各種顯微鏡的講義

1、幾種特殊的光學(xué)顯微鏡（一）暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡不具備觀察物體內(nèi)部的細(xì)微結(jié)構(gòu)的功能，但可以分辨0.004μm0.004μm以上的微粒的存在和運(yùn)動。因而常用于觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動等。暗視野顯微鏡的基本原理是丁達(dá)爾效應(yīng)。暗視野顯微鏡的基本使用方法如下：1安裝暗視野聚光器（或用厚實的黑紙片制成遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方，也能得到暗視野效果）。2選用強(qiáng)光源，一般用顯微鏡燈照明，以防止直射光線進(jìn)入物鏡。3在聚光器和玻片之間

2、加一滴香柏油，避免照明光線于聚光鏡上進(jìn)行全反射，達(dá)不到被檢物體，而得不到暗視野照明。4進(jìn)行中心調(diào)節(jié)，即水平移動聚光器，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)格位于一直線上。升降聚光器，將聚光鏡的焦點（圖2中圓錐光束的頂點）對準(zhǔn)待檢物。5選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)節(jié)焦距，按普通顯微鏡的方法操作。（二）體視顯微鏡一些物質(zhì)本身不具這一性質(zhì)，但如果以特定的熒光染料或熒光抗體染色，經(jīng)紫外線照射后亦可發(fā)熒光。熒光顯微鏡的原理為利用一個高發(fā)光效率的點光源（如

3、超高壓汞燈），經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650λ3650λ或紫藍(lán)光4200λ)4200λ)作為激發(fā)光，激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各色的熒光后，再通過物鏡后面的阻斷(或壓制)濾光片的過濾，最后經(jīng)由目鏡的放大作用加以觀察。阻斷濾光片的作用有二：一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡以免干擾熒光和損傷眼睛；二是選擇并讓特定的熒光透過，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。熒光顯微鏡按照光路原理可分為兩種：1透射式熒光顯微鏡較為舊式的熒光顯微鏡，其激發(fā)光源

4、通過聚光鏡穿過標(biāo)本材料來激發(fā)熒光。其優(yōu)點是低倍鏡時熒光強(qiáng)，而缺點是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱。所以它僅適用于觀察較大的標(biāo)本材料。2落射式熒光顯微鏡激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面，即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡(附圖15)15)。光路中需加上一個雙色束分離器（分色鏡），它與光軸呈45o45o角，激發(fā)光被反射到物鏡中，并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進(jìn)入物鏡，返回到雙色束分離器，使激發(fā)