掛衣裝置，可將個人服裝與實驗室工作服分開放置。實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)易清潔、不滲水、耐化學(xué)品和消毒滅菌劑的腐蝕。地面應(yīng)平

33、整、防滑，不應(yīng)鋪設(shè)地毯。實驗室臺柜和座椅等應(yīng)穩(wěn)固，邊角應(yīng)圓滑。實驗室臺柜等和其擺放應(yīng)便于清潔，實驗臺面應(yīng)防水、耐腐蝕、耐熱和堅固。實驗室應(yīng)有足夠的空間和臺柜等擺放實驗室設(shè)備和物品。,一級生物安全防護實驗室 3,應(yīng)根據(jù)工作性質(zhì)和流程合理擺放實驗室設(shè)備、臺柜、物品等，避免相互干擾、交叉污染，并應(yīng)不妨礙逃生和急救。實驗室可以利用自然通風(fēng)。如果采用機械通風(fēng)，應(yīng)避免交叉污染。如果有可開啟的窗戶，應(yīng)安裝可防蚊蟲的紗窗。實驗室內(nèi)應(yīng)避免不必

34、要的反光和強光。若操作刺激或腐蝕性物質(zhì)，應(yīng)在30 m 內(nèi)設(shè)洗眼裝置，必要時應(yīng)設(shè)緊急噴淋裝置。若操作有毒、刺激性、放射性揮發(fā)物質(zhì)，應(yīng)在風(fēng)險評估的基礎(chǔ)上，配備適當?shù)呢搲号棚L(fēng)柜。若使用高毒性、放射性等物質(zhì)，應(yīng)配備相應(yīng)的安全設(shè)施、設(shè)備和個體防護裝備，應(yīng)符合國家、地方的相關(guān)規(guī)定和要求。,一級生物安全防護實驗室 4,若使用高壓氣體和可燃氣體，應(yīng)有安全措施，應(yīng)符合國家、地方的相關(guān)規(guī)定和要求。應(yīng)設(shè)應(yīng)急照明裝置。應(yīng)有足夠的電力供應(yīng)。應(yīng)有足夠的

35、固定電源插座，避免多臺設(shè)備使用共同的電源插座。應(yīng)有可靠的接地系統(tǒng)，應(yīng)在關(guān)鍵節(jié)點安裝漏電保護裝置或監(jiān)測報警裝置。供水和排水管道系統(tǒng)應(yīng)不滲漏，下水應(yīng)有防回流設(shè)計。應(yīng)配備適用的應(yīng)急器材，如消防器材、意外事故處理器材、急救器材等。應(yīng)配備適用的通訊設(shè)備。必要時，應(yīng)配備適當?shù)南緶缇O(shè)備。,（二）二級生物安全防護實驗室 1,生物安全防護水平為二級的實驗室適用于操作能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)

36、險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物涉及到的微生物舉例：—— 沙門氏菌 、志賀氏菌、—— 弓形體、衣原體—— 乙型肝炎病毒、麻疹病毒、,二級生物安全防護實驗室 2,實驗室設(shè)施和設(shè)備要求：適用時，應(yīng)符合 BSL-1實驗室的要求。實驗室主入口的門、放置生物安全柜實驗間的門應(yīng)可自動關(guān)閉；實驗室主入口的門應(yīng)有進入控制措施。實驗室工作區(qū)域外應(yīng)有存放備用物品的條件。應(yīng)在實驗室工作區(qū)配備洗眼裝置

37、。應(yīng)在實驗室或其所在的建筑內(nèi)配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當?shù)南緶缇O(shè)備，所配備的消毒滅菌設(shè)備應(yīng)以風(fēng)險評估為依據(jù)。應(yīng)在操作病原微生物樣本的實驗間內(nèi)配備生物安全柜。應(yīng)按產(chǎn)品的設(shè)計要求安裝和使用生物安全柜。如果生物安全柜的排風(fēng)在室內(nèi)循環(huán)，室內(nèi)應(yīng)具備通風(fēng)換氣的條件；如果使用需要管道排風(fēng)的生物安全柜，應(yīng)通過獨立電力供應(yīng)。必要時，重要設(shè)備（如：培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等）應(yīng)配置備用電源。,二級生物安全防護實驗室 3,特殊微生物操作規(guī)程滿

