制藥分離工程實驗指導定稿

1、制藥分離工程實驗指導四川理工學院四川理工學院制藥分離工程實驗指導制藥分離工程實驗指導第一版第一版制藥工程系制藥工程系編二○一二一二年制藥分離工程實驗細胞SOD的提取和分離實驗一實驗一細胞細胞SOD的提取和分離的提取和分離一、實驗目的一、實驗目的1掌握有機溶劑沉淀法的原理和基本操作。2掌握SOD酶提取分離的一般步驟。二、實驗原理二、實驗原理超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)是一種具有抗氧化、抗衰老、抗輻射和消

2、炎作用的藥用酶。它可催化超氧負離子(O2)進行歧化反應，生成氧和過氧化氫。大蒜蒜瓣和懸浮培養(yǎng)的大蒜細胞中含有較豐富的SOD，通過組織或細胞破碎后，可用pH7.8的磷酸緩沖溶液提取出來。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮將其沉淀析出。有機溶劑沉淀的原理是有機溶劑能降低水溶液的介電常數(shù)，使蛋白質分子之間的靜電引力增大。同時，有機溶劑的親水性比溶質分子的親水性強，它會搶奪本來與親水溶質結合的自由水，破壞其表面的水化膜，導致溶質分子之間的相互作用增

3、大而發(fā)生聚集，從而沉淀析出。三、試劑與儀器三、試劑與儀器1.試劑與材料新鮮蒜瓣、0.05molL磷酸緩沖液（pH7.8）、氯仿乙醇混合液：氯仿:無水乙醇=3:5、丙酮：用前需預冷至410℃、0.05molL碳酸鹽緩沖液（pH10.2）、0.1molLEDTA溶液、2mmolL腎上腺素溶液2.儀器恒溫水浴鍋、冷凍高速離心機、可見分光光度計、研缽、玻棒、燒杯、量筒四、實驗步驟四、實驗步驟1.組織細胞破碎：稱取5g大蒜蒜瓣，置于研缽中研磨。2

4、.SOD的提?。浩扑楹蟮慕M織中加入23倍體積的0.05molL磷酸緩沖液（pH7.8），繼續(xù)研磨20min，使SOD充分溶解到緩沖液中，然后在5000rpm下離心15min，取上清液。3.除雜蛋白：上清液加入0.25體積的氯仿乙醇混合液攪拌15min，5000rpm離心15min，得到的上清液為粗酶液。4.SOD的沉淀分離：粗酶液中加入等體積的冷丙酮，攪拌15min，5000rpm離心15min，得SOD沉淀。將SOD沉淀溶于0.05m