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1、?19942010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.薄層色譜法在藥物分析方面的應(yīng)用靳朝東劉舒揚(yáng)(天津藥物研究院分析測(cè)試中心天津300193)摘要:薄層色譜法(TLC)以其所特有的性能優(yōu)點(diǎn)在藥物的分析鑒別、分離精制等方面一直有著相當(dāng)廣泛的應(yīng)用。近年來(lái)隨著對(duì)TLC研究的不斷深入新型固定相的采用等TLC在規(guī)范化、儀器化、檢出技術(shù)等方面的新技術(shù)應(yīng)用時(shí)有
2、報(bào)道。筆者對(duì)最近國(guó)外應(yīng)用TLC在藥物質(zhì)量控制、成分的分析鑒別、藥物穩(wěn)定性研究的進(jìn)展進(jìn)行綜述。關(guān)鍵詞:薄層色譜高效薄層色譜藥物分析植物藥化學(xué)合成藥中圖分類號(hào):TQ460172文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):167425515(2009)0620331205薄層色譜(ThinLayerChromatographyTLC)在藥物尤其在植物藥成分的定性和定量分析方面早已有了非常廣泛的應(yīng)用。隨著這一技術(shù)尤其是高效TLC(HighPerfmThinLaye
3、rChroma2tographyHPTLC)技術(shù)的發(fā)展TLC在規(guī)范化、儀器化方面均取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步在大批量樣品及某些特殊樣品的快速分析中顯示了分析容量大、可采用特征專屬的顯色劑以及極低的溶劑消耗等優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)TLC廣泛應(yīng)用于有機(jī)化合物的分析鑒定、植物藥有效部位的分離精制、有機(jī)合成、結(jié)構(gòu)分析、生物測(cè)定等尤其在研究開發(fā)植物藥有效部位和中成藥質(zhì)量控制中是用于定性、定量分析的最簡(jiǎn)便的科學(xué)方法。1植物藥和天然藥物成分鑒別1.1TLC應(yīng)用方法的規(guī)范
4、和評(píng)估在藥用植物分析鑒別和化學(xué)藥品及其制劑成分分析的研究中TLC和HPTLC方法因其特有的優(yōu)點(diǎn)而占有非常重要的地位應(yīng)用該方法鑒別或指紋譜鑒別藥用植物最近仍有許多報(bào)道。Reich等[1]報(bào)道了幾種常見(jiàn)植物藥的HPTLC指紋譜鑒別方法并對(duì)方法做了相應(yīng)的驗(yàn)證和標(biāo)準(zhǔn)化特別對(duì)樣品提取方法、點(diǎn)樣方法、實(shí)驗(yàn)室溫濕度、顯色方法等做了規(guī)范操作過(guò)程大致為:樣品超聲波震蕩提取→濾過(guò)或離心→濾液或上清液點(diǎn)樣2mm8mm條狀→品種特有溫濕度下展開→浸漬方法衍生顯
5、色→采用標(biāo)準(zhǔn)植物和相應(yīng)的標(biāo)記化合物做對(duì)照鑒別方法可鑒別植物藥的真?zhèn)位驌诫s物。1.2植物藥成分研究TLC法在植物藥成分鑒別方面的應(yīng)用已極為廣泛。印度M.S.大學(xué)的Murthy等[2]在2008年首次報(bào)道了關(guān)于莕菜屬植物Nymphoidesmacrosper2mumVasudevan中樺木酸(betulinicacid)的TLC檢測(cè)方法該方法將2.5gN.macrospermum根粗粉用25mL甲醇溶液水浴加熱回流提取30min同法提取4次
6、后合并提取液濾過(guò)、離心后制成一定濃度的甲醇溶液。將該樣品溶液與樺木酸甲醇對(duì)照液同時(shí)在TLC硅膠G60F254預(yù)制板上點(diǎn)樣用環(huán)己烷2醋酸乙酯2冰醋酸(7∶3∶0.03)溶劑系統(tǒng)展開30min后取出吹干并用茴香醛2硫酸溶劑噴淋110℃加熱3min顯色斑點(diǎn)在紫外2可見(jiàn)光下檢視結(jié)果顯示分離效果良好Rf=0.60。該方法在樺木酸的檢測(cè)方面以快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)優(yōu)于其他方法。新德里生物技術(shù)研究所的Ram等[3]在對(duì)多種藥用植物的研究中建立了一種甲
7、羥戊酸(mevalonicacid)的快速TLC檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)對(duì)象包括黃花蒿ArtemisiaannuaL.、補(bǔ)骨脂PsaliacylifoliaL.、長(zhǎng)春花VincaroseaL.、催眠睡茄Withaniasomnifera(L.)Dunal、黃葉假杜鵑Barleriaprio2nitisL.等藥用植物的葉方法采用硅膠G60F254預(yù)制板展開系統(tǒng)選用苯2丙酮(3∶2)先將薄層板在甲醇中浸泡1h去除雜質(zhì)干燥后備用。粉碎的植物葉片用色譜純醋
