基于PC-IGS序列檢測微囊藻的方法研究.pdf

1、近年來，世界范圍內(nèi)藍藻水華大量爆發(fā)，水華藍藻產(chǎn)生的毒素已造成嚴重的污染和經(jīng)濟損失，藍藻水華越來越受到關(guān)注。微囊藻是現(xiàn)有產(chǎn)毒藍藻中的優(yōu)勢種。常規(guī)的藍藻監(jiān)測以顯微鏡下形態(tài)觀察、計數(shù)為主，它要求操作者對各種藍藻的細胞形態(tài)非常熟悉，否則易漏檢或誤檢。因此，有待開發(fā)藍藻尤其微囊藻的預(yù)警預(yù)測、分析方法。
　　 現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展以及基因數(shù)據(jù)庫中海量的生物信息為我們建立以基因為檢測對象、快速有效的檢測方法提供了可能。PCR檢測基因法已被報道，

2、但它易產(chǎn)生假陽性。由于核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性，DNA探針—雜交方法可用于環(huán)境監(jiān)測，此法更快速、靈敏。
　　 因此，本研究的目的是以微囊藻的PC-IGS 序列為檢測對象，建立一種水華藍藻的預(yù)警預(yù)測的分子生物學(xué)方法，其主要工作內(nèi)容和結(jié)論有：
　　 1．對微囊藻和魚腥藻的PC-IGS 序列進行比對分析并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，在PC-IGS系統(tǒng)發(fā)育樹中，微囊藻和魚腥藻形成兩個獨立的分枝，證實了PC-IGS 序列在藍

3、藻種間具有高度的特異性，可用于建立檢測藍藻的分子生物技術(shù)?；谖⒛以宓腜C-IGS序列成功地設(shè)計、合成了對于微囊藻的檢測具有較高特異性的捕獲探針和信號探針。
　　 2．通過優(yōu)化雜交液、雜交溫度和時間等多項參數(shù)，建立了可以檢測微囊藻的酶聯(lián)夾心雜交方法。對實驗室多株藻的雜交檢測，驗證了該法的可靠性和準確性，進而建立酶聯(lián)夾心雜交方法標準曲線（y=0.00002x+0.1225，R2=0.9883）實現(xiàn)了水樣的定量檢測。該法的最低可檢出