38、足一級實驗室 (標準微生物操作規(guī)程) 各款要求，在此基礎(chǔ)上特別注意：制定出入制度實驗室人口貼上生物危險標志制定實驗室特定的生物安全操作規(guī)則每年一次最新培訓(xùn)制度,二級生物安全防護實驗室 4,特殊微生物操作規(guī)程針具 & 利器使用注意事項： 禁止用手處理破碎的玻璃器具用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手直接從注射器取下。用過的針頭必須直接放入防穿透的容料中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運送到特

39、定區(qū)域消毒，最好進行高壓消毒,二級生物安全防護實驗室 5,特殊微生物操作規(guī)程培養(yǎng)基、組織、體液及其它具有潛在危險性的廢棄物須放在防漏的容器中儲存、運輸及消毒、滅菌。,二級生物安全防護實驗室 6,特殊微生物操作規(guī)程：工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要時收集從事危險性工作人員的本底血清實驗設(shè)備在運出修理或維護前必須進行消毒人員暴露于感染性物質(zhì)時，及時向?qū)嶒炇邑撠熑藚R報，并記錄事故經(jīng)過和處理方案

40、禁止將無關(guān)動物帶入實驗室,二級生物安全防護實驗室 7,安全設(shè)施和個體防護在一級生物安全基礎(chǔ)上，處理以下致病微生物時應(yīng)在生物安全柜 (Ⅱ級) 中進行 ，包括: 高濃度 大容量 有噴濺可能性上述材料的離心操作如使用密封的離心機轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且只在生物安全柜中開閉，可在實驗室中進行。當微生物的操作不可能在生物安全柜內(nèi)進行時，須使用面部保護裝置,二級生物安全防護實驗室 8,安全設(shè)施和個體防護在實驗室中應(yīng)穿著工作服或罩

41、衫等防護服，不得穿著外出。用過的工作服應(yīng)先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。當手可能接觸感染材料、污染的設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室，工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。,二級生物安全防護實驗室 9,負責人：應(yīng)為更具責任感、能力的專家限制免疫耐受者進入實驗室限制正在接受免疫抑制劑者進入實驗室工作人員：認識到工作中可能存在的危險操作/技術(shù)

42、熟練,（三）三級生物安全防護實驗室（P3）,實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素。通常已有預(yù)防的疫苗。涉及到的微生物舉例： 鼠疫桿菌、炭疽桿菌、結(jié)核分枝桿菌 立克次氏體、HIV (血清學(xué)檢測除外) 狂犬病毒等,P3實驗室管理及安全,P3實驗室設(shè)施管理P3實驗室人員管理P3實驗室規(guī)章制度P3實驗室安全操作,1.P3實驗室設(shè)施 1,離開建筑物

43、內(nèi)的行走區(qū)，禁止隨便進入實驗室。至少需要經(jīng)過兩道自動門，才能進入實驗室。所有的門都應(yīng)有鎖。過道里可以設(shè)計一個更衣室。裝有腳踏或感應(yīng)流水裝置，備有沖洗眼睛的生理鹽水，足夠的一次性手套、口罩、隔離服和防護眼鏡。,P3實驗室設(shè)施 2,備有真空系統(tǒng)設(shè)施，產(chǎn)生從潔凈區(qū)到實驗室污染區(qū)的定向氣流。排出室外的空氣不準在建筑物內(nèi)其它區(qū)域循環(huán)使用，須經(jīng)過過濾和其它處理程序排出。實驗室工作人員必須保證進入實驗室氣流的方向正確（負壓，清潔-污染）。應(yīng)

44、配置生物安全柜，安全柜放置地點應(yīng)遠離門及實驗室內(nèi)行走區(qū)。污染的設(shè)備在運出維護前必須消毒。所有廢棄物或物品，在丟棄或重新使用前必須消毒。須注意設(shè)施的銳角以上為基本設(shè)施，其余應(yīng)根據(jù)實驗工作決定,2.P3實驗室人員管理 1,負責人應(yīng)經(jīng)驗豐富并能勝任以下工作 ◆建立實驗室準人制度 ◆建立實驗室的安全規(guī)則及操作規(guī)程 ◆對實驗室人員進行培訓(xùn) 負責人應(yīng)了解所有工作人員。在安排工作區(qū)域時，要根據(jù)人員的工作

