艾滋病檢測(cè)技術(shù)及診斷

1、艾滋病檢測(cè)技術(shù)及診斷,,檢測(cè)依據(jù)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),樣品的采集和處理,樣品種類(lèi)及用途血液標(biāo)本的采集抗凝劑的選擇樣品的保存樣品的運(yùn)送,樣品種類(lèi)及用途,全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液及干血斑（ DBS ）樣品可用于HIV抗體檢測(cè)。全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測(cè)。抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定。血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型和耐藥檢測(cè)。淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞（PB

2、MC）及全血可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測(cè)和HIV-1分離培養(yǎng)。,血液標(biāo)本的采集,抗凝全血：消毒局部皮膚，用有抗凝劑的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻6~8次，備用。血漿：將采集的抗凝全血1500~3000r/min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取5~10ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至

3、無(wú)抗凝劑的試管中，室溫下自然放置1~2小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用1500~3000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。,抗凝劑選擇,CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)：EDTA、肝素、枸櫞酸鈉病毒分離、核酸檢測(cè)： EDTA、枸櫞酸鈉,樣品的保存,抗體檢測(cè)：血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于2~8℃，一周以上應(yīng)存放于-20 ℃以下。核酸檢測(cè)：4~8h內(nèi)分離血漿，4天內(nèi)檢測(cè)可存放于4 ℃,3個(gè)月內(nèi)

4、存放于-20 以下，3個(gè)月以上-70 ℃以下保存。CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)：室溫保存，時(shí)間不超過(guò)24h。如果用CD45設(shè)門(mén)，樣品保存不超過(guò)72h。,樣品的保存,篩查陽(yáng)性樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。補(bǔ)充試驗(yàn)陽(yáng)性樣品按照國(guó)家生物樣品管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。,樣品的運(yùn)送,標(biāo)本篩查陽(yáng)性（復(fù)檢需用三代試劑），送檢單位必須聯(lián)系受檢者，在仔細(xì)核實(shí)受

5、檢者身份等信息后重新采集1份全血。將篩查陽(yáng)性的血清與重新采集的全血共2份樣品一同送至本中心。要求送檢血清量不得少于0.5ml，送檢單位對(duì)重新采集的全血不得做任何處理。標(biāo)本的標(biāo)識(shí)須用正楷字標(biāo)明受檢者姓名、性別和采集時(shí)間（年/月/日）。篩查陽(yáng)性的血清應(yīng)裝于1.5ml凍存管內(nèi)，如果沒(méi)有也可裝于真空采血管內(nèi)，禁止使用除此之外的其他容器。,樣品的運(yùn)送,包裝要求：應(yīng)采用WHO提出的三級(jí)包裝系統(tǒng) 第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶

6、蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號(hào)或受檢者姓名、種類(lèi)和采集時(shí)間。在試管的周?chē)鷳?yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開(kāi)放置。 第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。將試管裝入專(zhuān)用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。 第三層容器：放在一個(gè)運(yùn)輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標(biāo)簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。,樣品的運(yùn)送,用于抗體

7、檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送，用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品應(yīng)在室溫下（18~25 ℃ ）運(yùn)送。用于病毒載量檢測(cè)的樣品應(yīng)在-20 ℃以下運(yùn)輸。DBS和尿液樣品應(yīng)在室溫下運(yùn)送。,樣品的運(yùn)送,樣品的運(yùn)送,帶螺帽、墊圈的血清凍存管。,樣品的運(yùn)送,禁止使用EP管,樣品的運(yùn)送,禁止使用內(nèi)旋蓋凍存管,樣品的運(yùn)送,在凍存管外套帶蓋的第二層容器,樣品的運(yùn)送,置于帶冰袋的第三層容器中,樣品的運(yùn)送,HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告的填寫(xiě)篩查陽(yáng)

