脂代謝檢驗級2015

1、脂代謝紊亂檢驗,第十章,異常？,正常？,血脂,機(jī)體脂類代謝,,動脈粥樣硬化冠心病急性事件,,,血脂：是血漿中脂類的總稱,第一節(jié) 概述,血漿脂蛋白（Lp）： 血脂 + 載脂蛋白,脂蛋白結(jié)構(gòu)示意圖,此種結(jié)構(gòu)形式可使脂蛋白顆粒穩(wěn)定、均勻地分散于血漿。并可與酶及細(xì)胞表面的受體接觸，在脂蛋白代謝中起關(guān)鍵作用。,離心法,電泳法,血漿脂蛋白的分類,1、超速離心法,乳糜微粒（CM）,極低密度脂蛋白（VLDL）,中間密度脂蛋白（IDL）,

2、低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）,脂蛋白（a）（Lp(a)）,依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質(zhì)表面電荷多少的不同而分離。通常可分成：,2、電泳,分別相當(dāng)于CM、LDL、VLDL 、HDL，IDL也有β移動度，在IDL異常時可顯現(xiàn)寬β帶 。,CM、β-LP 、pre-β-LP、α-LP 四條區(qū)帶,人血漿脂蛋白主要特征,,Lp(a)的核心部分由TG、PL、chol、CE等脂質(zhì)和ApoB100組成，結(jié)構(gòu)類似LDL。且含有特異性抗原成分

3、—— Apo(a)。Lp(a)中1分子ApoB通過二硫鍵與1分子Apo(a)共價結(jié)合。Apo(a)與PLG（纖溶酶原）具有高度同源性。肝臟是Apo (a)合成的主要場所。Lp(a) 是動脈粥樣硬化的獨立危險因素，且與血栓形成密切相關(guān)。,脂蛋白(a)[Lp(a)],,10,載脂蛋白,定義：脂蛋白的蛋白部分稱為載脂蛋白(Apo)。種類： 按1972年Alaupovic建議的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、B、C、D

4、、E、F、G、H、J等。由于氨基酸組成的差異，每一型又可分若干亞型。,ApoA ApoB ApoC ApoE,分 類,,載體 、運輸聯(lián)系 、配體激活,功能,,合成部位,肝小腸,,,,受 體,LDL受體殘粒受體清道夫受體,,,脂蛋白受體,糖蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平,,LDL受體殘粒受體清道夫受體,運送及清除,,LDL受體：識別ApoB100（ApoE ）對維持細(xì)胞和全身膽固醇平衡起重要作用,識別ApoE，清除血

5、液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒,巨噬細(xì)胞表面,介導(dǎo)修飾LDL從血液循環(huán)中清除,膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白（CETP）磷脂轉(zhuǎn)運蛋白（PTP）微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白（MTP）,脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白------LTP,血漿脂蛋白代謝,脂蛋白代謝以肝臟為中心,HDL代謝：膽固醇逆轉(zhuǎn)運(RCT),VLDL-IDL-LDL代謝：由肝合成VLDL, 再轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL,并被肝或其它器官代謝的過程,CM代謝：飲食攝入的Ch和TG在小腸中合成CM及其代謝

6、過程,LP代謝,外源性代謝,內(nèi)源性代謝,,,,血 漿 脂 蛋 白 代 謝 總 圖,Lp(a) 是一類獨立的由肝臟合成的脂蛋白,高脂血癥: TC 或/和 TG,,,高脂蛋白血癥 : CM、VLDL、LDL、HDL,,血 漿 脂 蛋 白 代 謝 紊亂,,脂質(zhì)異常血癥,,高 脂 血 癥 的 分 類,臨 床 表 型,是 否 繼 發(fā) 其 他,基 因 分 型 法,Fredrickson,,血清(血漿)外觀：在4℃冰箱放置16-24h