45、種類和所設(shè)計的生物材料，對實驗室環(huán)境做安全檢查。 新調(diào)入人員、外來合作、進修和學(xué)習(xí)的人員在進入實驗室之前，必須經(jīng)過實驗室主任的批準。非實驗室人員和物品不得進入實驗室。,P3實驗室人員管理 2,工作人員必須經(jīng)過HIV檢測技術(shù)和實驗室安全培訓(xùn)，包括上崗培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)。已知實驗室的潛在危險，自愿參加工作并接受實驗室管理人員的監(jiān)督。實驗室的安全責任人對工作和環(huán)境的安全負責，所有工作人員都有責任保護自己和他人的安全。必須告知新上崗人員

46、實驗室工作的潛在危險，進行安全教育，直至有能力后方可單獨工作。嚴格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測HIV抗體和備案制度。每半年進行一次HIV抗體檢測，并保留樣品。對從事艾滋病實驗室工作的人員，因工作中意外事故造成HIV職業(yè)暴露者，所在單位應(yīng)負責解決抗病毒及其它相應(yīng)治療的醫(yī)療費用。,P3實驗室人員管理 3,實驗室工作人員■ 嚴格執(zhí)行P3級生物學(xué)安全實驗室各項規(guī)章制度，按操作規(guī)程使用儀器設(shè)備■ 熟練操作■ 接受定期培訓(xùn)

47、■ 匯報事故■ 參加定期的體檢,P3實驗室人員管理 4,工作人員在對病原體進行操作時，不得觸摸暴露的皮膚、眼睛等。臨時有病如感冒、咳嗽、過敏、皮膚創(chuàng)傷等不得進入P3實驗室核心部分。嚴格的個人防護對于減少感染的危險性很重要。皮膚受損、患病都會增加感染的危險性。每個工作人員必須對自己工作過的區(qū)域進行消毒處理和打掃衛(wèi)生，所有打掃衛(wèi)生的用品在各工作區(qū)不能交叉使用。,3.P3實驗室規(guī)章制度 1,（1）出入制度Ⅰ區(qū)：更換P3

48、實驗室專用衣、褲、鞋、帽、口罩、手套Ⅱ區(qū)：可在此區(qū)進行血清學(xué)檢測等工作緩沖間：加穿無菌衣、鞋套、戴口罩、帽子、眼鏡及雙層乳膠手套Ⅲ區(qū)：進行細胞和病毒培養(yǎng)及各類帶毒操作。進入各區(qū)后，必須立即關(guān)門，而且各區(qū)門不可同時打開。人員出實驗室各區(qū)，按上述順序逆向更衣、換鞋，不可穿實驗室內(nèi)工作服、鞋出實驗室。,P3實驗室規(guī)章制度 2,所有進入P3實驗室的人員（包括來訪者、維護工人、修理工和其它只進入一次或偶爾進入的人員）都應(yīng)作記錄。實

49、驗操作時要限制學(xué)生、來訪者、清潔工、維護人員及修理工等無關(guān)人員入內(nèi)。,P3實驗室規(guī)章制度 3,（2）物品管理制度進入P3級生物學(xué)安全實驗室的一切物品，外表必須干凈、無塵，進入Ⅲ區(qū)的物品應(yīng)為無菌。每次使用的全套防護服必須高壓滅菌處理。移出P3實驗室的一切物品，凡能高壓消毒的必須經(jīng)120℃高壓滅菌消毒30分鐘；凡不能消毒的，其外暴露部分必須經(jīng)75％乙醇或0.5％過氧乙酸消毒；各種廢物、廢液需經(jīng)高壓滅菌處理后，運出實驗室。,P3實驗室

50、規(guī)章制度 4,實驗室必須備消毒液體如10%（v/v）次氯酸鈉溶液，70％乙醇溶液及棉球。實驗室內(nèi)不可有銳器(刀、針、碎玻璃等)暴露，剪刀用完立即放回盒中，一次性針頭用完放入飯盒內(nèi)高壓，不慎打破的玻璃器皿必須立即將全部碎片收集干凈。,P3實驗室規(guī)章制度 5,對存放生物試劑和有毒物區(qū)域的監(jiān)控冷藏柜、冰箱、培養(yǎng)箱和存放生物試劑、化學(xué)危險品、放射性物質(zhì)的容器置于工作人員視線之外的地點時應(yīng)上鎖。應(yīng)設(shè)有專門儲存陽性血清的低溫冰柜，并應(yīng)上鎖

