皺紋盤鮑性腺抗氧化肽的制備及其活性分析.pdf

1、橐萎夫學工程碩士專業(yè)學位論文皺紋盤鮑性腺抗氧化肽的制備及其活性分析PreparationandresearchonantioxidantpeptidesfromhydroIySateSofPacificabalone(Haliotisdiscushanna刁gonads論文答辯日期：2Q曼壘生魚月量旦皺紋盤鮑性腺抗氧化肽的制備及其活性分析摘要長期以來，皺紋盤鮑是我國重要的海洋經(jīng)濟貝類之一，鮑魚的加工與食用以腹足為主。在鮑魚的加工過程中，

2、占總重量1525％的內臟沒有得到充分利用。利用鮑魚加工副產(chǎn)物為原料，制備具有抗氧化功能的生物活性肽，開發(fā)功能性食品，達到減少生物資源浪費，同時提高產(chǎn)品附加值。本文以鮑魚性腺為原料，通過可控酶解技術制備抗氧化肽，并利用3種體外化學模型(DPPH清除能力，OH清除能力和Fe2還原力)綜合評價了鮑魚性腺小肽的抗氧化活性，同時采用超濾、凝膠色譜、反相高效液相色譜(I沖HPLC)等分離技術對鮑魚性腺小肽進行分離純化及分子量鑒定。采用木瓜蛋白酶、中

3、性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶、復合蛋白酶5種蛋白酶酶解鮑魚性腺，酶解效果通過SDSPAGE電泳分析和DPPH清除能力評價。篩選得到酶解效果較好的為木瓜蛋白酶和復合蛋白酶，并優(yōu)化兩種酶酶解條件。最終確定兩種酶解方案：其中，雙酶法最佳酶解工藝條件是：第一次酶解所用為木瓜蛋白酶，加酶量05％(3975U／g)，溫度60℃，反應時間2h，pH70，料液比1：10，第二次酶解所用為復合蛋白酶，加酶量1％(3670U／g)，反應時間2h；單酶法最

4、佳酶解工藝條件是：木瓜蛋白酶加酶量2％(15900U／g)，溫度50℃，pH60，料液比為1：10，反應時間2h。3種體外化學模型綜合評估單酶法制備的鮑魚性腺小肽的抗氧化活性，結果表明：在O10mg／mL濃度范圍內，鮑魚性腺酶解液對DPPH的清除能力較強，其IC50值為585mg／mL；在OH清除能力上，酶解液清除力與Vc相當，兩者的IC50值分別為07mg／mL和05mg／mL；而酶解液也具備一定的還原能力，其ACo5值為78mg／m

5、L。利用30KDa和5kDa超濾、SepahdexG25、SephadexG15、Superdexpeptide10／300GL以及RPHPLC等分離技術對雙酶法和單酶法制備的鮑魚性腺酶解小肽進行分離純化。通過I沖一HPLC分析發(fā)現(xiàn)，單酶法和雙酶法得到單一組分疏水性強弱不一樣，單酶法得到單一組分主要屬于疏水性組分，而雙酶法得到的單一組分主要是親水性組分。通過質譜分析雙酶法得到的單一組分分子量為656Da。本研究建立了從鮑魚性腺制備抗氧化