7、 后的血清外觀(2) 血脂濃度：血清TG、TC含量(3) 各種血漿脂蛋白升高程度,依據(jù),1967年Fredrickson等首先提出高脂蛋白血癥的分類法（5型）。1970年WHO進(jìn)行部分修改，將其中Ⅱ型分為Ⅱa和Ⅱb兩型。,Ⅰ型高脂蛋白血癥Ⅱa型高脂蛋白血癥Ⅱb型高脂蛋白血癥Ⅲ型高脂蛋白血癥Ⅳ型高脂蛋白血癥Ⅴ型高脂蛋白血癥,① 4℃靜置過夜， 表面奶油狀，下層澄清 ② 血清TG↑↑， 血清TC正常或輕度↑

8、 ③ 血清脂蛋白電泳，CM↑↑,Ⅰ型高脂蛋白血癥,家族性高乳糜微粒血癥脂蛋白酶缺乏癥,,生 化 特 征,基因突變 LPL CM,Ⅱa高脂蛋白血癥,高β-脂蛋白血癥高膽固醇血癥,生 化 特 征,①4℃冷置試驗 血漿外觀澄清②血清TC↑↑ 尤其LDL↑↑ TG正常③血清脂蛋白電泳 β-LP↑↑,,LDLR缺乏或異常,此型臨床常見,Ⅱb型高脂蛋白血癥,生 化 特 征,①4℃冷置試驗 血清外觀澄清或微混②血清

9、TC↑，TG↑ VLDL和LDL均↑ ③血清脂蛋白電泳 β-LP↑，preβ-LP↑,多基因突變 LPL LCAT,此型臨床很常見,Ⅲ型高脂蛋白血癥,寬β-脂蛋白血癥,,①4℃冷置試驗，血清外觀混濁可見一模糊奶油樣薄膜。②血清TC ，TG 。 ③血清脂蛋白電泳，β-LP↑，preβ-LP↑融合形成寬β區(qū)帶。,生 化 特 征,,,,,ApoE異常 VLDL轉(zhuǎn)化和清除缺陷,Ⅳ型高脂蛋白血癥,①4℃冷置試驗

10、，血清外觀可以是澄清也可呈混濁。②血清TG ↑↑ ，TC正?；蛏浴?， VLDL↑ ③血清脂蛋白電泳，preβ-LP↑,,內(nèi)源性高三脂酰甘油血癥,生 化 特 征,,臨床表現(xiàn)，多見于中青年，較常見,Ⅴ型高脂蛋白血癥,混合性高三酰甘油血癥,①4℃冷置試驗，血清上層為奶油狀，下層混濁。②血漿中TG ，TC↑ ，VLDL 。③血清脂蛋白電泳，CM ，preβ-LP↑。,內(nèi)源性和外源性TG清除功能缺陷,生 化 特 征,,,

11、,動脈粥樣硬化(AS)是指動脈內(nèi)膜因脂質(zhì)、血液成分的沉積、平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，并伴有不同程度壞死及鈣化等一類慢性進(jìn)行性的病理改變。,,,最終導(dǎo)致血管壁呈增厚、狹窄，使某些臟器(尤其是心、腦)供血不足而損傷，甚至危及生命。,,,高血壓,年齡,冠心病家族史,血脂紊亂,吸煙,糖尿病,不可改變的,可改變的,NCEP Circulation 1994;89:1329–1445. Eur Heart J 1994;15:1300–1331.

