2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、考馬斯亮藍(lán)法(Bradfd)測蛋白濃度考馬斯亮蘭法:一種蛋白定量法具體操作步驟:(一)實(shí)驗(yàn)原理雙縮脲法(Biuret法)和Folin—酚試劑法(Lowry法)的明顯缺點(diǎn)和許多限制,促使科學(xué)家們?nèi)ふ腋玫牡鞍踪|(zhì)溶液測定的方法。1976年由Bradfd建立的考馬斯亮蘭法(Bradfd法),是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的。這種蛋白質(zhì)測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點(diǎn),因而正在得到廣泛的應(yīng)用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測定法???/p>

2、馬斯亮蘭G250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm變?yōu)?95nm,溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。經(jīng)研究認(rèn)為,染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合。在595nm下測定的吸光度值A(chǔ)595,與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradfd法的突出優(yōu)點(diǎn)是:(1)靈敏度高,據(jù)估計比Lowry法約高四倍,其最低蛋白質(zhì)檢測量可達(dá)1mg。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大,蛋

3、白質(zhì)-染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多。(2)測定快速、簡便,只需加一種試劑。完成一個樣品的測定,只2.器材:(1)可見光分光光度計(2)旋渦混合器(3)試管16支(三)操作方法1.標(biāo)準(zhǔn)方法(1)取16支試管,1支作空白,3支留作未知樣品,其余試管分為兩組按表中順序,分別加入樣品、水和試劑,即用1.0mgml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液給各試管分別加入:0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.

4、08、0.1ml,然后用無離子水補(bǔ)充到0.1ml。最后各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭G—250試劑,每加完一管,立即在旋渦混合器上混合(注意不要太劇烈,以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除)。未知樣品的加樣量見下表中的第8、9、10管??捡R斯亮蘭法實(shí)驗(yàn)表管號12345678910標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)(1.0mgml)00.010.020.040.060.080.10蒸餾水0.10.090.080.060.040.020.0考馬斯亮藍(lán)G-250試劑55

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