微囊藻毒素合成酶基因PCR檢測方法的建立及應用.pdf

1、　　微囊藻水華在世界范圍內頻繁發(fā)生,可產(chǎn)生損害人類健康的微囊藻毒素,是淡水水體中危害性最大的水華之一。微囊藻毒素主要由微囊藻產(chǎn)生,是一種細胞內毒素,具有強的促癌作用,長期飲用含微囊藻毒素的水能造成人和動物的中毒及肝損傷。常用的HPLC、ELISA等方法能檢測存在于水體中的微囊藻毒素,但無法在毒素從藻細胞內釋放之前,對微囊藻的產(chǎn)毒能力進行判斷。
　　本文針對微囊藻毒素合成酶基因——mcyB,設計、篩選特異性引物,建立了適用于微囊藻毒

2、素基因檢測的全細胞PCR方法。該方法不受藻細胞的生長時期影響,也不受其它藻類細胞或雜菌的干擾。靈敏度測試結果表明,取10 μL藻細胞樣品為模板,在50 μL反應體系中,一步PCR檢測下限為100-1000cells/反應,二步PCR(即套式PCR)檢測下限為1-10 cells/反應。套式PCR檢測方法具有特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好的特點,可用于低藻濃度水樣的微囊藻毒素基因檢測。
　　以上述方法對從廣東省11個供水水庫中分離的3

3、0株微囊藻進行毒素基因檢測。這11個水庫分別是鶴地水庫、湯溪水庫、流溪河水庫、大鏡山水庫、沙田水庫、高州水庫、契爺石水庫、飛來峽水庫、深圳水庫、新豐江水庫和赤石逕水庫；30株微囊藻分屬于水華微囊藻、銅綠微囊藻和具緣微囊藻。共檢測出微囊藻毒素基因陽性藻株12株,陽性率為40%,其中8株為水華微囊藻。陽性藻株分別來自鶴地水庫、湯溪水庫、流溪河水庫、大鏡山水庫、高州水庫、飛來峽水庫和深圳水庫等7個水庫。
　　對廣東省12個供水水庫的水樣

4、進行微囊藻毒素基因PCR檢測。12個水庫包括前述11個水庫以及大沙河水庫,共136個水樣,采集時間從2003年6月至2004年4月。檢測發(fā)現(xiàn),水樣經(jīng)一步PCR擴增,檢出陽性樣品15個,陽性率為11.1%；二步PCR檢出陽性樣品59個,陽性率為43.4%。除深圳水庫外的11個被檢水庫均出現(xiàn)陽性樣品。其中湯溪水庫、高州水庫、大鏡山水庫和沙田水庫套式PCR檢測陽性率分別為95.2%、66.7%、66.7%和60.0%,表明具產(chǎn)毒潛力的微囊藻在