8、性的標(biāo)本應(yīng)填寫(xiě)HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告，加蓋公章后送檢。報(bào)告單不得有空項(xiàng) ，必須按規(guī)范要求認(rèn)真完成篩查、復(fù)檢（第一次）、復(fù)檢（第二次）三次試驗(yàn)。在檢測(cè)結(jié)果空白處填寫(xiě)送檢樣品的S/CO值或發(fā)光值。HIV篩查實(shí)驗(yàn)室篩查不能使用快速檢測(cè)方法。兩次復(fù)檢需使用三代試劑，三代試劑檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性方可送檢。,,HIV抗體檢測(cè),HIV抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室要求HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法結(jié)果報(bào)告質(zhì)量控制,HIV抗體檢測(cè),HIV抗

9、體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室要求應(yīng)符合國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2015）》相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行,HIV抗體檢測(cè),HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)目的：1、HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。 2、以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀 況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢(xún)檢測(cè)、根據(jù)特殊需

10、 要進(jìn)行的體檢等。 3、以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播 HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。 4、以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了了解不同人群HIV感 染率及其變化趨勢(shì)，包括高危人群、重點(diǎn)人群和 一般人群。,HIV抗體檢測(cè),要點(diǎn)：1、根

11、據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。 2、嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室SOP。 3、結(jié)果判定以試劑盒說(shuō)明書(shū)為標(biāo)準(zhǔn)。 4、篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須做補(bǔ)充試驗(yàn)。補(bǔ)充試驗(yàn)包 括抗體確證試驗(yàn)（WB、RIBA/LIA）和核酸 試驗(yàn)（定性和定量）。,HIV抗體檢測(cè),常規(guī)HIV抗體檢測(cè)

12、方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CIA/IFA） 快速檢測(cè)法（RT）：金標(biāo)法、硒標(biāo)法、明膠顆粒凝集 試驗(yàn)（PA）

13、 蛋白免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶/線(xiàn)性免疫試驗(yàn)（RIBA /LIA）,篩查方法,,抗體確證試驗(yàn),,HIV抗體檢測(cè),結(jié)果報(bào)告篩查報(bào)告：篩查試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測(cè)均無(wú)反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測(cè)均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無(wú)反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”（本中心只提供WB試驗(yàn)），報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽(yáng)性報(bào)告。

14、確證報(bào)告：符合HIV-1陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-1抗體陽(yáng)性”，符合HIV-2抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-2抗體陽(yáng)性”；符合陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性”；符合不確定判定標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定”，備注中注明“2~4周后復(fù)檢”。,質(zhì)量控制,酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制快速法抗體檢測(cè)質(zhì)控,質(zhì)量控制,酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制試劑盒內(nèi)部對(duì)照：試劑盒內(nèi)提供的陰陽(yáng)性對(duì)照血清，用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能作為

15、室內(nèi)質(zhì)控品用。室內(nèi)質(zhì)控品（外部對(duì)照）： 1、為試劑盒組分的外部質(zhì)控品，是為監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置，質(zhì)控品定值必須為弱陽(yáng)性。 2、可判斷該批樣品檢測(cè)的有效性，因此，每次實(shí)驗(yàn)必須含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。,質(zhì)量控制,Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控圖參數(shù)：算術(shù)平均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）、變異系數(shù)（CV）及控制限?？刂埔?guī)則：告警（12S）、失控（13S）,質(zhì)量控制,1、告警（12S）：當(dāng)外部對(duì)照的S/

16、CO值超過(guò)±2S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀(guān)察。,,,,警告:12S規(guī)則違背,質(zhì)量控制,2、失控（13S）：當(dāng)外部對(duì)照的S/CO值超過(guò)±3S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次結(jié)果不能被接受。,,失控:13S規(guī)則違背,質(zhì)量控制,質(zhì)控圖的分析及失控處理 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)，必須找出發(fā)生問(wèn)題的原因，找出解決問(wèn)題的方法，并消除原

17、因。,質(zhì)量控制,快速檢測(cè)質(zhì)控試劑內(nèi)對(duì)照 在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過(guò)程質(zhì)控，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測(cè)區(qū)背景是內(nèi)部陰性過(guò)程質(zhì)控。如試驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說(shuō)明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，樣品必須重檢。,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制,室內(nèi)質(zhì)控品對(duì)照1、可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性 樣品和陰性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗(yàn)的外部質(zhì)控品。

