2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、酶活測定的方法酶活測定的方法[測定酶活測定酶活]1.MDA的測定的測定【原理】丙二醛在酸性和高溫度條件下,可以與硫代巴比妥酸(TBA)反應生成紅棕色的三甲川(355三甲惡唑24二酮),其最大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾,其中最主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產(chǎn)物的最大吸收波長在450nm,532nm處也有吸收。植物遭受脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDATBA反應物質(zhì)含量時一定要排除可溶性

2、糖的干擾?!驹噭?.5%10%TBATCA(1)、0.5%硫代巴比妥酸(TBA):稱取硫代巴比妥酸,先加少量氫氧化鈉(1molL)溶解,再用10%的三氯乙酸定容。(2)、10%三氯乙酸(TCA):10g三氯乙酸,蒸餾水定容至100ml。【實驗步驟】稱取剪碎試材0.15g,加入3mL10%TCA(三氯乙酸),可多次加入↓4000rmin離心15min↓吸取上清液3mL(對照加2mL蒸餾水),加入0.6%的硫代巴比妥酸(TBA)溶液1mL

3、,混勻,將混合物于沸水浴中反應15min,迅速在冷水中冷卻?!∩锨逡簻y定450﹑532和600nm波長下的消光度。按下式直接計算得植物樣品提取液中MDA的濃度。計算丙二醛含量C=6.45(A532A600)-0.56A450單位:μmolL【步驟】粗酶液提?。喝≈参锊牧?.1g(材料重量記錄),用預冷的PBS在預冷的研缽中研磨,加入2mL含有0.05molL磷酸緩沖液(pH=7.8),分次加入PBS,勻漿液在低溫離心機(4℃)中經(jīng)10

4、000g離心40min。上清液用于測定(樣品液總體積記錄)。取透明度高的試管3支,2支為對照管,1支為測定管。試劑123反應介質(zhì)ml444酶提取液μl100100100磷酸緩沖液ml00備注待測樣品空白無酶反應液(對照)↓2號管用黑紙包上,比色時作空白對照,與其余2支管一起放在熒光燈下,光強60μmolm2s,照光30min,然后用黑布罩上。↓以不照光的對照管作空白,分別測定其它各管的吸光度,每個處理重復3次。計算計算SOD總活力=??

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