蠶絲蛋白肽抗腫瘤與抗氧化作用研究.pdf

1、蠶絲主要由絲素蛋白和絲膠蛋白組成，其中絲素蛋白是蠶絲蛋白中的主要組成部分，約占蛋白總量的70％。通過水解法或酶降解等方法，可將蠶絲蛋白降解成中低分子量的絲蛋白及其多肽。近幾年來，蠶絲蛋白被廣泛應(yīng)用于保健食品、化妝品以及生物醫(yī)用材料和生物醫(yī)藥等非紡織領(lǐng)域，并取得了很大的研究成果?；诖?，為了更好地開發(fā)絲蛋白的醫(yī)用功能，論文將探索蠶絲蛋白肽在抗腫瘤和抗氧化作用上的潛在藥用功能，以期為尋找抗腫瘤和抗氧化的治療藥物提供一種新的天然活性物質(zhì)。

2、r>　　 論文首先通過文獻(xiàn)調(diào)研，確定了絲蛋白肽的水解提取工藝與主要分子量范圍；隨后基于實驗室提取的絲蛋白肽，研究了絲蛋白肽對于人胰腺癌細(xì)胞株SW1990生長和凋亡的影響、對人胰腺癌SW1990多細(xì)胞腫瘤球體生長的影響，并建立了裸鼠腫瘤模型，以此研究絲蛋白肽對人胰腺癌荷瘤裸鼠的抗腫瘤作用。此外，活性氧自由基誘導(dǎo)的氧化損傷是某些疾病與衰老的重要原因，如心腦血管病和腫瘤。當(dāng)對這些疾病施加預(yù)防和治療措施時皆可考慮采用適當(dāng)?shù)那宄杂苫乃幬锘蛲?/p>

3、過自由基機(jī)制進(jìn)行調(diào)節(jié)和抑制?；诖耍撐倪M(jìn)一步根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003版)“保健食品功能學(xué)評價程序與檢驗方法分析”，從抑制過氧化反應(yīng)的機(jī)理出發(fā)，探討了蠶絲蛋白肽對肝損傷小鼠的抗氧化功能。具體研究結(jié)果如下：
　　 1、實驗使用乙醇與氯化鈣水溶液降解脫膠絲素，用透析法進(jìn)行除鹽濃縮，并用質(zhì)譜和氨基酸分析法對絲素進(jìn)行理化性質(zhì)的測定。結(jié)果表明，實驗制備得到了一種低分子量但分布范圍廣泛的絲蛋白肽混合溶液，其主要分子量集中

4、在8kD～10kD。該混合肽中主要氨基酸有甘氨酸、胱氨酸、丙氨酸和絲氨酸，占氨基酸總量的79.0%，其中甘氨酸含量高達(dá)30.45%。
　　 2、通過使用低、中、高3個質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度的絲蛋白肽培養(yǎng)液，在體外對人胰腺癌SW1990細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并從細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖兩方面，探索了絲蛋白肽對人胰腺癌SW1990細(xì)胞生長的抑制作用。結(jié)果表明，絲蛋白肽能有效抑制SW1990細(xì)胞的生長，隨著絲蛋白肽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的提高，抑制作用愈加明顯；絲蛋白肽對

5、SW1990細(xì)胞生長的抑制作用，體現(xiàn)在能有效抑制SW1990細(xì)胞的增殖，并能破壞胰腺癌細(xì)胞的微絲結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。
　　 3、采用搖床培養(yǎng)法，將胰腺癌SW1990細(xì)胞培養(yǎng)成多細(xì)胞腫瘤球(MTS)，并在形態(tài)學(xué)和定量分析MTS的直徑增長兩方面探索了SW1990MTS成型過程和生長變化；實驗使用低、中、高3個質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度的蠶絲蛋白肽培養(yǎng)液作用于MTS，從形態(tài)學(xué)和MTS直徑增長兩方面，探索了蠶絲蛋白肽對SW1990多細(xì)胞腫瘤球

6、成型和生長的抑制作用。結(jié)果表明，絲蛋白肽對胰腺癌SW1990多細(xì)胞腫瘤球的成型和生長具有明顯的抑制作用，并且隨著絲蛋白肽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，其抑制作用愈加明顯。
　　 4、實驗采用在裸鼠背部皮下注射SW1900細(xì)胞的方法，建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型。分別以腹腔注射生理鹽水、吉西他濱為陰性和陽性對照，以蠶絲蛋白肽低、中、高3個劑量組和蠶絲蛋白肽聯(lián)合吉西他濱用藥組，為4個實驗組。從裸鼠體重、移植瘤體積變化、抑瘤率、腫瘤指數(shù)等指標(biāo)，初步

7、探索了蠶絲蛋白肽對胰腺癌模型小鼠皮下移植瘤生長的影響作用。結(jié)果表明，與陰性對照和陽性對照相比，含有絲蛋白肽的實驗組對人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生長具有明顯的抑制作用。
　　 5、實驗每天給4組小鼠分別灌胃注射低、中、高質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度的蠶絲蛋白肽和生理鹽水，連續(xù)30天，15只/組；在第31天，采用注射溴代苯的方法誘導(dǎo)建立過氧化肝組織損傷小鼠模型，最后通過測試模型小鼠肝組織和血中的脂質(zhì)過氧化物含量和過氧化物酶(超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過