無菌檢驗標準操作規(guī)程(sop)

1、制藥有限公司目的：制定無菌檢驗標準操作規(guī)程，確保檢驗操作正確。范圍：本標準適用于本公司大容量注射劑無菌檢驗操作。責任者：質(zhì)管部、化驗室主任、QC檢驗員內(nèi)容：1、標準依據(jù)：《中國藥典》2010年版二部附錄XIH。2、簡述：無菌檢查方法系用于檢查藥品是否無菌的一種方法。檢查項目包括需氣菌、厭氣菌及真菌檢查。若供試品符合該項檢查方法的有關(guān)規(guī)定，僅表明了在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。3、環(huán)境要求：該項檢查應在環(huán)境潔凈度萬級（C級）背景下的局部

2、百級（A級）的單向流區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行。其全過程必須嚴格遵守無菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影響供試品中微生物的檢出。操作前環(huán)境潔凈度應經(jīng)驗證。日常檢驗需對試驗環(huán)境進行監(jiān)控。5、方法驗證：進行該項檢查前應按照《無菌檢查方法驗證規(guī)程》確認該方法的適用性。4、人員要求：無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)培訓。6、檢驗數(shù)量及檢驗量：6.1、接種每種培養(yǎng)基所需的最少檢驗數(shù)量:2%或10個（取較少者），供試品無菌檢

3、查若采用薄膜過濾法，應增加12的最小檢驗數(shù)量作陽性對照用；若采用直接過濾法，應增加供試品無菌檢查時每個培養(yǎng)基容器接種的樣品量作陽性對照用。6.2、每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量:半量（100ml≤V≤500ml），采用薄膜過濾法時，檢驗量應不少于直接接種的供試品總接種量，只要供試品特性允許，應將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。7、細菌培養(yǎng)溫度為30～35℃，真菌培養(yǎng)溫度為23～28℃。8、儀器用具：垂直層流超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、電熱恒溫

4、水浴箱、顯微鏡、手提滅菌器、離心機、雙碟、試管、三角瓶、刻度離心管、注射器（針頭）、剪刀、鑷子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光燈365nm、真空泵、HTY智能全封閉集菌儀、一次性使用集菌培養(yǎng)器。9、消毒劑配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。9.2、0.2％新潔爾滅溶液（配制消毒棉球用）。9.3、2％來蘇爾溶液（配制消毒棉球用）。10、試劑及培養(yǎng)基的配制：文件名稱無菌檢驗標準操作規(guī)程（SOP）頁碼：15文件編號版次第三版制定

5、審核批準制定日期審核日期批準日期頒發(fā)部門頒發(fā)數(shù)量生效日期分發(fā)單位一層層放好，蓋上紗布，將鋁盒蓋好，用牛皮紙包扎。11.2.3、試管、三角瓶等在管（瓶）口塞上紗布棉紗用牛皮紙包裝嚴密。11.2.6、將潔凈服、等用布口袋配套裝入，扎緊口袋，用牛皮紙包扎好。11.2.7、將以上包扎好的用具在121℃蒸汽滅菌20分鐘?；虿扇∵m宜的滅菌方法。（適宜高溫滅菌的器皿可采用160℃干熱滅菌）11.2.8、物品滅菌完畢，勿立即置冷處，以免急速冷卻導致染菌

6、，應置恒溫培養(yǎng)箱中干燥。11.3、潔凈室的清潔與滅菌11.3.1、潔凈室及超凈臺，每周用高錳酸鉀加甲醛薰蒸滅菌。11.3.2、在每次操作前，應作好清潔工作，并用0.2%新潔爾滅溶液或2%來蘇爾或75％乙醇擦洗超凈臺工作臺面及可能污染的死角，然后開啟紫外線燈殺菌半小時，超凈臺空氣過濾器自凈半小時。操作完畢后，用上述消毒液，再次處理工作臺面，開紫外光燈殺菌30分鐘以上。12、操作12.1、開啟傳遞窗外側(cè)門，將物品表面消毒后置傳遞窗內(nèi)，關(guān)閉窗

7、門。12.2、操作人員按《進入潔凈室更衣程序》洗手、更衣?lián)Q工作鞋，換無菌衣、褲、口罩。進入潔凈室內(nèi)，開啟內(nèi)側(cè)門，取出物品，關(guān)閉內(nèi)側(cè)門，經(jīng)緩沖間帶入潔凈室內(nèi)，物品放置于實驗臺上，關(guān)閉潔凈室門，人員離開潔凈室，繼續(xù)用紫外燈照射半小時，關(guān)燈，再將用具放入超凈臺內(nèi)。12.3、培養(yǎng)基適用性檢查：無菌檢查用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應符合的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品檢查前或與供試品檢查同時進行。12.3.1、無菌效果

8、檢查：每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支（瓶）培養(yǎng)14天，應無菌生長。12.3.2、靈敏度檢查：12.3.2.1、菌種及菌液制備：12.3.2.1.1、檢查用菌種包括：金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）[CMCC(B)26003]銅綠假單胞菌（Pstudomonasaeruginosa）[CMCC(B)10104]枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）[CMCC(B)63501]生孢梭菌（Clostridium

9、spgenes）[CMCC(B)64941]白色念珠菌（Cidaalbicaus）[CMCC(F)98001]黑曲菌（Aspergillusniger）[CMCC(F)98003]12.3.2.1.2、菌液制備方法：銅綠假單胞菌菌懸液的制備方法同金黃色葡萄球菌菌懸液制備方法，其他參見《無菌檢查方法驗證規(guī)程》進行。12.3.2.2、培養(yǎng)基接種：取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假