實驗四病源性球菌與桿菌

1、病源性球菌與桿菌,一、實驗?zāi)康?.掌握鏈球菌、腦膜炎雙球菌、結(jié)核桿菌、白喉桿菌的形態(tài)特征和染色特性。2.熟悉腸道桿菌培養(yǎng)特征、生化反應(yīng)及動力學等特性。3.了解三種葡萄球菌產(chǎn)生的色素。4.了解乙型溶血型鏈球菌在血瓊脂平板上的菌落特點及溶血性。5熟悉抗“o”試驗的方法及臨床意義。,二、實驗內(nèi)容1.自己動手觀察鏈球菌、腦膜炎雙球菌的形態(tài);示教觀察結(jié)核桿菌、白喉桿菌的形態(tài)。2.觀察腸道桿菌的雙糖發(fā)酵，鑒別培養(yǎng)基（ss培養(yǎng)基）的生化

2、反應(yīng)。3.化膿性球菌的鑒定⑴三種葡萄球菌的色素觀察⑵乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察⑶抗“O”實驗。,三、作業(yè)：1.鏡下繪出4種形態(tài)圖2.根據(jù)生化特性及產(chǎn)生色素，葡萄球菌分為哪幾種類型？,,,,,,,,,,,,,,,,Salmonella -Shigella Mediun,主要成分 基礎(chǔ)營養(yǎng) 乳糖 指示劑 抑制劑,分解乳糖,不分解乳糖,產(chǎn)酸,PH,指示劑變紅色,,紅色

3、大菌落,,,大腸桿菌等,無明顯變化,無色半透明小菌落,志賀菌等,,大腸桿菌,痢疾桿菌,,,結(jié)核分枝桿菌,抗酸染色,乙型溶血性鏈球菌,溶血環(huán),白喉棒狀桿菌,異染顆粒,實驗四 病原性球菌,1. 五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性2. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物3. 血漿凝固酶試驗--玻片法 試管法4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗5、膿汁中葡萄球菌的分離鑒定,（操作，1人/組）,,（操

4、作，1人/組）,肺炎球菌特殊染色可見的莢膜,G+球菌：,金葡菌,鏈球菌,肺炎雙球菌,1. 五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性,G-球菌：,淋球菌,腦膜炎球菌,2. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物,,普通瓊脂平板 血平板 菌落形狀 色素 溶血性 金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +檸葡 同上 檸檬色

5、 - 白葡 同上 白色 -,,,,,,表1,血平板甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)乙型鏈球菌 針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán),巧克力血平板腦膜炎雙球菌 菌落透明似露滴狀,表2,,,,表3,,,,3. 血漿凝固酶試驗--玻片法,（操作，1人/組）,原理：,方法：,,,,兔血漿 兔血漿 生理鹽水,,,,1,2,3,金葡 白

6、葡 金葡,+ + +,,,,凝集（+）,不凝集（-）,不凝集（-）,4、血漿凝固酶試驗（試管法）,,,金葡菌 白葡菌 + + 兔血漿 兔血漿 37℃30′水浴觀察,凝集為陽性,不凝集為陰性,,凝固酶實驗（試管法）,五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）

7、 快速膠乳法 高滴度病人血清被適量溶血素中和了正常水平 的抗體后，還有多余ASO，這些多余抗體即與SLO膠乳 試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。,,,（操作，1人/組）,原理：,,,,,,,陽性對照 陰性對照 待測血清 各加溶血素“O” 1滴輕搖1min 再加SLO膠乳1滴輕搖3

8、min,,,,觀察結(jié)果,方法：,稀釋度 ASO （IU/ml）1：15 4001：30 8001：60 1600,ASO≤250 IU/ml 陰性,結(jié)果判定：,注意事項：,液體量要一樣，菌量一樣。血漿多挑幾環(huán)（一滴的量），菌少挑點， 不

9、能干。3. 涂菌時間一樣，出現(xiàn)凝集為陽性，再涂 凝集物可被涂散，變陰性。,,腸道桿菌,一、腸道桿菌的形態(tài)及染色性 二、腸道桿菌的培養(yǎng)特性 三、腸道桿菌的生化反應(yīng)特點 四、Widal實驗,腸道桿菌的形態(tài)及染色片,腸道菌的菌落形態(tài),EMB 大腸：菌落呈紫黑色，有金屬光澤。 傷寒 痢疾：菌落無色半透明。 SS D大腸：大而不透明的紅色菌落。 傷寒 痢疾：中等大小淡黃色菌落。,,大腸桿菌（EMB培養(yǎng)基）,,,腸道致

10、病菌（SS培養(yǎng)基）,糞便標本中致病性腸道桿菌的分離與鑒定,生化反應(yīng)1——單糖發(fā)酵,葡萄糖及乳糖發(fā)酵 一）實驗?zāi)康呐c原理 了解糖發(fā)酵試驗方法 二）實驗材料 1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌培養(yǎng)物 2、培養(yǎng)基：乳糖及葡萄糖發(fā)酵管 三）實驗方法 １、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。 2、37孵育18~24小時，取出觀察結(jié)果。,動力檢測,常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別

11、表,鐵質(zhì)雙糖瓊脂基上各種腸道桿菌的生長情況,腸道桿菌在KI培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性,Indol實驗,生化反應(yīng)2——Indol實驗,2. 腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象,大腸桿菌 傷寒桿菌SS平板 紅色大菌落 無色透明小菌落,,,,基礎(chǔ)培養(yǎng)基，乳糖(底物)，膽鹽、煌綠(抑制非致病菌)，中性紅（指示劑）。,SS培養(yǎng)基：,3. 五類腸道桿菌的生化反應(yīng)及動力,大腸桿菌 ⊕

12、 ⊕ - - + + + /⊕變形桿菌 ⊕ - + + +/- + - /⊕乙型副傷寒桿菌 ⊕ - ++

13、 - - + -/⊕傷寒桿菌 + - +/- - - + -/+痢疾桿菌 + - - - +/- -

14、 -/+,葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵,,,,4. 腸道桿菌未知菌1和未知菌2的鑒定,（操作，2人/組）,未知菌,雙糖鐵培養(yǎng)基(乳糖/固體/上，葡萄糖/半固體/下),生化反應(yīng),葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵尿素酶試驗H2S試驗靛基質(zhì)試驗（蛋白胨水液體培養(yǎng)基）動力試驗（半固體培養(yǎng)基）,（微量發(fā)酵管）,,,方法：,血清學鑒定（玻片凝集反應(yīng)）,,,,,（37℃

15、5;18~24h）,,,,傷寒診斷血清 傷寒診斷血清 + + 未知菌1 未知菌2,血清學鑒定（玻片凝集反應(yīng)）,,,？ ？,結(jié)果：,雙糖鐵 葡 乳 尿 H2S 靛 動力 血清學 未知菌1未知菌2,,,,結(jié)論：,未知