微囊藻毒素-LR快速檢測(cè)生物學(xué)新方法的建立.pdf

1、隨著環(huán)境污染的加劇，淡水水體富營(yíng)養(yǎng)化的狀態(tài)越來(lái)越嚴(yán)重，有毒藍(lán)藻水華在各地頻繁發(fā)生，其產(chǎn)生的毒素對(duì)淡水水體尤其是水源水及飲用水的污染也越來(lái)越嚴(yán)重，對(duì)人類及動(dòng)物的健康造成了極大威脅。微囊藻毒素是一大類藍(lán)藻毒素，其中，最常見(jiàn)毒性最強(qiáng)的藍(lán)藻毒素是微囊藻毒素-LR(MC-LR)，MC-LR是一種低分子量的環(huán)狀多肽，對(duì)生物體具有多重毒性，已將其列《入國(guó)家生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB5749-2006)之中，規(guī)定的界限為1μg/L。目前MC-LR檢測(cè)方

2、法很多，但都存在價(jià)格昂貴、耗時(shí)費(fèi)力、操作復(fù)雜等問(wèn)題，因此，建立一種快速、便捷、實(shí)時(shí)、特異性檢測(cè)微囊藻毒素-LR的檢測(cè)方法具有重要意義。
　　本文通過(guò)培養(yǎng)銅綠微囊藻，收集足夠多的藻細(xì)胞進(jìn)行MC-LR提取，經(jīng)超聲波破碎、溶劑萃取、高效液相色譜（HPLC）分離純化、冷凍干燥獲得MC-LR純品。以MC-LR為靶分子，利用噬菌體隨機(jī)展示十二肽庫(kù)進(jìn)行MC-LR特異性親和配體序列的篩選。經(jīng)過(guò)四輪篩選、測(cè)序及序列比對(duì)，最終獲得了一條MC-LR特異

3、性親和配體序列。后以固相化學(xué)合成法合成該配體肽，并于N端進(jìn)行FITC熒光標(biāo)記制得MC-LR特異性親和配體肽探針，最后對(duì)制得探針進(jìn)行活性檢測(cè)與應(yīng)用，驗(yàn)證并建立生物學(xué)新方法。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，提取獲得的MC-LR純度達(dá)94％。經(jīng)過(guò)噬菌體隨機(jī)展示十二肽庫(kù)的四輪篩選及測(cè)序和序列比對(duì)，得到MC-LR特異性親和配體序列:H-F-F-K-W-H-T-R-T-N-D-Q，經(jīng)人工合成獲得了有FITC熒光標(biāo)記的MC-LR特異性親和配體肽P1: FI