14870.藍隱藻藻懶蛋白結(jié)構(gòu)及功能研究

1、煙臺大學(xué)碩士畢業(yè)論文煙臺大學(xué)碩士畢業(yè)論文I摘要摘要本文以源于海生藍隱藻（ChroomonasplacoideaT13）的藻藍蛋白PC645為材料，經(jīng)分離純化后，對其亞基構(gòu)成、復(fù)合物組裝、活性構(gòu)象、能量傳遞和抗氧化性質(zhì)進行了研究。經(jīng)二維電泳分離、蛋白轉(zhuǎn)印、N末端序列測定、質(zhì)譜鑒定等，確定了隱藻PC645中新的發(fā)光β亞基—β2的存在，該亞基比已知的β1亞基等電點更低（pI=5.7），分子量也更?。?8.5kDa），肽指紋圖譜數(shù)據(jù)表明其一級序

2、列可能在β16～30和β79～84兩個位點存在差異；SDSPAGE電泳分析表明，經(jīng)不同濃度硫酸銨分級沉淀并純化后的PC645，所含有的α和β亞基的比例不完全相同，且β2亞基在疏水性低的沉淀物中比例更高，該亞基可能與PC645的疏水性直接相關(guān)；采用蔗糖密度超離心法得到了以往的文獻中未見報道PC645的大分子復(fù)合物，初步分析顯示其多肽構(gòu)成與解離后的PC645不同。確定PC645的亞基二級結(jié)構(gòu)，天然狀態(tài)下?螺旋約占28%，?折疊為15%。同步

3、監(jiān)測變性和復(fù)性過程中PC645的吸收、熒光和圓二色譜，發(fā)現(xiàn)PC645在很寬的pH范圍和一定濃度的尿素中維持結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定，空間結(jié)構(gòu)柔性很強。提出其蛋白構(gòu)象與功能變化可分為三個不同的區(qū)段：穩(wěn)定區(qū)（pH3.5～7）、次穩(wěn)定區(qū)（pH7～10）和不穩(wěn)定區(qū)（pH?3.5和pH?10）。PC645在酸性條件下的穩(wěn)定性高于在堿性環(huán)境下，是與隱藻藻藍蛋白所處的特殊環(huán)境及生理功能相適應(yīng)的。首次獲得PC645190nm～750nm全波段的圓二色譜（CD）

4、譜數(shù)據(jù)并做了初步解析。初步判定PC645吸收光譜中的4個吸收峰（540nm肩峰、582nm、629nm肩峰和645nm），分別對應(yīng)的色基分別為DBV（β1）DBV（β2）耦合對、MBV、PCB（β158）PCB（β82）耦合對和PCB（β82）；其中，耦合體內(nèi)以激子分裂進行能量傳遞，耦合體之間以福斯特共振進行能量傳遞；天冬氨酸可廣泛參與到耦合體之間的電子傳遞；酪氨酸與PCB（β82）共同處于保守的蛋白微環(huán)境中，并可能通過氫鍵共軛造成吸收