類胰蛋白酶對大鼠肝星狀細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的：分離大鼠肝星狀細胞(HSC)并進行體外培養(yǎng)，研究類胰蛋白酶對HSC的影響，探討類胰蛋白酶在肝纖維化中的作用及機制。 方法：采用percoll密度梯度離心法分離大鼠HSC，經(jīng)細胞形態(tài)學、免疫細胞化學和熒光顯微鏡下鑒定后，加入不同濃度的類胰蛋白酶將HSC分為四組，即：①0ng/ml類胰蛋白酶組；②1ng/ml類胰蛋白酶組；③10ng/ml類胰蛋白酶組；④100ng/ml類胰蛋白酶組，36h后用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測

2、HSC的增殖，用半定量反轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測Ⅰ型膠原、蛋白水解酶激活受體-2(PAR-2)及內(nèi)源性過氧化物酶體增殖因子活化受體-γ(PPAR-γ)mRNA的表達。 結果： 1、新分離的細胞在熒光顯微鏡328 nm波長的紫外光激發(fā)下，可觀察到藍綠色的自發(fā)熒光；免疫細胞化學染色顯示所培養(yǎng)的細胞Desmin蛋白陽性，證實所培養(yǎng)的細胞是HSC； 2、類胰蛋白酶在(1～100)ng/ml范圍內(nèi)，以劑量

3、依賴方式促進HSC增殖(P<0.05)，最高達對照組的1.64倍。 3、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml類胰蛋白酶均可使培養(yǎng)的HSC Ⅰ型膠原、PAR-2 mRNA的表達增強，使PPAR-γmRNA的表達抑制，此作用呈劑量依賴性(P<0.05)，分別達對照組的1.29、1.32、1.47倍。 結論：類胰蛋白酶可以刺激HSC增殖，并促進PAR-2和I型膠原mRNA的高表達及PPAR-γmRNA的低表達，提示類