免疫學檢驗基礎理論知識

1、免疫學檢驗基礎理論知識,胡琳琳,抗原: 凡能刺激機體產生抗體和致敏淋巴細胞并能與之發(fā)生特異性結合的物質稱為抗原(antigen、Ag)?？乖镔|具有免疫原性與反應原性。 免疫原性（抗原作用）: 指能刺激機體產生抗體和致敏淋巴細胞的特性。 反應原性（抗原反應）: 指抗原與相應的抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生反應的特性。,抗 原,完全抗原與半抗原 完全抗原: 具有免疫原性與反應原性的物質，多為分子量大于5000的蛋白

2、質。 半抗原: 只具有反應原性而無免疫原性的物質，一般為小分子化合物，例如某些激素、藥物等。,抗 原,免疫系統(tǒng)組成,抗體: 機體受到抗原物質刺激后，由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的，能與相應抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白(Ig)?？贵w的基本結構 所有種類Ig的單體分子結構都是相似的，即由兩條相同的重鏈(H)和兩條相同的輕鏈(L)四條肽鏈構成的“Y”字形的分子。,抗 體,IgM:分子量最大的免疫球蛋白，抗原刺激誘

3、導的體液免疫應答中最先產生的抗體。在感染過程中血清IgM水平升高，說明有近期感染，有助于早期診斷。IgG:血清中含量最高，是再次免疫應答的主要抗體，是唯一能夠通過胎盤的抗體。感染后出現時間較晚，持續(xù)時間較長，是既往感染的標志。IgA:分為血清型和分泌型，分泌型IgA是參與粘膜局部免疫的主要抗體。IgE:血清中含量最少，介導1型超敏反應。IgD:血清型IgD作用尚不清楚。,免疫球蛋白,定義：抗原與相應抗體之間的特異性結合反應。

4、原理：抗原抗體的特異性結合是基于抗原決定簇與抗體超變區(qū)分子間的結構互補性和親和性。這種特性是有抗原、抗體分子空間構型所決定的。,抗原抗體反應,特異性 空間結構互補，如同鑰匙和鎖，一一對應。 共同抗原：物質表面往往不止一種抗原決定簇，兩種不同抗原物質可具有部分相同或類似結構的抗原決定簇。能與彼此相應的抗體出現交叉反應。,抗原抗體反應特點,比例性 指抗原與抗體特異性結合反應時，生成肉眼可見結合物的量與反應物

5、濃度的關系，只有當二者濃度比例適當是，才出現可見反應。 鉤狀效應（倒鉤）：抗體過量-前帶，抗原過量-后帶。,抗原抗體反應特點,,,可逆性 抗原與相應抗體結合復合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性稱為抗原抗體結合的可逆性。 復合物解離因素：1.抗體對相應抗原的親和力。2.環(huán)境因素。PH值，離子強度。,抗原抗體反應特點,反應物自身因素抗原：理化性狀，表面抗原決定簇的種類和數目抗體： 來源

6、：來源不同動物的免疫血清，等價帶寬窄不同。 濃度：與相應抗原濃度合適才易出現可見反應。 特異性與親和力：早期獲得的抗血清親和力低，特異性好；后期獲得的往往親和力高。診斷試劑盡可能選高特異性、高親和力的抗體。才能提高試驗的可靠性。,影響抗原抗體反應的因素,反應環(huán)境條件電解質 反應必須要有電解質參與。酸堿度 一般以pH6～9為易溫度 一般以15 ～ 40℃，最適溫度為37 ℃。范圍內溫度

7、越高反應速度越快，溫度越低反應越慢但結合的越牢固。>56 ℃會導致解離甚至變性。,影響抗原抗體反應的因素,雙抗體夾心法 適用于檢測分子中具有至少兩個抗原決定簇的多價抗原，而不能用于小分子半抗原。 利用連接在固相載體上的抗體和酶標抗體可分別與樣品中被檢測抗原分子上的兩個不同抗原決定簇結合，形成固相抗體-抗原-酶標抗體免疫復合物。,酶聯(lián)免疫吸附實驗類型,15,,,,1、已知抗體包 被于載體表面,3、加酶標抗體

8、與抗原結合,4、加酶作用的底物產生顏色,2、加待檢物抗原與抗體結合,4、加酶作用的底物 不產生顏色,,,,1、已知抗體包 被于載體表面,2、加待檢物無抗 原與抗體結合,3、加酶標抗體 無抗原結合,+,-,Y,,Y,E,Y,,Y,Y,Y,Y,Y,,,,,Y,Y,,Y,Y,,,,Y,Y,Y,Y,Y,Y,,雙抗體夾心法測抗原,間接法 此法是測抗體的常用方法。將抗原連接在固相載體上，樣本中待檢抗體與之結合成 固

9、相抗原-待檢抗體復合物，再用酶標二抗（針對待檢抗體的抗體）與固相復合物中的抗體結合。,酶聯(lián)免疫吸附實驗類型,17,,,,,,,,1、已知抗原吸附于載體表面,2、加待檢物無抗體與抗原結合,3、加酶標抗Ig與抗體結合,4、加酶作用的底物產生顏色,1、已知抗體吸附于載體表面,2、加待檢物有抗體與抗原結合,3、加酶標的抗Ig抗體,4、加酶作用的底物不產生顏色,,,,,,-,,,,,,,Y,E,Y,,,,,,,,,,,+,,間接法

10、測抗體,競爭法 競爭法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可對抗體進行測定。 酶標記抗原（抗體）與待測品中的抗原（抗體）具有相同的與固相抗體結合的能力；反應體系中，固相抗體（抗原）和酶標抗原（抗體）是固定限量，且前者的結合位點少于酶標記與待測抗原（抗體）分子數量和；反應后，結合于固相載體上的復合物中被測定的酶標抗原（抗體）的量與待測品中的抗原（抗體）的濃度成反比。,酶聯(lián)免疫吸附實驗類型,19,,,,,,,+,-,,Y,,Y

11、,Y,Y,Y,Y,,Y,Y,E,Y,,,,2、加待檢物抗原與酶標抗原競爭與抗體結合,3、加酶作用的底物不顯色或顯色弱,3、加酶作用的底物顯色,1、已知抗體包被于載體表面,1、已知抗體包被于載體表面,2、加待測物和酶標抗原，酶標抗原與抗體結合,,競爭法測抗原,捕獲法 最常用于IgM抗體檢測。先將針對IgM的第二抗體連接于固相載體，用以結合樣品中所有的IgM抗體，然后加入特異抗原與待檢IgM抗體結合；再加入抗原

12、特異的梅標抗體，最后形成固相二抗- IgM-抗原-梅標抗體復合物。,酶聯(lián)免疫吸附實驗類型,21,,,,,,,+,-,,,,,1、固相化抗人　IgM,,1、固相化抗人　IgM,2、加待測物特異性IgM與非特異性IgM和抗人IgM結合,3、加特異性抗原，與特異性抗體結合,4、加酶標抗體與特異性抗原結合，加底物顯色,3、加特異性抗原，不能與非特異性IgM結合,4、加酶標抗體無抗原結合，加底物不顯色,,捕獲法原理,2、