8、酸乙酯提取與對(duì)照品醋酸乙酯溶液同時(shí)點(diǎn)樣展開室溫30℃相對(duì)濕度55%衍生試劑為0.05mLmL茴香醛醋酸溶液2乙醇297%硫酸(10∶85∶5)110℃下加熱5min顯色。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高。布達(dá)佩斯的Lig等[4]研究了多種茶葉中活性物質(zhì)黃酮類的TLC檢測(cè)方法提出將經(jīng)典液相萃取提取方法(LE)和超臨界液體萃取法(SFE)作比較并用TLC法檢測(cè)在不同提取方法下活性成分的量。133現(xiàn)代藥物與臨床ModernPharmacyClini
9、c2009年第24卷第6期?19942010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.續(xù)表1樣品和被測(cè)成分對(duì)照品層析板和提取溶劑展開系統(tǒng)衍生方法及檢出辣椒素[5]capsaicin辣椒素HPTLCSi60F254預(yù)制板甲醇甲苯2醋酸乙酯(6∶4)可見(jiàn)光和UV280nm檢視指甲花[6]LawsoniainermisL.(指紋譜)散沫花素(lawsone)
10、HPTLCSi60預(yù)制板甲醇醋酸乙酯2甲酸2水(82∶9∶9)二苯硼酸氨基乙酯醋酸乙酯溶液和Mac2rogol試劑(1gPEG40020mL二氯甲烷)UV337nm檢視大花紫薇[7]Lagerstroemiaspeciosa(L.)Pers.科羅索酸(cosolicacid)TLCSi60F254預(yù)制板80%甲醇溶液氯仿2甲醇(8.5∶1.5)5%甲醇2硫酸溶液110℃加熱5minUV366nm檢視園圃塔花[8]Satureiahten
11、sisL.黃酮類迷迭香酸木樨草素TLCSi60預(yù)制板乙醇2水(不同比例下混合)正己烷2醋酸乙酯2甲酸(30∶20∶1.5)NTSPEG400溶液可見(jiàn)光和UV328nm、349nm檢視巴豆屬植物[9]Crotonstellato2pilosusOhba普勞諾托(plaunotol)TLCSi60F254預(yù)制板甲醇氯仿2正丙醇(96∶4)可見(jiàn)光和UV220nm檢視大豆甾醇[10]soysterols甾體激素類及其生物轉(zhuǎn)化中間體TLCSi60
12、F254預(yù)制板氯仿苯2醋酸乙酯(5∶1)2%硫酸鈰銨溶液可見(jiàn)光檢視水黃皮[11]Pengamiapinnata(L.)Merr.種子水黃皮素TLCSi60F254預(yù)制板甲醇甲苯2醋酸乙酯(7∶3)可見(jiàn)光和UV260nm檢視姜黃[12]CurcumalongaL.姜黃素去甲氧基甘石黃素、二去甲氧基姜黃素TLCSi60F254預(yù)制板甲醇正己烷2氯仿2甲醇(10∶10∶1)UV254nm檢視刺毛黎豆[13]Mucunapruriens(L.)
13、DC.β2谷甾醇TLCSi60F254預(yù)制板甲醇甲苯2氯仿2甲醇(4∶4∶1)茴香醛硫酸溶液可見(jiàn)光和UV527nm檢視2化學(xué)合成藥及生物活性成分研究2.1化學(xué)合成藥研究近年來(lái)TLC法以其快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)在化學(xué)藥物成分的研究中仍有很多應(yīng)用。波蘭Jagiel2lonian大學(xué)的Starek等[14]利用TLC法對(duì)抗炎藥吡羅昔康的多種劑型及其降解產(chǎn)物進(jìn)行了研究測(cè)定其中膠囊和注射劑用丙酮溶解片劑在0.5molL的鹽酸溶液中水浴加熱至60℃
14、再制成丙酮溶液。該方法的展開系統(tǒng)為醋酸乙酯2甲苯2氨基丁烷(2∶2∶1)紫外吸收法測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)360nm。研究結(jié)果表明吡羅昔康的穩(wěn)定性良好不易降解且在堿性環(huán)境下比酸性環(huán)境更穩(wěn)定其降解產(chǎn)物為嘧啶222胺和22甲基2232二氫24H2122苯并噻唑21142三酮。該方法穩(wěn)定可靠快速準(zhǔn)確可用于該類藥物的分析鑒定。波蘭Jagiellonian大學(xué)的Ekiert等[15]用TLC測(cè)定唑類抗真菌劑這是抗真菌唑類藥物成分檢測(cè)的新方法目前鮮有報(bào)道。該實(shí)
15、驗(yàn)對(duì)酮康唑、聯(lián)苯芐唑、氟康唑和伊曲康唑4種抗真菌劑進(jìn)行了測(cè)定前3種用甲醇溶解定量伊曲康唑用氯仿溶解并制成甲醇溶液。經(jīng)選擇TLC板用硅膠60F254熒光板展開系統(tǒng)選用正己烷2醋酸乙酯2甲醇2水2冰醋酸(42∶40∶15∶2∶1)UV檢測(cè)波長(zhǎng)260nm。該法準(zhǔn)確簡(jiǎn)便專屬性強(qiáng)可作為抗菌素類藥物TLC法研究的參考。藥品的親脂性是指某分子或分子的一部分對(duì)類脂環(huán)境的親和性有機(jī)化合物的親脂性可以影響它們的吸收、分布、代謝和排泄等所以藥品的親脂性研究對(duì)
16、于藥品的生物利用度的預(yù)測(cè)有著重要意義。傳統(tǒng)的親脂性研究是用液2液分配的方法測(cè)定比較費(fèi)時(shí)繁瑣反相TLC法親脂性研究方法的引入解決了這一問(wèn)題。Hamryt[16]等用RP2TLC方法研究了12個(gè)精神類藥物的親脂性。選用MerckC18硅膠F254HPTLC薄層板(10cm10cm)考察了多種流動(dòng)相組合結(jié)果表明最好的流動(dòng)相為:甲醇2水20.01molLSDS210%醋酸鹽緩沖液(pH4.75)、甲333現(xiàn)代藥物與臨床ModernPharmac
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