1人血清類(lèi)胰蛋白酶含量測(cè)定方法的建立;2類(lèi)胰蛋白酶引起ECV304細(xì)胞表達(dá)IL-1β、IL-8和SCF變化的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分人血清類(lèi)胰蛋白酶含量測(cè)定方法的建立.我們將能夠分泌類(lèi)胰蛋白酶的雜交瘤細(xì)胞株種植到balb/c小鼠腹腔,取其腹水,用蛋白A親和層析法提取抗類(lèi)胰蛋白酶抗體,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)類(lèi)胰蛋白酶的水平.并且對(duì)隨機(jī)抽取的正常人血清標(biāo)本,以及過(guò)敏性休克死亡患者血清,使用ELISA法檢測(cè)了類(lèi)胰蛋白酶的水平.我們制備并提純了類(lèi)胰蛋白酶的單克隆抗體,建立的ELISA法能夠檢測(cè)人血清中類(lèi)胰蛋白酶,獲得了上海地區(qū)正常人類(lèi)胰蛋白酶血清濃度,為肥大細(xì)胞相

2、關(guān)疾病的臨床診斷提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù).第二部分類(lèi)胰蛋白酶引起ECV304細(xì)胞表達(dá)IL-1β和IL-8變化的機(jī)制研究.該實(shí)驗(yàn)用RT-PCR,Northern blot方法檢測(cè)類(lèi)胰蛋白酶刺激后內(nèi)皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-8和干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(stem cell factor,SCF)表達(dá)情況,并用Western-blot方法研究類(lèi)胰蛋白酶對(duì)PAR2受體的激活作用.結(jié)果表明,類(lèi)胰蛋白酶能夠激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞膜的PAR2受體,促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)