18、 更換試劑批號(hào) 更換檢測(cè)人員2、下列情況需做質(zhì)量控制 更換包裝 更換廠(chǎng)家

19、 3、建議：每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)做2次質(zhì)控。,,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略,窗口期：從HIV感染人體到感染者血清中的抗體、抗原或核酸等感染標(biāo)志物能被檢測(cè)出之前的時(shí)期。（在窗口期內(nèi)的血液已有感染性?，F(xiàn)有診斷技術(shù)檢測(cè)HIV抗體、抗原和核酸的窗口期分別為感染后的3周、2周和1周左右。）HIV抗體篩查試驗(yàn)：初步了解機(jī)體血液或體液中有無(wú)HIV 抗體的檢測(cè)方法，也

20、包括同時(shí)檢測(cè)抗體和抗原的方法。HIV補(bǔ)充試驗(yàn)：在獲得篩查試驗(yàn)結(jié)果后，為了準(zhǔn)確判斷，繼續(xù)檢測(cè)機(jī)體血液或體液中有無(wú)HIV抗體或核酸的方法，包括抗體確證試驗(yàn)和核酸試驗(yàn)。,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略,使用抗體檢測(cè)試劑的篩查檢測(cè)流程（三代試劑）,試劑1,有反應(yīng),無(wú)反應(yīng),兩種試劑,均有反應(yīng)一有，一無(wú),均無(wú)反應(yīng),補(bǔ)充試驗(yàn),報(bào)告HIV抗體陰性,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略,使用抗原抗體檢測(cè)試劑的篩查流程（四代試劑）,抗原抗體檢測(cè)試劑,有反應(yīng),抗體檢測(cè),均有反

21、應(yīng)一有，一無(wú),補(bǔ)充試驗(yàn),均無(wú)反應(yīng),HIV-1核酸試驗(yàn)或P24抗原試驗(yàn)或2~4周后隨訪(fǎng),無(wú)反應(yīng),報(bào)告HIV抗體陰性，P24抗原陰性,HIV感染/AIDS的診斷,診斷原則 以實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為依據(jù)，結(jié)合臨床表現(xiàn)和參考流行病學(xué)資料綜合進(jìn)行。HIV抗體和病原學(xué)檢測(cè)是確診HIV感染的依據(jù)；流行病學(xué)史是診斷急性期和嬰幼兒HIV感染的重要參考；CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)和臨床表現(xiàn)是HIV感染分期診斷的主要依據(jù)；AIDS的指征性疾病是

22、AIDS診斷的重要依據(jù)。,HIV感染/AIDS的診斷,HIV感染的診斷成人、青少年及18個(gè)月以上兒童符合下列一項(xiàng)即可診斷：HIV抗體篩查試驗(yàn)有反應(yīng)和HIV抗體確證試驗(yàn)陽(yáng)性；HIV抗體篩查試驗(yàn)有反應(yīng)和核酸定性試驗(yàn)陽(yáng)性；HIV抗體篩查試驗(yàn)有反應(yīng)和核酸定量試驗(yàn)>5000cps/ml；有流行病學(xué)史或艾滋病相關(guān)臨床表現(xiàn)，兩次HIV核酸檢測(cè)均為陽(yáng)性；HIV分離試驗(yàn)陽(yáng)性。,HIV感染/AIDS的診斷,18個(gè)月齡及以下兒童符合下列一項(xiàng)

23、即可診斷：為HIV感染母親所生和兩次HIV核酸檢測(cè)均為陽(yáng)性（第二次檢測(cè)需在出生4周后采樣進(jìn)行）；有醫(yī)源性暴露史，HIV分離試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性或兩次HIV核酸檢測(cè)均為陽(yáng)性；為HIV感染母親所生和HIV分離試驗(yàn)陽(yáng)性。,HIV感染/AIDS的診斷,AIDS的診斷成人及15歲（含15歲）以上青少年符合下列一項(xiàng)即可診斷：HIV感染和CD4+T淋巴計(jì)數(shù)<200/mm3 ；HIV感染和伴有至少一種成人AIDS指征性疾病。,HIV感染/AI