醫(yī)學形態(tài)學實驗課

1、實驗課要求,1.進入實驗室須穿白大衣，實驗室要保持安靜，有秩序，手機要保持關(guān)閉或無聲狀態(tài)，以免影響他人。2.必須嚴肅、認真地進行實驗操作，觀察實驗結(jié)果。3.動物室需保持清潔，定期確認飼料和水瓶，注意觀察動物。4.取及動物時，注意個人安全。,5.鼠籠及墊料需要每周更換１－２次，用過的鼠籠必須及時清洗干凈。6.如有死亡動物，應(yīng)及時報告并按規(guī)定處理。7.愛護公共財物，節(jié)約各種試劑,每次實驗結(jié)束后都要輪流值日，將實驗室打掃干凈，關(guān)好門

2、窗和水電后方可離開實驗室。,形態(tài)學實驗（一）,實驗主要內(nèi)容,小白鼠的捉拿與固定、注射方法動物麻醉及正確使用手術(shù)器械方法肝硬化模型制備方法解剖小白鼠并觀察腹腔臟器及解剖位置（重點觀察膽總管）,小白鼠的生物學特性,１）體型小，體重20-40g，壽命一般為2-3年。２）性情溫順，膽小怕驚，對外來刺激極為敏感。３）屬雜食性，胃容量小，不耐饑餓。對溫、濕度變化敏感。４）性成熟早，繁殖力強。,小白鼠的捉拿與固定方法,先用右手將鼠

3、尾抓住并提起，將其旋轉(zhuǎn)數(shù)周后放在實驗臺面上，在小白鼠向前爬行時用力向后拉尾，此時用左手的拇指和食指捏住小白鼠兩耳和頭頸部皮膚，然后將鼠置于左手心中，拉直后肢并用左手無名指和小指壓緊尾巴和后肢，右手即可作注射、灌胃等實驗操作。,常用給藥途徑與方法,１）注射給藥法：肌內(nèi)注射　　　　　　　　皮下注射　　　　　　　　皮內(nèi)注射　　　　　　　　腹腔注射　　　　　　　　靜脈注射２）口服給藥法：飼料給藥　　　　　　　　胃管給藥,腹腔注射方法

4、,小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左下腹部刺入皮下，使針頭向前推0.5～1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。可先回抽注射器，確認無血管或臟器刺破。切勿用力過猛，以免刺傷內(nèi)臟器官。,動物術(shù)前準備,實驗前動物需：　　　　禁食 12-24小時　　　　禁水 4-6小時　　以免手術(shù)時出現(xiàn)嘔吐及窒息死亡等現(xiàn)象,動物實驗常用麻醉劑,（

5、１）吸入性麻醉劑：乙醚、氯仿等　　特點：a.麻醉量與致死量相差大；b.麻醉深度易于掌握；c.麻醉后恢復(fù)快（２）非吸入性麻醉劑：巴比妥類、氨基甲酸乙酯、水合氯醛、氯胺酮等　　特點：優(yōu)點是使用方法簡便、麻醉過程平穩(wěn)，且一次用藥便可維持較長時間等；缺點是動物的蘇醒較慢，麻醉深度和使用量較難控制。,5%水合氯醛，按0.2m1/20g腹腔注射,麻醉藥給藥途徑,１）注射給藥法：肌內(nèi)注射　　　　　　　　皮下注射　　　　　　　　皮內(nèi)注射　

6、　　　　　　　腹腔注射　　　　　　　　靜脈注射２）口服給藥法：灌胃法３）其他途徑：呼吸道給藥　　　　　　　脊髓內(nèi)給藥　　　　　　　直腸內(nèi)給藥,麻醉效果的觀察,呼吸：深慢而平穩(wěn)反射活動：明顯遲鈍肌張力：全身肌肉松弛皮膚夾捏反應(yīng)：皮膚夾捏反射消失,正確持剪刀法,為拇指和第四指分別插入剪刀柄的兩環(huán)，中指放在第四指環(huán)的剪刀柄上，食指壓在軸節(jié)處起穩(wěn)定和向?qū)ё饔?，有利操作?,正確持鑷法,正確持鑷是用拇指對食指與中指。,縫

7、　　針,縫針是用于各種組織縫合的器械，它由三個基本部分組成，即針尖，針體和針眼。圓針：弧度大者多用于深部組織及軟組織。 三角針：前半部為三棱形，較鋒利，用于縫合皮膚、軟骨、韌帶等堅韌組織，損傷性較大。 鏟頭針：臨床較少用。,,,,,圓針,三角針,鏟頭針,直針,器械打結(jié)法,肝硬化造模的主要方法,化學性肝硬化模型結(jié)扎膽總管肝硬化模型實驗性免疫肝硬化模型血吸蟲蟲卵所致肝硬化模型轉(zhuǎn)基因肝硬化模型復(fù)合法,化學性肝硬化模型,無色、

8、易揮發(fā)、不易燃的液體。具氯仿的微甜氣味。化學性質(zhì)穩(wěn)定。分子量153.84，微溶于水，可與乙醇、乙醚、氯仿及石油醚等混溶。操作注意事項：有毒，加強通風。,四氯化碳（ CCl4 ）：carbon tetrachloride,CCl4對肝臟損傷機理,CCl4通過肝微粒體細胞色素P450氧化酶激活后,產(chǎn)生自由基CCl3-及Cl,CCl3-與肝細胞內(nèi)大分子發(fā)生共價結(jié)合,破壞肝細胞功能,,,肝纖維化、肝硬化,CCl4模型制備過程,給藥時間

9、：腹腔注射２次/周，共4周，最后一次給藥24h之后處死并取材。藥物劑量：20% CCl4 ? 0.1ml/20g特點：成功率高、方法成熟，但動物個體差異較大。,CCl4 : 橄欖油＝１:４即20％的CCl4注射,CCl4注射后肝臟變化,注射CCl4一個月后,正常小白鼠肝臟,,正常組,,CCL4 組,,CCL4 組,結(jié)扎膽總管肝硬化模型,固定,備皮,切開皮膚,切開腹膜,消毒,正常人體膽總管解剖,,,小白鼠膽總管位置,,結(jié)扎膽

10、總管,,,進腹后提出十二指腸，近十二指腸處游離膽總管，兩端絲線結(jié)扎,切斷膽總管、縫合,結(jié)扎膽總管手術(shù)過程,Curr Protoc Toxicol. 2012 May;Chapter 23:Unit 23.1,術(shù)后１周后膽管明顯擴張,膽囊,膽囊管,肝總管,術(shù)后１周后可見膽囊、膽囊管及肝總管明顯擴張；皮膚、肝臟明顯變黃,,正常組,,BDL組,,BDL組,,,,每個組 4只,,正常組 1只,加藥組 3只,,,考核方式: 1.平時成績（

11、平時實驗操作能力，實驗態(tài)度，出勤率 ） 30% 2.實驗報告書 70%,思　考　題,肝纖維化和肝硬化的病理特點？人體肝門部解剖特點？手術(shù)時注意事項？人體膽總管與十二指腸的關(guān)系？肝外膽汁淤積引起肝損傷的機