51、。各種毒種，從國外引進和本實驗室分離的，根據(jù)其在細胞內(nèi)外存在，分別保存在液氮和深低溫冰箱內(nèi)。指派專人保管毒種，嚴格登記，使用毒種必須經(jīng)批準。,P3實驗室規(guī)章制度 6,（3）實驗室及設(shè)備使用維護制度實驗室日常護理：每日晨清潔實驗臺面、各儀器表面及地面灰塵；開啟實驗室動力系統(tǒng)，調(diào)結(jié)好壓力及溫度，開紫外燈照射20分鐘；檢查，記錄實驗室內(nèi)各設(shè)備的工作情況(重點C02孵箱、冰箱、生物安全柜及廢物處理情況)；待全部實驗完成后開室內(nèi)紫外燈3

52、0分鐘后關(guān)燈，寫實驗日志，檢查電燈是否斷電，鎖門。,P3實驗室規(guī)章制度 7,實驗室內(nèi)各種儀器設(shè)備作定期維護和檢修，每月對高壓鍋進行一次生物質(zhì)控并做好記錄，每半年對實驗室及安全柜進行一次安全性鑒定并做好記錄。每月對實驗室搞一次衛(wèi)生大掃除，內(nèi)容包括所有地面、桌面、窗、墻、壁，超凈臺及C02孵箱內(nèi)，玻璃窗等實驗室內(nèi)所有部位。,P3實驗室規(guī)章制度 8,（4）實驗資料記錄、管理制度應(yīng)及時準確地做實驗記錄，內(nèi)容包括：日期、操作者，所用毒種

53、、細胞、實驗內(nèi)容、過程，結(jié)果及有無事故等。整個P3實驗室統(tǒng)一的實驗資料要有專人負責，按固定格式記錄在案，其項目包括：實驗室工作日志，毒種及細胞保存記錄，儀器設(shè)備記錄、藥品記錄、血清學(xué)檢測記錄等。,4.P3實驗室安全操作 1,（1）實驗開始前開機1小時凈化空氣，檢查空調(diào)，通風(fēng)系統(tǒng)及其負壓值，開P3潔凈間紫外燈照射20分鐘。關(guān)紫外燈10分鐘后，穿戴隔離衣、帽、口罩和高質(zhì)量手套。與實驗無關(guān)人員不得進入。,P3實驗室安全操作 2,

54、（2）實驗過程中實驗時，由實驗室主任決定限制或禁止人員進入實驗室。接觸傳染源的人員在離開實驗室取下手套后，要洗手。在生物安全柜中操作使用防止氣溶膠的設(shè)備如有濺出，迅速消毒,P3實驗室安全操作 3,不能用嘴移液，只能用機械裝置移液。所有的操作過程應(yīng)盡量細心，避免產(chǎn)生氣溶膠。盡量避免使用尖銳物品和利器，包括注射器、針頭、刀片、玻璃制品、載玻片等。建議用不易破碎材料制品，如塑料移液管等。,P3實驗室安全操作 4,實

55、驗室內(nèi)嚴禁飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。實驗室內(nèi)戴隱型眼鏡的人，也要戴眼鏡和面罩不得用戴著手套的手觸摸暴露的眼睛、鼻子和皮膚，一旦發(fā)現(xiàn)手套破損或受污染，應(yīng)立即脫下手套，用肥皂洗手，再更換手套，如發(fā)生皮膚損傷或樣品材料污染皮膚，應(yīng)流水用力擠壓沖洗傷口，再用酒精洗擦，并做記錄、報告。,P3實驗室安全操作 5,所有與傳染源有關(guān)的開放操作，都應(yīng)在II級或III級生物安全柜中進行。,P3實驗室安全操作 6,當操作不能在生物安全柜中進行時

56、，應(yīng)適當?shù)木C合使用個人防護設(shè)施(如，口罩，面罩等)和物理遏制設(shè)施(如：帶安全罩或密封轉(zhuǎn)頭的離心機)。實驗在負壓存在下進行時，實驗過程中不得開門、開傳遞窗。停電后應(yīng)立即停止實驗。不間斷電源,P3實驗室安全操作 7,當進入內(nèi)有感染動物的房間時，應(yīng)采取呼吸和面部保護措施。當有傳染源灑出或濺出后，應(yīng)當使用有效的消毒劑消毒。灑出的傳染源需由專業(yè)人員、或由經(jīng)過培訓(xùn)且配有裝備的處理高濃度傳染源的人員進行消毒、處理、清洗。,P3實驗室安全操

