鈍頂螺旋藻（Spirulina platensis）藻藍(lán)蛋白的酶解及酶解產(chǎn)物的生物活性研究.pdf

1、自由基過剩是機(jī)體衰老的主要原因，可引起多種疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病、腦神經(jīng)細(xì)胞變性、糖尿病及腫瘤等)。目前，服用過多的合成抗衰老藥物對(duì)人體有毒副作用。因此，尋求新的天然抗氧化劑、抗衰老藥物對(duì)人類健康具有重要意義，海洋生物抗氧化劑因其抗氧化作用強(qiáng)、種類多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、副作用低等優(yōu)點(diǎn)成為人們研究的熱點(diǎn)。研究表明，螺旋藻和藻膽蛋白具有抗氧化活性，能抑制機(jī)體內(nèi)自由基積累，延緩機(jī)體衰老，抑制腫瘤的發(fā)生，并具有降血壓活性。國外已有報(bào)道，從紫球

2、藻中己得到具有明顯降血壓作用的活性肽。因此合理開發(fā)和利用螺旋藻及藻藍(lán)蛋白提高其應(yīng)用價(jià)值對(duì)人類抗衰老工程具有極其重要的意義。 本論文以鈍頂螺旋藻(SPirulina platensis)及其所含的藻藍(lán)蛋白為研究對(duì)象，圍繞其高值化開發(fā)利用這一研究主題，進(jìn)行了研究，結(jié)果如下： 采用胰蛋白酶酶解螺旋藻干粉的蛋白粗提液得到抗氧化、降血壓活性增強(qiáng)的產(chǎn)物，提高了干藻粉的應(yīng)用價(jià)值。螺旋藻粉粗提液經(jīng)過兩種不同的酶解方法進(jìn)行酶解，酶解

3、過程中光譜變化不同，但都能有效提高螺旋藻干藻粉抗氧化、降血壓活性。一種方法反應(yīng)體系為蛋白粗提液、胰蛋白酶、pH7.0磷酸鹽緩沖體系，此方法酶解后，酶解產(chǎn)物在620 nm／1處藻藍(lán)蛋白特征吸收峰降低，但仍具有吸收和傳遞能量的功能，清除自由基能力與降血壓活性增強(qiáng)，另一種方法反應(yīng)體系為蛋白粗提液、胰蛋白酶、pH7.0磷酸鹽緩沖體系、HCl、NH4HCO<,3>，酶解產(chǎn)物在620nm處藻藍(lán)蛋白特征吸收峰變化明顯，幾乎不具備吸收和傳遞能量的功能，

4、自由基清除能力與降血壓活性增強(qiáng)，且略高于前一種方法。酶解產(chǎn)物在620nm處的藻藍(lán)蛋白的藻藍(lán)膽素特征吸收峰發(fā)生變化，說明其生物活性功能與藻藍(lán)蛋白結(jié)構(gòu)變化有關(guān)，后面的藻藍(lán)蛋白的酶解利用實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。 與傳統(tǒng)的藻藍(lán)蛋白提取方法相比，本論文建立了藻藍(lán)蛋白的制備型分離純化方法，節(jié)省了純化步驟，提高了純化效率，為藻藍(lán)蛋白的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)通過硫酸銨鹽分級(jí)沉淀，pH5.0醋酸鹽緩沖體系改變蛋白構(gòu)象，去除連接蛋白，再經(jīng)過陰離子交換樹

5、脂層析，得到純化的CPC。該方法步驟簡單，與傳統(tǒng)的HA層析方法相比，提高了上樣量，節(jié)約時(shí)間，降低了藻藍(lán)蛋白制備成本，而且層析柱再生容易，可重復(fù)使用，為藻藍(lán)蛋白的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。通過光譜分析技術(shù)研究了藻藍(lán)蛋白酶解過程中藻藍(lán)蛋白的結(jié)構(gòu)與抗氧化活性變化的關(guān)系，為高活性抗氧化肽的制備奠定了理論基礎(chǔ)。胰蛋白酶的作用位點(diǎn)為堿性氨基酸，CPC經(jīng)過胰蛋白酶酶解后，隨著時(shí)間的延長，其吸收光譜也發(fā)生明顯的變化，但都表現(xiàn)出與藻藍(lán)膽素相近的吸收峰。酶解產(chǎn)物