利用鹽析和等電點(diǎn)沉淀法從牛奶中制備酪蛋白

1、利用鹽析和等電點(diǎn)沉淀法從牛奶中制備酪蛋白利用鹽析和等電點(diǎn)沉淀法從牛奶中制備酪蛋白摘要：摘要：牛奶的蛋白質(zhì)，主要以酪蛋白(Casein)為主，人奶以白蛋白為主。酪蛋白是一種大型、堅(jiān)硬、致密、極困難消化分解的凝乳(curds)。酪蛋白是乳中含量最高的蛋白質(zhì)，目前主要作為食品原料或微生物培養(yǎng)基使用，利用蛋白質(zhì)酶促水解技術(shù)制得的酪蛋白磷酸肽具有防止礦物質(zhì)流失、預(yù)防齲齒，防治骨質(zhì)疏松與佝僂病，促進(jìn)動物體外受精，調(diào)節(jié)血壓，治療缺鐵性貧血、缺鎂性神經(jīng)

2、炎等多種生理功效。利用鹽析和等電點(diǎn)沉淀法可以將其分從牛奶中分離。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：鹽析沉淀，等電點(diǎn)沉淀，酪蛋白前言：前言：沉淀（precipitation）是物理環(huán)境的變化引起溶質(zhì)的溶解度降低、生成固體凝聚物（aggregates）的現(xiàn)象。但是沉淀是不定型的固體顆粒，構(gòu)成成分復(fù)雜。蛋白質(zhì)等生物大分子的分子間相互作用復(fù)雜，其溶解度降低或濃度升高時(shí)往往生稱不定型的顆粒。沉淀原理分離蛋白質(zhì)是暢通分離技術(shù)之一，目前廣泛用于實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)規(guī)模蛋白質(zhì)的

3、回收、濃縮和純化，是血清蛋白質(zhì)分離提取的主要手段。1鹽析法沉淀酪蛋白1.1蛋白質(zhì)鹽析原理水溶液中的蛋白質(zhì)的溶解度在一般生理例子強(qiáng)度范圍內(nèi)（0.15～0.2molkg）最大，而低于或高于此范圍時(shí)溶解度均降低。蛋白質(zhì)在高離子強(qiáng)度的溶液中溶解度降低、發(fā)生沉淀的現(xiàn)象稱為鹽析（saltingout）。如圖1所示，當(dāng)例子強(qiáng)度較高時(shí)，溶解度的對數(shù)與離子強(qiáng)度呈線性關(guān)系。中過濾除去乙醇溶液，抽干。將沉淀從布氏漏斗中移出，在表面皿中展開除去乙醇，干燥后得到

4、酪蛋白。準(zhǔn)確稱量。2等電點(diǎn)法沉淀酪蛋白等電點(diǎn)法沉淀酪蛋白2.1等電點(diǎn)法原理等電點(diǎn)法原理蛋白質(zhì)在溶液中有兩性電離現(xiàn)象。假設(shè)某一溶液中含有一種蛋白質(zhì)。當(dāng)pI=pH時(shí)該蛋白質(zhì)極性基團(tuán)解離的正負(fù)離子數(shù)相等，凈電荷為0，此時(shí)的該溶液的是pH值是該蛋白質(zhì)的pI值。某一蛋白質(zhì)的pI大小是特定的與該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)，而與環(huán)境pH無關(guān)。在此時(shí)，蛋白質(zhì)之間的靜電排斥力最小，溶解度最低。利用蛋白質(zhì)在pH值等于其等電點(diǎn)的溶液中溶解度下降的原理進(jìn)行沉淀分級的方法稱

5、為等電點(diǎn)沉淀（isoelectricprecipitation）。2.2操作條件操作條件等電點(diǎn)沉淀的操作條件是：低離子強(qiáng)度；pH≈Pi。因此，等電點(diǎn)操作需要在低離子強(qiáng)度下調(diào)整溶液的pH值至等電點(diǎn)，或在等電點(diǎn)的pH值下利用透析等方法降低離子強(qiáng)度下，是蛋白質(zhì)沉淀。由于一般蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)多在偏酸性范圍內(nèi)，故等電點(diǎn)沉淀操作中，多加入無機(jī)酸（如鹽酸，磷酸和硫酸等）調(diào)節(jié)pH值。等電點(diǎn)沉淀法可用于所需物質(zhì)的提取，也可用于沉淀除去雜蛋白及其他雜質(zhì)，實(shí)際

6、工作中普遍采用該方法作為去雜手段。如在工業(yè)上生產(chǎn)胰島素時(shí)：先調(diào)pH至8.0去除堿性雜蛋白，再調(diào)pH至3.0去除酸性雜蛋白。粗酶液經(jīng)過這樣的處理后純度大大提高，有利于后面的操作。2.3等電點(diǎn)沉淀操作等電點(diǎn)沉淀操作將鹽析操作中所得到的濾液置于燒杯中，一邊攪拌，一邊利用pH計(jì)測量酸度，并用鹽酸調(diào)整pH至3。然后倒至離心管中6000rmin離心15min，倒掉上清液。在離心管中加入10mL去離子水，震蕩，使管內(nèi)下層物重新懸浮，并以0.1molL