化妝品用化學(xué)原料體外3t3中性紅攝取光毒性試驗(yàn)方法

1、—1——附件化妝品用化學(xué)原料體外3T3中性紅攝取光毒性試驗(yàn)方法一、范圍本方法規(guī)定了化妝品用化學(xué)原料體外3T3中性紅攝取光毒性試驗(yàn)的范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)材料與試劑、試驗(yàn)步驟、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。本方法推薦適用于評(píng)價(jià)化妝品用化學(xué)原料的潛在光毒性。二、規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本方法的引用而成為本方法的條款。注明日期的引用文件，其后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本方法，但是，鼓勵(lì)使用單位對(duì)修訂

2、部分的引用進(jìn)行研究，并提出意見。研究是否可使用這些文件的最新版本。未注明日期的引用文件，其最新版本適用于本方法。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）guidelinesfthetestingofchemicals:3T3NRUphototoxicitytest.NO.432三、術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本方法。（一）光毒性（Phototoxicity）皮膚一次接觸化學(xué)物質(zhì)后，繼而暴露于長(zhǎng)波紫外線照射下所引發(fā)的一種皮膚毒性反應(yīng)?！?——反應(yīng)

3、。中性紅是一種弱的陽離子染料，極易以非離子擴(kuò)散的方式穿透細(xì)胞膜并在細(xì)胞溶酶體內(nèi)聚集。某些化學(xué)物質(zhì)和外界條件作用可引起細(xì)胞表面或溶酶體膜敏感性的改變導(dǎo)致溶酶體脆性增高等不可逆的細(xì)胞毒性變化，從而導(dǎo)致細(xì)胞吸收中性紅的能力下降。本試驗(yàn)方法通過測(cè)定3T3成纖維細(xì)胞經(jīng)化學(xué)物質(zhì)和紫外線照射聯(lián)合作用后細(xì)胞吸收中性紅的能力或細(xì)胞毒性的變化來判斷該化學(xué)物質(zhì)是否具有光毒性。五、試驗(yàn)材料與試劑（一）光源類型選擇合適的光源必須符合的標(biāo)準(zhǔn)包括：光源發(fā)射的光波長(zhǎng)能

4、被受試物吸收（吸收光譜），光的劑量（在一個(gè)合理的暴露時(shí)間內(nèi)能達(dá)到的劑量）能滿足已知光毒性化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)。此外所有的波長(zhǎng)和劑量不能有損于試驗(yàn)系統(tǒng)，如（紅外區(qū)域）熱量散發(fā)或類似UVB波長(zhǎng)的高細(xì)胞毒性的干擾，因此光源要求能夠穩(wěn)定地釋放UVA和可見光波長(zhǎng)。由于所有的太陽光模擬器都發(fā)射出相當(dāng)數(shù)量的UVB，應(yīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)倪^濾使UVB＜0.1Jcm2。透過96孔組織培養(yǎng)板蓋的光強(qiáng)度建議為1.7mWcm2光強(qiáng)度（即5Jcm2）劑量。（二）細(xì)胞株選用永生化