大米蛋白酶解物抗氧化作用研究.pdf

1、本研究以大米蛋白為原料，探討大米蛋白酶解物的抗氧化作用。通過體外試驗，確定大米蛋白最佳酶解條件及最佳抗氧化效果的添加劑量；進一步采用昆明系小鼠體內(nèi)試驗，研究大米蛋白酶解物對正常小鼠血漿、肝臟和腎臟抗氧化功能的影響，旨在為大米蛋白抗氧化肽的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。 一、大米蛋白抗氧化酶解條件的優(yōu)化試驗 選用枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解大米蛋白，以羥自由基清除率作為測定指標，通過單因素和正交試驗優(yōu)化酶解條件，確定不

2、同蛋白酶酶解大米蛋白的最佳酶解條件：(1)枯草桿菌蛋白酶：pH7.5、酶濃度7.0％、溫度55℃和時間200min，在此條件下羥自由基清除率為79.59％，多肽濃度為8.54mg/mL；(2)木瓜蛋白酶：pH7.0、酶濃度5.0％、溫度55℃和時間100min，在此條件下羥自由基清除率為52.80％，多肽濃度為1.88mg/mL；(3)胃蛋白酶：pH1.0、酶濃度5％、溫度37℃和時間200min，在此條件下，羥自由基清除率為61.04

3、％，多肽濃度為7.35mg/mL。 二、大米蛋白最佳抗氧化蛋白酶的篩選試驗 采用正交試驗優(yōu)化得出的三種蛋白酶(枯草桿菌蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶)的最優(yōu)抗氧化酶解條件，對每個正交試驗的最佳酶解產(chǎn)物采用同一批次進行比較，分別測定了不同處理下總還原性、羥基自由基、DPPH自由基、小鼠肝線粒體腫脹及肝組織勻漿液脂質(zhì)過氧化作用的影響。結(jié)果表明：(1)不同處理的大米蛋白酶解物在體外表現(xiàn)出明顯的清除自由基，抑制組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，

4、且抗氧化活性顯著高于未酶解的大米蛋白；(2)不同大米蛋白酶解物抗氧化活性大小為：RPHP>RPHS>RPHM。(3)體外條件下大米蛋白的最佳抗氧化酶解條件為：胃蛋白酶，pH1.0、酶濃度5％、溫度37℃和酶解時間200min。 三、大米蛋白酶解物RPHP體外清除自由基及抗脂質(zhì)過氧化作用研究試驗 采用比色法測定了不同劑量的大米蛋白酶解物對清除超氧陰離子、羥自由基、DPPH自由基及抗脂質(zhì)過氧化的作用。結(jié)果表明：(1)大米蛋白

5、酶解物能有效地清除自由基O<,2><'->、OH及DPPH，在50mg pro/mL時，對活性氧自由基清除效果最佳；(2)大米蛋白酶解物可抑制小鼠肝組織的脂質(zhì)過氧化，尤其對Fe<'2+>誘導(dǎo)的肝組織過氧化損傷更具有保護作用且在50mg pro/mL時效果最強；能減少紅細胞溶血的發(fā)生；(3)大米蛋白酶解物在體外試驗中具有抗氧化活性，且在10-50mg pro/mL作用最佳。 四、大米蛋白酶解物對正常小鼠抗氧化功能的影響試驗

6、 選用純昆明系小鼠60只，隨機分為6組，分別為：正常對照組(C)，VitaminE組(VE)，大米蛋白酶解物低劑量組(RPH-1)，大米蛋白酶解物中劑量組(RPH-2)，大米蛋白酶解物高劑量組(RPH-3)，大米蛋白組(RP)。分別每天灌胃0.25mL/只生理鹽水，10mg/mL VE，5.0，10.0和20.0mg/mL，大米蛋白酶解物以及未經(jīng)酶解處理的大米蛋白，連續(xù)灌胃14天，處死小鼠，檢測血漿、肝臟和腎臟超氧化物歧化酶(SOD)、

7、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量。結(jié)果表明：不同劑量的大米蛋白酶解物均能顯著增強小鼠血漿、肝臟和腎臟的抗氧化功能，而未酶解大米蛋白這種活性較弱。其中，大米蛋白酶解中劑量組(RPH-2)能顯著提高小鼠血漿、肝臟和腎臟抗氧化酶活性(P<0.05)，并且能顯著降低血漿、肝臟和腎臟的MDA濃度(P<0.05)，其抗氧化效果最為全面。VE能顯著降低血漿、肝臟和腎臟組織MDA含量，提高肝臟CAT活