蛋白質(zhì)含量測定(凱氏定氮法)

1、食品中蛋白質(zhì)含量測定（凱氏定氮法）食品中蛋白質(zhì)含量測定（凱氏定氮法）一、目的與要求1、學習凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的原理。2、掌握凱氏定氮法的操作技術，包括樣品的消化處理、蒸餾、滴定及蛋白質(zhì)含量計算等。二、實驗原理蛋白質(zhì)是含氮的化合物。食品與濃硫酸和催化劑共同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨，留在消化液中，然后加堿蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后，再用鹽酸標準溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量來乘以蛋白質(zhì)換算系數(shù)，即得蛋白質(zhì)含量。因為食

2、品中除蛋白質(zhì)外，還含有其它含氮物質(zhì)，所以此蛋白質(zhì)稱為粗蛋白。三、儀器與試劑硫酸銅（CuSO45H20）硫酸鉀硫酸（密度為1.8419gL）硼酸溶液（20gL）氫氧化鈉溶液（400gL）0.01molL鹽酸標準滴定溶液。混合指示試劑：0.1%甲基紅乙溶液液1份，與0.1%溴甲酚綠乙醇溶液5份臨用時混合。微量定氮蒸餾裝置：如圖3所示。圖3微量凱氏定氮裝置1、電爐；2、水蒸氣發(fā)生器（2L平底燒瓶）；3、螺旋夾a；4、小漏斗及棒狀玻璃塞（樣品入

3、口處）；5、反應室；6、反應室外層；7、橡皮管及螺旋夾b；8、冷凝管；9、蒸餾液接收瓶。四、實驗步驟1、樣品消化稱取樣品約2.00g（0.001g），移入干燥的100mL凱氏燒瓶中，加入0.2g硫酸銅和6g硫酸鉀，稍搖勻后瓶口放一小漏斗，加入20mL濃硫酸，將瓶以450角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上，使用萬用電爐，在通風櫥中加熱消化，開始時用低溫加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫停止后，再升高溫度保持微沸，消化至液體呈藍綠色澄清透明后，繼續(xù)加熱0.

4、5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，無損地轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混勻備用，即為消化液。試劑空白實驗：取與樣品消化相同的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸，按以上同樣方法進c——鹽酸標準滴定溶液濃度（molL）；0.0140——1.0mL鹽酸標準滴定溶液相當?shù)牡馁|(zhì)量（g）；]000.1)([LmolHClc?m——樣品的質(zhì)量（g）；F——氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，一般食物為6.25；乳制品為6.38；面粉為5.70；高梁為6.

5、24；花生為5.46；米為5.95；大豆及其制品為5.71；肉與肉制品為6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵5.30。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。六、注意事項及說明1、本法也適用于半固體試樣以及液體樣品檢測。半固體試樣一般取樣范圍為2.00g~5.00g；液體樣品取樣10.0mL~25.0mL（約相當?shù)?0mg~40mg）。若檢測液體樣品，結(jié)果以g100mL表示。2、消化時，若樣品含糖高或含脂及較多時，注意控制加熱溫度