57、作 8,（3）實驗結(jié)束后對實驗中使用過的儀器、工作臺用乙醇一碘伏或其它有效氯含量為10%（v/v）的消毒劑擦抹消毒；其它器材、物品及污物(固體、液體)高壓消毒120℃1小時。檢查空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)及其負壓值，并做記錄。打開紫外燈消毒30分鐘，檢查水電安全后再鎖門。,P3實驗室安全操作 9,（4）帶入和帶出實驗室的物品對所有帶入實驗室的物品都應(yīng)進行檢查。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其它適當?shù)难b置內(nèi)打開。將測試樣品轉(zhuǎn)送到其它實

58、驗室時，應(yīng)防止對人員和環(huán)境的污染。護送樣品的人應(yīng)明確接受地點和接收人，實驗室負責人或其指定的人員應(yīng)及時確認樣本已送達指定的實驗時，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善處理。,P3實驗室安全操作 10,污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應(yīng)進行消毒。試驗室所有垃圾，包括用過的一次性手套和工作衣，置于專門污物袋內(nèi)，經(jīng)焚燒或有效消毒處理后丟棄，污染的非一次性工作衣應(yīng)先消毒后再洗滌。所有尖銳物品應(yīng)置于不易刺破的容器內(nèi)，消毒后用合適的方法處理。,P3

59、實驗室安全操作 11,（5）樣本的轉(zhuǎn)送和發(fā)放樣品從一個實驗室轉(zhuǎn)送到另外一個實驗室，必須是血清或血漿，除特殊需要外，一般不能用全血。且需置于帶有蓋帽的試管內(nèi)，防止樣品流出，試管上應(yīng)有明顯的標記。清楚地標記為感染性材料（按所在生物安全防護實驗室的級別標明相同的級別）。感染性材料必須放在密閉的管子中，再放入含有足夠吸水材料的生物危險管中，以防泄漏。將試管放入專門帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理，在所放試劑管周圍上下均墊有軟性物

60、質(zhì)，以免破碎，容器外表有專用字樣。如果路程較遠或者氣候炎熱時，盛有樣本的容器應(yīng)至于4℃以下轉(zhuǎn)運,P3實驗室安全操作 12,第一道包裝（緊貼樣品層）加入吸水層（第二層）第二道包裝（第三層）防滲漏包裝（第四層）外包裝（最外層）,P3實驗室安全操作 13,（6）實驗室事故處理 職業(yè)暴露是指實驗室、醫(yī)護、預(yù)防保健人員以及有關(guān)的監(jiān)管工作人員，在從事傳染病防治工作及相關(guān)工作的過程中意外被傳染病感染者或患者（患病動物

61、）的血液、體液污染了破損的皮膚或非胃腸道粘膜，或被含有傳染病病原的血液、體液污染了的針頭及其它銳器刺破皮膚，而具有被相應(yīng)傳染病原感染的可能性的情況。,P3實驗室安全操作 14,緊急處理措施皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷出的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當?shù)南緞┙?，?0%乙醇或其它皮膚消毒劑。,P3實驗室安全操作 15,粘膜污染：用大量流水或生理

62、鹽水徹底沖洗污染部位。衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進行消毒處理。污染物潑濺：發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即進行消毒處理。發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負責人到達事故現(xiàn)場查清情況，確定消毒的程序。,P3實驗室安全操作 16,事故登記事故發(fā)生的時間、地點及詳細經(jīng)過。暴露方式；受傷部位、傷口深淺、暴露程度；污染物種類（培養(yǎng)液、血液或其它體液）以及其中含有HIV的情況。,P3實驗室安全操作

63、17,處理方法和經(jīng)過，包括專家或領(lǐng)導(dǎo)赴現(xiàn)場指導(dǎo)和處理的情況。是否采用暴露后藥物預(yù)防，如果是，應(yīng)詳細記錄用藥情況，包括首次用藥時間、服藥方案和毒副作用。隨訪檢測的日期、項目和結(jié)果。,P3實驗室安全操作 18,報告和檢測發(fā)生重大事故時，在緊急處理的同時要立即向主管領(lǐng)導(dǎo)和專家報告。同時抽血檢測抗體，暴露一年內(nèi)要定期檢測。發(fā)生小型事故時可在緊急處理后立即將事故情況和處理方法報告主管領(lǐng)導(dǎo)和專家，檢測同前。,P3實驗室安全操作