蛋白純化硫酸銨沉淀鹽析法

1、還能想起那些在熒屏中曾經(jīng)震撼過我們，具有超能力的英雄么？蜘蛛俠，敏捷，靈活迅速飛流直下，忽閃直沖高樓；綠巨人浩克，力量，速度，耐力，在我們的想象力中膨脹；還有，我們隨身攜帶星形盾牌，品格高尚的美國(guó)隊(duì)長(zhǎng)……幻想里中的人物形象存在我們的記憶力，然而生物背景出身的我們，總歸要鍛煉出屬于自己的實(shí)驗(yàn)技能，即便是相同的實(shí)驗(yàn)步驟，每個(gè)人做出來的結(jié)果也不盡相同，差別在哪？反復(fù)練習(xí)，用心總結(jié)出屬于自己的心得，轉(zhuǎn)化為自己的實(shí)驗(yàn)“超能力”吧。本文總結(jié)了蛋白純

2、化硫酸銨沉淀詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)原理、步驟，供大家參考。鍛煉屬于我們自己的實(shí)驗(yàn)“超能力”之一這次，我們所要分享的便是一種很常見，但是也很重要的蛋白質(zhì)純化方法：硫酸銨沉淀蛋白法，一起走進(jìn)實(shí)驗(yàn)室吧。硫酸銨沉淀法是粗分離蛋白時(shí)常用的純化和濃縮蛋白的技術(shù)。蛋白質(zhì)的溶解度和鹽濃度密切相關(guān)，在低濃度的條件下，隨著鹽濃度的增加，蛋白質(zhì)的溶解度增加；但在高濃度的鹽溶液里，鹽離子競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合蛋白表面的水分子，蛋白純化硫酸銨沉淀鹽析法法我是超級(jí)蜘蛛精看我有勁兒不？沖

3、啊，我是美國(guó)隊(duì)長(zhǎng)而我是一只冷靜的科研小蝸牛驗(yàn)操作中，因蛋白質(zhì)上清液和硫酸銨飽和溶液的體積之和過大，離心機(jī)無法離心，因此根據(jù)需要加入的硫酸銨飽和溶液的體積選擇合適的方法。另外，每種蛋白質(zhì)沉淀所需要的硫酸銨溶液的濃度也不同，因此在每次實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該做好觀察記錄，積累經(jīng)驗(yàn)值。分享來自網(wǎng)上的一種簡(jiǎn)單的方法來估計(jì)蛋白沉淀所需要的硫酸銨溶液的濃度范圍，供大家參考：將蛋白質(zhì)溶液分成5份，每份分別加入硫酸銨至濃度分別為20%、30%、40%、50%、60%

4、，離心，棄蛋白質(zhì)沉淀，留取上清，再向上清液中加入硫酸銨，使得濃度從原先的20%升高到30%，30%的濃度升到40%，40%的濃度升為50%.......，離心保留沉淀，分析沉淀中是否含有目的蛋白，以此確定沉淀目的蛋白所需要的最佳硫酸銨溶液的濃度。（3）透析除去硫酸銨將蛋白質(zhì)溶液離心沉淀，棄上清保留沉淀。加入1020ml的PBS疊氮化鈉溶液溶解蛋白質(zhì)，疊氮化鈉不于蛋白質(zhì)反應(yīng)，但能防止蛋白質(zhì)變性。蛋白沉淀溶解之后，放入透析袋中透析2448h