12、Wood D et al. Eur Heart J 1998;19:1434–1503.,冠心病,,,冠心病的主要危險因素,AS主要的危險因素,,①高脂血癥（高脂蛋白血癥）②高血壓③吸煙,,④性別⑤遺傳因素 ⑥內(nèi)分泌因素,引起動脈粥樣硬化的脂蛋白,CM顆粒大，一般不致AS, 但易誘發(fā)胰腺炎,LDL相對較小, 是首要的致AS性脂蛋白,VLDL升高已被確認(rèn)為CHD的危險因子。,IDL具有致A

13、S作用,LP（a)As的獨立危險因子。,動脈粥樣硬化,,HDL降低,第二節(jié) 血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定,常規(guī)測定項目：,,TC、TG、HDL-C、LDL-C,分析前的準(zhǔn)備：,受試者的準(zhǔn)備標(biāo)本采集合格的試劑校準(zhǔn)物的選用檢測方法選擇,,是否空腹采血體位血液濃縮抗凝劑標(biāo)本處理存儲條件生物學(xué)波動,總膽固醇（total cholesterol，TC）甘油三酯（triglyceride，TG）高密度脂蛋白-膽固醇（hi

14、gh dense lipoprotein cholesterol，HDL-C）低密度脂蛋白-膽固醇（low dense lipoprotein cholesterol，LDL-C）載脂蛋白AⅠ（apolipoprotein AⅠ，ApoAⅠ）載脂蛋白B（apolipoprotein B，ApoB）Apo（a）,臨床血脂分析項目,一、血清（漿）靜置試驗,二、血清（漿）總膽固醇測定,★ COD-PAP法,,,膽固醇酯 + H2O

15、 膽固醇 ＋ 游離脂肪酸 膽固醇 ＋ O2 △4-膽甾烯酮＋H2O22H2O2＋4-AAP＋酚 醌亞胺（紅色化合物）＋4H2O,,方法學(xué)評價,簡便,快速,無腐蝕性,高，好，寬,CE水解不全，CHE活性受影響，易受干擾,常規(guī)方法,三、血清（漿）三酰甘油測定,,檢測方法,同位素稀釋-質(zhì)譜法,化學(xué)法,★酶法（GPO-PAP）,＊磷酸甘油氧化酶法 乳

16、酸脫氫酶法 甘油氧化酶法,化 學(xué) 法,1.抽提 2.皂化 3.氧化 4.顯色,變色酸顯色法,乙酰丙酮顯色法,,1、磷酸甘油氧化酶法GPO-PAP,,三酰甘油 + H2O 甘油 ＋ 3-脂肪酸 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2+2H2O 磷酸二羥丙酮

17、+2H2O2H2O2＋4-AAP＋4-氯酚 苯醌亞胺＋2H2O+HCL,,第一步反應(yīng),第二步反應(yīng),本法酶試劑比較穩(wěn)定，靈敏度高，線性范圍較寬兩步法為中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會推薦方法,三酰甘油 + H2O 甘油 ＋ 3-脂肪酸 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2+2H2O 磷酸二羥丙酮+2H2O2H2O2＋4-AAP＋

18、4-氯酚 苯醌亞胺＋2H2O+HCL,2．乳酸脫氫酶法,【原理】,三酰甘油 + H2O 甘油 ＋ 3-脂肪酸 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油＋ADPADP＋磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+NADH NAD+＋乳酸,3．甘油氧化酶法,第一步： FG + O2

19、 甘油醛+ H2O2 H2O2 + EMAE 無色物質(zhì) 消除游離甘油的影響，3-5min后進(jìn)行第二步反應(yīng)： TG + 3H2O 甘油 + 3RCOOH 甘油 + O2 甘油醛+ H2O2H2O2 +4-AAP+ EMAE 有色物質(zhì)EMAE作用與酚相似，是還原劑，但靈敏度比酚高。,,,甘油氧化酶,P

20、OD,POD,,,,LPL,甘油氧化酶,血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高， 體重超過標(biāo)準(zhǔn)者往往偏高。 合適范圍：≤1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：＞1.70mmol/L (150mg/dl)。,升高：（1）原發(fā)性高TG血癥，包括家族性高TG血癥與家族性高脂（蛋白）血癥等。（2）繼發(fā)性高TG見于糖尿病糖原貯積癥、甲狀腺功能減退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥等降低:甲亢、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝

