羅非魚鱗膠原蛋白酶解產(chǎn)物抗疲勞活性的研究.pdf

1、目前，羅非魚的年產(chǎn)量超過370萬噸，中國是全球最大的羅非魚生產(chǎn)國，約占全球總產(chǎn)量的49％，然而羅非魚加工過程中會產(chǎn)生大量下腳料，占加工魚總質(zhì)量的50%~70%，其中約5%是魚鱗。因此每年產(chǎn)生的下腳料中魚鱗可達(dá)20萬噸。羅非魚鱗膠原蛋白含量豐富，是提取膠原蛋白及制備膠原蛋白產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)原料。
　　本研究以脫鈣羅非魚鱗為原料，采用2種不同方式制備酶解產(chǎn)物。一是利用酶法提取膠原蛋白，然后進(jìn)行酶解；二是直接酶解脫鈣魚鱗進(jìn)行制備并對這兩種酶解

2、產(chǎn)物進(jìn)行抗疲勞活性研究。取得的主要研究結(jié)果如下：
　?。?）脫鈣羅非魚鱗中粗蛋白的含量為85.05%（干基），膠原蛋白含量為67.47%（干基），占總蛋白含量的79.33%。可見脫鈣羅非魚鱗是一種生產(chǎn)膠原蛋白及其產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)原料。以脫鈣魚鱗為原料提取了酶促酸溶膠原蛋白（PSC），得率為19%，并對PSC進(jìn)行了理化性質(zhì)的分析。結(jié)果表明：PSC是Ⅰ型膠原蛋白，組成形式是α1α2α3型；氨基酸組成中亞氨基酸的含量較高為187；等電點(diǎn)為7.

3、24，變性溫度為35.42℃；PSC的分子交聯(lián)程度高，但結(jié)構(gòu)較松散。
　?。?）采用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解脫鈣魚鱗。以水解度為指標(biāo)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，以便篩選適宜的酶解條件。結(jié)果表明適宜的條件為：按魚鱗與水比例1：5加水，添加10000U/g（原料重量）中性蛋白酶和木瓜蛋白酶（兩者比例為1：1），在pH6、溫度65℃下水解3 h。在此條件下酶解PSC和脫鈣魚鱗制備酶解產(chǎn)物C和S的得率分別高達(dá)85.5%和84.7%。酶解產(chǎn)物S和C的

4、粗蛋白含量分別為92.33%和92.52%，氨基酸組成十分相似，其中甘氨酸含量最高分別為22.05%和22.47%；天冬氨酸和精氨酸的含量占總氨基酸的12.98%和13.70%；組氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和羥脯氨酸等氨基酸含量十分豐富，分別高達(dá)40.67%和39.27%。測定了S和C的分子量分布，S和C的分子量都集中在較小的范圍，小于6000Da的酶解產(chǎn)物在90%以上。S的分子量主要集中在831-5450Da，含量

5、高達(dá)90.70%，C的分子量主要集中在738-5513Da，含量達(dá)86.43%。
　?。?）通過動物實(shí)驗(yàn)考察了S和C的抗疲勞活性。分別測定連續(xù)灌胃酶解產(chǎn)物S和C30天的小鼠的負(fù)重游泳時間、血清尿素氮含量、肝糖原含量。結(jié)果表明，S和C均能顯著（P<0.05）延長小鼠的負(fù)重游泳時間，降低血清尿素氮的含量，降低肝糖原的消耗，并且在相同劑量時S和C之間沒有顯著性差異。證明S和C均具有抗疲勞性，且兩者之間沒有顯著性差異。
　?。?）采

6、用Sephadex G-25葡聚糖凝膠對酶解產(chǎn)物S進(jìn)行分離，洗脫液為純水，流速為0.5mL/min，上樣量為1.5 mL，樣品濃度30mg/mL，檢測波長為220nm的條件下分離效果最好，可以分離出3個峰。由于峰Ⅰ的量很少，僅對峰Ⅱ（S2）和峰Ⅲ（S3）進(jìn)行收集，濃縮，冷凍干燥。經(jīng)測定可知，S2的蛋白含量為83.47%，S3的蛋白含量為83.56%。測定了S2和S3的分子量分布，S2中大分子量的含量增加，S3的小分子含量增加。
　

7、?。?）對酶解產(chǎn)物 S及分離組分 S2、S3進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)，通過測定小鼠的負(fù)重游泳時間、血清尿素氮的含量及肌肉乳酸的生成考察它們的抗疲勞性；通過測定谷胱甘肽過氧化物酶活力、丙二醛（MDA）及總抗氧化能力考察其抗氧化活性。與此同時，分析抗疲勞指標(biāo)與抗氧化活性之間的相關(guān)性?？蛊谥笜?biāo)的測定結(jié)果表明：S2和 S3均能顯著（P<0.05）延長小鼠的負(fù)重游泳時間，降低小鼠血清尿素氮的含量，阻礙小鼠肌肉乳酸的生成；S3組小鼠肝糖原的含量顯著（P<0.

8、05）高于空白組，S2組肝糖原含量雖然高于空白組，但差異性不顯著（P>0.05）。證明S2和S3均具有抗疲勞性，并且S3的3個理化指標(biāo)均優(yōu)于S2，但是S2的負(fù)重游泳時間卻比S3長，且差異性顯著（P<0.05）?？寡趸笜?biāo)的測定結(jié)果表明：S2組的谷胱甘肽過氧化物酶活力顯著（P<0.05）高于空白組，S3組高于空白組但差異性不顯著（P>0.05）；S2組和S3組的丙二醛（MDA）的含量均顯著（P<0.05）低于空白組；S2組和S3組的總抗氧