牡蠣酶解產(chǎn)物胰蛋白酶抑制活性的研究.pdf

1、本文研究了太平洋牡蠣的酶解條件及其酶解產(chǎn)物對(duì)胰蛋白酶活性的抑制作用。選取胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、3942中性蛋白酶、Alcalase堿性蛋白酶等對(duì)牡蠣進(jìn)行水解，以水解液中氨基酸態(tài)氮(AAN)的含量為指標(biāo)，確定了3種水解效果較好的酶：Alcalase堿性蛋白酶、胰蛋白酶和菠蘿蛋白酶。利用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)分別對(duì)這三種酶單獨(dú)水解牡蠣的條件進(jìn)行了研究，得出三種酶水解牡蠣的最佳條件分別為Alcalase：溫度50℃，pH8

2、.5，料水比(W/V)1：3，加酶量1200U/g，時(shí)間4h；胰蛋白酶：溫度45℃，pH8.1，料水比1：3，加酶量1200U/g，時(shí)間4h；菠蘿蛋白酶：溫度50℃，pH5.5，料水比1：3，加酶量1400U/g，時(shí)間6h；為牡蠣生物活性肽的開(kāi)發(fā)提供了基礎(chǔ)參考數(shù)據(jù)。在此基礎(chǔ)上研究了牡蠣的復(fù)合酶解條件，確定最佳的復(fù)合條件為：料水比1：3，體系最初pH為8.5，溫度50℃，加入Alcalase600U/g水解3h，然后調(diào)節(jié)pH到5.5，加入

3、菠蘿蛋白酶700U/g繼續(xù)水解3h，滅酶。另外還研究了酶解之前牡蠣肉的熱變性處理對(duì)水解效果的影響。 建立了胰蛋白酶抑制活性的測(cè)定方法，采用5K、3K和1K的超濾膜把水解液分成4個(gè)組分，測(cè)定了不同分子量范圍的超濾液的胰蛋白酶抑制活性。用分子篩層析對(duì)水解液不同組分進(jìn)行了進(jìn)一步分離，并測(cè)定了每個(gè)洗脫峰的活性，結(jié)果表明分子量較大的肽組分對(duì)胰蛋白酶的抑制作用比較強(qiáng)。選取不同的酶處理時(shí)間，研究了酶解時(shí)間長(zhǎng)短與水解液胰蛋白酶抑制活性的關(guān)系，水

4、解時(shí)間越長(zhǎng)水解液對(duì)胰蛋白酶的抑制活性就越低。對(duì)不同組分的水解液進(jìn)行了紫外掃描并作了光譜分析，對(duì)抑制活性較高的復(fù)合水解2h組分和牡蠣直接提取液進(jìn)行了進(jìn)一步層析分離，結(jié)果表明第一個(gè)洗脫峰對(duì)胰蛋白酶的抑制作用最強(qiáng)。復(fù)合酶水解2h組分過(guò)SephadexG-25柱得到第一個(gè)峰的IC50是1.894mg/ml，直接提取液過(guò)層析柱得到第一個(gè)峰的IC50是0.658mg/ml。 對(duì)牡蠣提取物不同組分進(jìn)行了氨基酸分析和SDS-PAGE電泳分析。牡