藍(lán)圓鲹礦物元素結(jié)合肽的制備分離及其抗氧化活性研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以藍(lán)圓鲹為原料，研究水解度對(duì)酶解物螯合活性的影響，在三種蛋白酶酶解的最適溫度、pH值條件下，確定酶解時(shí)間，以獲得與Ca2+、Fe2+、Zn2+具有最高螯合活性的酶解物，同時(shí)研究酶解物的抗氧化穩(wěn)定性，為制備礦物離子結(jié)合肽提供基礎(chǔ)。將酶解物使用固定化離子親和色譜進(jìn)行分離，分離后產(chǎn)物進(jìn)行氨基酸分析和分子量排布及礦物元素結(jié)合肽的抗氧化活性。
　　1.以藍(lán)圓鰺為原料，采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及Alcalase堿性蛋白酶對(duì)其進(jìn)行水解，研

2、究了酶解產(chǎn)物與鈣、亞鐵、鋅離子的螯合活性。結(jié)果表明：藍(lán)圓鲹經(jīng)胰蛋白酶水解，水解度為23.14％時(shí)其產(chǎn)物具有較高螯合鐵、鋅離子的活性，其螯合率分別高達(dá)96.63%和94.28%；藍(lán)圓鲹經(jīng)木瓜蛋白酶水解，水解度為22.0%時(shí)，其產(chǎn)物具有較高螯合鈣離子的活性，其螯合率高達(dá)96.78%；同時(shí)研究表明上述兩種酶解物還具有較好的抗氧化活性，其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）半清除

3、率IC50值分別為3.74mg/mL和3.64mg/mL。此外，氨基酸分析表明藍(lán)圓鰺高螯合礦物離子活性的酶解物中Glu、Asp、Lys含量較高。
　　2.Tricine-SDS-PAGE小肽電泳分析顯示，隨酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，酶解物中大分子蛋白逐漸減少，小分子蛋白或肽類增多。
　　3.以藍(lán)圓鲹胰蛋白酶解物和木瓜蛋白酶解物的DPPH清除能力和還原力為指標(biāo)，研究保存溫度、pH、食品添加劑、金屬離子和胃腸道消化對(duì)兩種酶解物抗氧化穩(wěn)定性

4、的影響。結(jié)果顯示：兩種酶解產(chǎn)物在一定范圍內(nèi)均具有良好的熱穩(wěn)定性，酸性環(huán)境中其抗氧化穩(wěn)定性較好，堿性環(huán)境中其抗氧化活性明顯降低。實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)的NaCl、木糖對(duì)酶解產(chǎn)物的抗氧化穩(wěn)定性影響不大，葡萄糖、果糖、檸檬酸均能增強(qiáng)兩種酶解物的抗氧化活性。本實(shí)驗(yàn)中添加的5種金屬離子均對(duì)酶解物產(chǎn)生一定影響，經(jīng)分析得出金屬離子對(duì)酶解產(chǎn)物的影響力大小為：Cu2+>Zn2+>Ca2+>K+>Mg2+。
　　人工胃腸道消化模型試驗(yàn)中，藍(lán)圓鲹酶解物經(jīng)胃蛋白

5、消化后抗氧化活性降低，隨后在模擬腸道消化中，產(chǎn)物的抗氧化能力有所提高，并保持一定抗氧化活性。這一結(jié)果肯定了在膳食中添加多肽的研究意義。
　　4.采用超濾的方法對(duì)藍(lán)圓鲹酶解物進(jìn)行分離，比較分子量小于5kDa，分子量大于5kDa小于10kDa、分子量大于10kDa的三個(gè)組分的抗氧活性。結(jié)果表明：分子量小于10kDa組分抗氧化活性較強(qiáng)。分別采用固定化鈣離子、鋅離子、亞鐵離子親和色譜（Ca2+、Zn2+、Fe2+-IMAC）對(duì)兩種酶解物進(jìn)