酶法輔助浸漬提取兩面針中總生物堿的研究

1、酶法輔助浸漬提取兩面針中總生物堿的研究酶法輔助浸漬提取兩面針中總生物堿的研究陸世惠1，鄧鳳云2，盧紅梅1，陳楠1，林瑤1（1.右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，廣西百色533000；2.廣西百色市中醫(yī)醫(yī)院，廣西百色533000）摘要摘要：目的目的優(yōu)選酶解預(yù)處理后浸漬提取兩面針中總生物堿的工藝。方法方法用單因素試驗法和正交試驗法，研究酶種類、加酶量、pH、酶解溫度、時間等酶解因素和提取溶劑、次數(shù)、時間等浸漬因素對總生物堿提取率的影響。結(jié)果結(jié)果最佳工藝

2、條件為：纖維素酶、果膠酶底物質(zhì)量比均為1:250，4倍量pH5緩沖液室溫（30℃）下酶解30min，再以體積分數(shù)60%乙醇5gL1鹽酸室溫下浸漬3次，溶劑量分別為12，4和3倍量，每次2h，總生物堿提取率85.22%。結(jié)論結(jié)論該工藝簡單高效、節(jié)能環(huán)保，為工業(yè)生產(chǎn)奠定了實驗基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：兩面針；總生物堿；酶法；正交試驗；浸漬ProcessProcessofofenzymesenzymesassistedassistedextract

3、ionextractionofoftotaltotalalkaloidsalkaloidsfromfromZanthoxylumZanthoxylumnitidumnitidum(Roxb.)(Roxb.)DC.DC.LUShihui1，DENGFengyun2，LUHongmei1，CHENNan1，LINYao1(1.PharmaceuticalSchoolYoujiangMedicalUniversityfNationalitie

4、sBaise533000China2.HospitalofTCMofBaiseCityGuangxiBaise533000China)AbstractAbstract:ObjectiveObjectiveTooptimizeaprocesstoextractthetotalalkaloidsfromZanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.afterpretreatmentwithenzymes.MethodsMethod

5、sTheeffectofpretreatedfactsincludingthekindsofenzymedosagepHtemperaturetimeextractedfactsincludingsolventtimestimeontheextractrateoftotalalkaloidswasstudiedbymonofactialtestthogonaltest.ResultsResultsTheoptimalprocesswas

6、asfollowing:cellulasesubstratepectinasesubstrate1:2504timesbufferwithpH5enzymepretreatingf30minatambienttemperature(30℃)thenextracting3timesatambienttemperaturef2heachtime1243times60%(VV)alcohol5gL1hydrochlicacidrespecti

7、vely.Theextractrateoftotalalkaloidswas85.22%.ConclusionConclusionTheprocessissimpleefficientenergysavingenvironmentallyfriendlyastheexperimentalbaseofindustrialproduction.KeyKeywdswds：Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.totalalk

8、aloidsenzymemethodthogonaltestextract兩面針，Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.又名釘板刺、入山虎、入地金牛等，系蕓香科花椒屬植物，主要分布于廣西、廣東、云南、貴州等地[1]，主治風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、胃痛、牙痛、毒蛇咬傷等癥[2]，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明其有抗癌作用[3]。其主要含生物堿，且主要為苯并菲啶類生物堿[4]。因此，提取兩面針總生物堿具有重要意義。作者[5]以體積分數(shù)60%乙醇5

9、gL1鹽酸為溶劑回流提取兩面針粉末3次，各次溶劑量分別為6，5和4倍，每次回流0.5h，總生物堿提取率為89.84%。該工藝的提取率較高，但是回流法耗能也高。酶法輔助提取是低能耗技術(shù)，近年來被逐步應(yīng)用到中草藥提取中來[67]。以纖維素酶、果膠酶等作用于植物細胞，使細胞壁及細胞間質(zhì)中的纖維素、半纖維素、果膠質(zhì)等物質(zhì)降解，破壞細胞壁的致—————————[收稿日期收稿日期][基金項目基金項目]右江民族醫(yī)學(xué)院課題（右醫(yī)科字[2011]1號）[

10、通訊作者通訊作者]陸世惠，實驗師，碩士，研究方向為天然產(chǎn)物的提取分離鑒定及其生物活性60.19%?？梢?，酶解pH為5較好。2.2.5酶解溫度的選擇在兩種酶的酶底物質(zhì)量比均為1:250，pH為5條件下，對復(fù)合酶酶解溫度進行單因素試驗，在室溫(30)，40，50和60℃條件下總生物堿提取率分別為60.08%，60.45%，60.79%和60.48%。可見，不低于30℃時溫度影響較小，為節(jié)能起見，室溫（30℃）下酶解即可。2.2.6酶解時間的

11、選擇在兩種酶的酶底物質(zhì)量比均為1:250，pH為5，室溫下酶解，對酶解時間進行單因素試驗，酶解15，30，60和120min時總生物堿提取率分別為58.05%，60.18%，60.79%和60.88%?？梢?，酶解30min即可。2.3浸漬提取經(jīng)酶解（加入約4倍量緩沖液）預(yù)處理后，馬上進行浸漬法提取。2.3.1正交試驗經(jīng)單因素預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)，溶劑的乙醇體積分數(shù)和提取次數(shù)影響較大，提取時間超過4小時后提取率未見增加，而溶劑量影響較小。因此，在保

12、持溶劑含5gL1鹽酸[5]的條件下進行L9(34)正交試驗，考察乙醇體積分數(shù)（A）、提取次數(shù)（B）及提取時間（C）對總生物堿提取率的影響，因素水平見表1。第1，2和3次提取的溶劑量分別為12，4和3倍量，由于第1次提取的溶劑由原緩沖液直接加乙醇配成，至少配制12倍量才能達到設(shè)計的乙醇體積分數(shù)。為提高統(tǒng)計分析的可靠性，重復(fù)試驗1次，測定結(jié)果取均值進行統(tǒng)計分析，結(jié)果見表2，方差分析見表3。表1因素水平表───────────────────

13、因素水平────────────────A乙醇體積分數(shù)%B次數(shù)C時間h───────────────────150112602237034───────────────────表2L9(34)正交試驗結(jié)果───────────────────────NoABCD提取率%───────────────────────1111151.962122264.923133373.384212365.685223173.106231282.6173