制藥分離工程實驗指導(dǎo)定稿

1、制藥分離工程實驗指導(dǎo)四川理工學(xué)院四川理工學(xué)院制藥分離工程實驗指導(dǎo)制藥分離工程實驗指導(dǎo)第一版第一版制藥工程系制藥工程系編二○一二一二年制藥分離工程實驗細(xì)胞SOD的提取和分離實驗一實驗一細(xì)胞細(xì)胞SOD的提取和分離的提取和分離一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?掌握有機(jī)溶劑沉淀法的原理和基本操作。2掌握SOD酶提取分離的一般步驟。二、實驗原理二、實驗原理超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)是一種具有抗氧化、抗衰老、抗輻射和消

2、炎作用的藥用酶。它可催化超氧負(fù)離子(O2)進(jìn)行歧化反應(yīng)，生成氧和過氧化氫。大蒜蒜瓣和懸浮培養(yǎng)的大蒜細(xì)胞中含有較豐富的SOD，通過組織或細(xì)胞破碎后，可用pH7.8的磷酸緩沖溶液提取出來。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮將其沉淀析出。有機(jī)溶劑沉淀的原理是有機(jī)溶劑能降低水溶液的介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子之間的靜電引力增大。同時，有機(jī)溶劑的親水性比溶質(zhì)分子的親水性強(qiáng)，它會搶奪本來與親水溶質(zhì)結(jié)合的自由水，破壞其表面的水化膜，導(dǎo)致溶質(zhì)分子之間的相互作用增

3、大而發(fā)生聚集，從而沉淀析出。三、試劑與儀器三、試劑與儀器1.試劑與材料新鮮蒜瓣、0.05molL磷酸緩沖液（pH7.8）、氯仿乙醇混合液：氯仿:無水乙醇=3:5、丙酮：用前需預(yù)冷至410℃、0.05molL碳酸鹽緩沖液（pH10.2）、0.1molLEDTA溶液、2mmolL腎上腺素溶液2.儀器恒溫水浴鍋、冷凍高速離心機(jī)、可見分光光度計、研缽、玻棒、燒杯、量筒四、實驗步驟四、實驗步驟1.組織細(xì)胞破碎：稱取5g大蒜蒜瓣，置于研缽中研磨。2

4、.SOD的提?。浩扑楹蟮慕M織中加入23倍體積的0.05molL磷酸緩沖液（pH7.8），繼續(xù)研磨20min，使SOD充分溶解到緩沖液中，然后在5000rpm下離心15min，取上清液。3.除雜蛋白：上清液加入0.25體積的氯仿乙醇混合液攪拌15min，5000rpm離心15min，得到的上清液為粗酶液。4.SOD的沉淀分離：粗酶液中加入等體積的冷丙酮，攪拌15min，5000rpm離心15min，得SOD沉淀。將SOD沉淀溶于0.05m