胃蛋白酶、胰蛋白酶對大豆凝集素穩(wěn)定性的影響.pdf

1、本試驗(yàn)以純化的大豆凝集素(SBA)為研究對象，體外研究了動(dòng)物體內(nèi)兩大主要蛋白消化酶，胃蛋白酶和胰蛋白酶對其降解作用。試驗(yàn)通過SDS-PAGE凝膠電泳方法分析了SBA 經(jīng)蛋白酶酶解后的降解程度；通過間接競爭ELISA方法測定其在酶解過程中的免疫活性的變化。 試驗(yàn)中所用的提純SBA樣品是采用N-乙?；?D-半乳糖胺-Epoxy-Sepharose 6B親和層析體系進(jìn)行分離提純而得到的。應(yīng)用的抗SBA多克隆抗體是以純化的SBA免疫動(dòng)物

2、而獲得，并采用飽和硫酸銨法對抗SBA多克隆抗體進(jìn)行純化。利用提純SBA和純化后的抗SBA多克隆抗體，建立了SBA間接競爭ELISA檢測方法，檢測SBA在蛋白酶酶解過程中的活性變化。 在蛋白酶酶解SBA試驗(yàn)中，將SBA設(shè)為五個(gè)濃度梯度和九個(gè)時(shí)間梯度進(jìn)行酶解反應(yīng)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件中的Gereral Linear Model模塊進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)期間，要求蛋白酶活性必須保持穩(wěn)定，因此參照中國2005藥典中胃蛋白酶和胰蛋白酶

3、的活性測定方法對其進(jìn)行了實(shí)時(shí)監(jiān)測。 胃蛋白酶酶解SBA試驗(yàn)結(jié)果表明：SBA可緩慢的被胃蛋白酶降解，SBA濃度越高，表現(xiàn)為完全降解時(shí)間越長，隨著SBA的降解，SBA的免疫活性也逐漸減小至消失，活性消失速度隨酶解時(shí)間的延長而逐漸變慢，并且，在本試驗(yàn)的酶濃度下，SBA濃度越高活性減小的速度越快，但活性完全消失的時(shí)間延長。 胰蛋白酶作用SBA試驗(yàn)結(jié)果表明：SBA不能被胰蛋白酶降解，并且酶解過程中SBA的活性也保持完好，說明SBA

4、對胰蛋白酶有很好的穩(wěn)定性。 綜上所述，SBA是一種可以被胃蛋白酶降解的蛋白質(zhì)，但較長的作用時(shí)間和一定胃蛋白酶濃度，一旦胃中的胃蛋白酶未能將其完全降解，SBA進(jìn)入腸道后又不能被胰蛋白酶降解，有活性的SBA將與小腸黏膜上皮細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合，破壞腸粘膜結(jié)構(gòu)，部分被內(nèi)吞入上皮細(xì)胞，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，進(jìn)而對動(dòng)物體產(chǎn)生一系列的抗?fàn)I養(yǎng)作用。因此富含豆類的食品和飼料在加工處理階段對凝集素進(jìn)行滅活及國家質(zhì)檢部門對其進(jìn)行含量的嚴(yán)格檢測是十分必要的