21、功能嚴(yán)重?fù)p傷。,【參考區(qū)間】,【臨床意義】,四、血清（漿）脂蛋白測定,高密度脂蛋白膽固醇測定,參考方法:,超速離心分離HDL，然后用化學(xué)法（ALKB法）或酶法測定其膽固醇含量，此法需特殊設(shè)備，而且不易常握。,沉淀劑：肝素-錳、硫酸葡聚糖-鎂、聚乙二醇、磷鎢酸-鎂,常規(guī)方法:,HDL直接測定法,抗體包裹法、酶修飾法、選擇性抑制法,HDL-C合適范圍：≥1.04mmol/L (40mg/dl), ＜0.91mmol/L (35mg/

22、dl)為減低。,流行病學(xué)與臨床研究證明，HDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，HDL-C低于0.9 mmol/L 是冠心病危險因素。HDL-C大于1.55mmol/L被認(rèn)為是冠心病的“負(fù)”危險因素。 HDL-C下降還多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血癥往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸煙可使HDL-C下降，適量飲酒、長期體力勞動和運動會使HDL-C升高。,【參考值】,【臨床意義】,低密度脂蛋白測定,

23、1．Friedewald公式法 LDL-C＝TC－HDL-C－TG/2.2（以mmol/L為單位時）（血清中存在CM、TG>4.56時不適用）,2．聚乙烯硫酸鹽沉淀法 本法并非對LDL-C作直接測定，而是用聚乙烯硫酸（PVS）選擇性沉淀血清中LDL，再以血清TC減去上清液（含HDL與VLDL）膽固醇即得LDL-C值。,3．直接測定法:,目前各類方法測定的LDL-C值都包括IDL和LP(a)的chol在內(nèi),≤3.12mm

24、ol/L, 升高：≥3.64mmol/L,【參考值】,【臨床意義】,LDL-C增高是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素。由于TC水平同時也受HDL-C水平的影響，所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險因素指標(biāo)。,脂蛋白(α)測定,Lp(α)測定有兩類方法,一是以免疫化學(xué)原理測定其所含Apo(α)，結(jié)果以Lp(α)質(zhì)量表示，也有以Lp(α)顆粒數(shù)mmol/L表示的。另一類方法測定其所含的膽固醇，結(jié)果以 Lp(α)-C表示。目前

25、大都用免疫學(xué)方法測定。,正常人群的Lp(a)水平呈明顯的正偏態(tài)分布，大多在200mg/L以下，平均數(shù)在120～180 mg/L，中位數(shù)約100mg/L。Lp(a)水平高于醫(yī)學(xué)決定水平（300mg/L），冠心病危險性明顯增高。,【參考值】,【臨床意義】,血清Lp(a)水平是動脈粥樣硬化性疾病的獨立危險因素,與動脈粥樣硬化成正相關(guān)。,（1）Apo測定的臨床意義作為Ａs和心腦血管病的有價值的危險予估指標(biāo)。目前主要檢測項目是

26、 ApoAⅠ、ApoB100、Apo（a）（2）載脂蛋白異常癥的發(fā)現(xiàn)和診斷 如：ApoAⅠ缺乏癥（Ｔangier癥） ApoCⅡ缺乏癥,血清載脂蛋白測定,免疫化學(xué)法：,單向免疫擴(kuò)散（RID）電免疫分析（如火箭電泳法）放射免疫分析（RIA）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）等,早期,目前：目前比較適合于臨床實驗室的是免疫濁度法，包括免疫散射比濁法（INA）和免疫透射比濁法（ITA）。,【參考值】,Apo

27、AI：1.00～1.50g/L；Apo B：0.80～1.00g/L。,【臨床意義】,ApoAI是HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白， ApoB是LDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白，因此，ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量。在某些病理情況下，ApoAI與HDL和ApoB與LDL并非成正相關(guān)，因此，同時測定載脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL對病理發(fā)生狀態(tài)的分析很有幫助。冠心病、腎病綜合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高。臨床上常將ApoAI和