藍圓鲹蛋白酶解物的制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、藍圓鲹(Decapterus maruadsi)是我國大宗低值魚資源的重要品種之一，由于其色暗和容易氧化而被有限使用，一般用于制成肥料和動物飼料，有些甚至直接丟棄，造成了極大的資源浪費。本文以藍圓鲹為對象，采用生物酶解、抗氧化實驗、螯合、凝膠色譜、反相高效液相色譜和質譜等方法，系統(tǒng)的研究了酶解工藝的主要參數(shù)、酶解物體內體外抗氧化活性、螯合對酶解物穩(wěn)定性的影響、抗氧化肽的分離純化和結構表征，為開發(fā)藍圓鲹抗氧化肽功能性產(chǎn)品提供理論依據(jù)。主要

2、結果如下：
　　1.以藍圓鲹蛋白為底物，分別用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和Alcalase在各自適宜條件下進行酶解，比較酶解物的水解度、蛋白回收率和自由基清除率。結果表明藍圓鲹魚肉蛋白在中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的作用下，其水解度、蛋白回收率和自由基清除率較高；在此基礎上用復合酶解新技術對藍圓鲹魚肉進行水解研究。以水解度、蛋白回收率、自由基清除率為指標，最終確定復合酶解藍圓鲹魚肉蛋白制備多肽的最佳工藝條件為

3、：在水料比1:2、pH為7.5、溫度50℃、酶總量為0.3％且酶配比為1:1條件下，酶解方式為中性蛋白酶和胰蛋白酶同時加入，酶解時間為5h；該條件下制備的魚肉蛋白酶解產(chǎn)物水解度和蛋白質回收率分別為25.86%、75.24%，還原力為0.452，DPPH·和OH·半清除率分別為6.38mg/mL和14.45mg/mL。
　　2.以藍圓鲹酶解物和金屬離子為原料合成金屬螯合物，采用火焰原子吸收分光光度法，對螯合條件（質量比，反應溫度，反

4、應時間及 pH）進行了研究。確定最佳螯合條件為：以抗氧化肽:鹽質量比15:1，pH為7在40℃下反應40min；該條件下得出的螯合物具有較高的螯合率。且酶解物與三種金屬離子螯合產(chǎn)物中，鈣離子螯合物抗氧化效果最好。選擇抗氧化性較好的鈣離子螯合物做穩(wěn)定性分析，比較不同儲藏方式、熱處理、pH及模擬消化道環(huán)境對螯合物和酶解物的抗氧化穩(wěn)定性的影響，該條件下制備的金屬螯合抗氧化肽具有較弱的耐熱性和較強的耐酸耐堿性，低溫條件下儲藏有利于保持其抗氧化活

5、性。
　　3.探究了不同分子量的藍圓鲹蛋白酶解物的抗氧化活性，酶解物用三種不同的超濾膜（MW50，10 and5 kDa）分成四個組分(RSPH-I，RSH-II，RSPH-III，RSPH-IV)。各組分顯示出不同的抗氧化活性，其中小于5 kDa(RSPH-IV)組分抗氧化活性最強。采用Sephadex G-25凝膠色譜法將RSPH-IV分成四個組分（A,B,C,D），并分別檢測各組分的還原力和自由基清除率，最后篩出B為抗氧化能

6、力最高的部分，其余三組分的抗氧化能力依次為 C＞D＞A.并對組分 B進行分子量分布分析，發(fā)現(xiàn)該肽段的相對分子量主要集中在335到1062 kDa.隨后采用制備柱RP-HPLC將B分成6個組分(B1，B2，B3，B4，B5，B6)，以自由基捕獲率為指標篩選出具有較強抗氧化活性的組分 B3，經(jīng) RP-HPLC純度鑒定為單一峰；通過Orbitrap-LC-MS二級質譜，鑒定出組分B2的相對分子量對506 Da，氨基酸序列為KGFR(Lys-G