藍(lán)隱藻藻藍(lán)蛋白性質(zhì)以及組成的研究.pdf

1、分類號(hào)：P735學(xué)號(hào)：201300370002碩士學(xué)位論文藍(lán)隱藻藻藍(lán)蛋白性質(zhì)以及組成的研究藍(lán)隱藻藻藍(lán)蛋白性質(zhì)以及組成的研究InvestigationofacteristicsCompositionofPhycocyaninfromChroomonasplacoidea研究生姓名研究生姓名：王寧：王寧指導(dǎo)教師：師：陳敏陳敏教授教授學(xué)科門類：理學(xué)理學(xué)專業(yè)名稱：海洋生物學(xué)海洋生物學(xué)論文提交日期論文提交日期：20201616年4月1日摘要摘要本

2、實(shí)驗(yàn)以在本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的藍(lán)隱藻（ChroomonasplacoideaT13）的藻藍(lán)蛋白PC645作為材料，探索了藻藍(lán)蛋白的存在狀態(tài)與鎂離子濃度的關(guān)系，并對(duì)在不同硫酸銨飽和度下所得的各級(jí)藻藍(lán)蛋白樣品的亞基組成、比例及疏水特性進(jìn)行了定量研究。采用蔗糖密度梯度離心方法，分離并觀察到了比異二聚體分子量更大的PC645復(fù)合物的存在，該復(fù)合物在以往的文獻(xiàn)中未曾報(bào)道。對(duì)純化后的藻藍(lán)蛋白聚合條件的研究結(jié)果表明，在加入的鎂離子濃度在0~50mmolL時(shí)，

3、藻藍(lán)蛋白基本集中于0.4molL~0.5molL蔗糖梯度范圍，以異二聚體形態(tài)為主；但在100mmolL以上時(shí)，隨著鎂離子濃度的提高，出現(xiàn)一定比例的解聚的藻藍(lán)蛋白單體形式，證實(shí)高濃度鎂離子不利于藻藍(lán)蛋白的聚合。利用變性IEF、SDSPAGE電泳技術(shù)對(duì)70%、80%、90%、100%的硫酸銨分級(jí)沉淀法所得各級(jí)藻藍(lán)蛋白純化樣品（A645A280＞7）的亞基進(jìn)行定性、定量分析。確定了純化后的藻藍(lán)蛋白至少含有四種發(fā)光亞基，即α1（9kDa，pI≈

4、9.1）、α2（8.3kDa，pI≈7.1）、β1（20.3kDa，pI≈6.0）、β2（16.7kDa，pI≈5.7）。且不同硫酸銨飽和度下所得的PC645沉淀樣品中β2亞基的相對(duì)含量與硫酸銨飽和度的增加（水溶性增加）呈負(fù)相關(guān)。說明藍(lán)隱藻中PC645的存在形式不是單一的，并且β2亞基所占比例的不同可能會(huì)導(dǎo)致其疏水性差異。對(duì)不同硫酸銨飽和度下所得的PC645沉淀樣品進(jìn)行疏水性分析的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，70%沉淀樣品可以產(chǎn)生3種疏水性不同的洗脫

5、峰（大峰、肩峰、小峰），說明沉淀物是由不同的疏水性混合組分構(gòu)成；而80%、90%、100%沉淀樣品的洗脫組分中疏水性最弱的大峰組分的相對(duì)含量有逐漸增加的趨勢(shì)，疏水性較強(qiáng)的肩峰和小峰組分的相對(duì)含量逐漸減少，甚至消失。分析顯示，三種疏水性不同的組分都是異二聚體PC645，且光譜特性沒有明顯區(qū)別。我們由上述結(jié)果推測(cè)，PC645在葉綠體中的存在狀態(tài)可能是不均一的；不同硫酸銨飽和度下得到的疏水程度不同的PC645樣品可能是由至少兩種以上的異二聚體