轉(zhuǎn)基因作物葉片蛋白濃度測(cè)定方法

1、轉(zhuǎn)基因作物葉片蛋白濃度測(cè)定方法轉(zhuǎn)基因作物葉片蛋白濃度測(cè)定方法托普云農(nóng)轉(zhuǎn)基因作物葉片蛋白濃度測(cè)定用特異性抗Cry1C單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗Cry1C單抗，雙抗體夾心法檢測(cè)Cry1C基因表達(dá)產(chǎn)物，可以高靈敏度和特異性的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物中的BtCry1C蛋白。一、轉(zhuǎn)基因作物葉片蛋白濃度測(cè)定簡(jiǎn)介一、轉(zhuǎn)基因作物葉片蛋白濃度測(cè)定簡(jiǎn)介隨著分子生物學(xué)和植物基因工程的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的育種工作者開始利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得常規(guī)育種技術(shù)難以得到的新種質(zhì)和新品

2、種。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)最大的好處在于可以打破自然界物種間原有的生殖隔離，促進(jìn)基因在不同物種間的交流，極大地豐富變異類型，增大遺傳多樣性，為植物新品種的培育提供豐富的育種資源。通過(guò)對(duì)基因功能的研究，篩選m目的基因，還可實(shí)現(xiàn)植物性狀的定向改良。因此該技術(shù)自1983年首次獲得轉(zhuǎn)基因植物以來(lái)，便深受育種工作者青睞，得到了蓬勃地發(fā)展。至今已有30多科約200多種植物轉(zhuǎn)基因成功；國(guó)際上相繼有30多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)3000多例轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)入田間試驗(yàn)，并且四、轉(zhuǎn)

3、基因植株外源基因表達(dá)情況的檢測(cè)與鑒定四、轉(zhuǎn)基因植株外源基因表達(dá)情況的檢測(cè)與鑒定盡管在mRNA水平也能一定程度地研究外源基因的表達(dá)，但存在mRNA在細(xì)胞質(zhì)中被特異性地降解等情況，mRNA與表達(dá)蛋白質(zhì)的相關(guān)性不高(相關(guān)系數(shù)低于05)，基因表達(dá)的中間產(chǎn)物mRNA水平的研究并不能取代基因最終表達(dá)產(chǎn)物的研究。轉(zhuǎn)基因植株外源基因表達(dá)的產(chǎn)物一般為蛋白，外源基因編碼蛋白在轉(zhuǎn)基因植物中能夠正常表達(dá)并表現(xiàn)出應(yīng)有的功能才是植物基因轉(zhuǎn)化的最終目的。外源基因表達(dá)

4、蛋白檢測(cè)主要利用免疫學(xué)原理，ELISA及Western雜交是外源基因表達(dá)蛋白檢測(cè)的經(jīng)典方法。五、基因芯片技術(shù)檢測(cè)五、基因芯片技術(shù)檢測(cè)1、優(yōu)點(diǎn)、優(yōu)點(diǎn)eDNA芯片能夠檢測(cè)出由外源基因整合及外源基因不同的整合方式所引起的植物基因組任何微小的表達(dá)差異。將不同被測(cè)樣品的mRNA分別用不同的熒光物質(zhì)標(biāo)記，各種探針等量混合與同一陣列雜交，可以得到外源基因表達(dá)強(qiáng)度差異的信息，從而實(shí)現(xiàn)外源基因表達(dá)調(diào)控的比對(duì)研究。2、缺點(diǎn)、缺點(diǎn)由于受到成本高的局限，使得該

5、項(xiàng)技術(shù)的推廣應(yīng)用受到了限制，同時(shí)，一些假陽(yáng)性背景也使得其應(yīng)用受限。相信隨著生命技術(shù)的不斷向前發(fā)展，計(jì)算機(jī)處理軟件的進(jìn)一步開發(fā)利用，生物芯片必將得到越來(lái)越多的應(yīng)用。六、試紙條技術(shù)六、試紙條技術(shù)與ELISA原理相似，不同之處是以硝化纖維膜代替聚苯乙烯反應(yīng)板為固相載體。先將特異性抗體吸附在膜上，將膜放入混有樣品的溶液中，蛋白質(zhì)隨著液相擴(kuò)散，遇到抗體，發(fā)生抗原一抗體反應(yīng)，通過(guò)陰性對(duì)照篩選陽(yáng)性結(jié)果，并給出轉(zhuǎn)基因成份含量的大致范圍。試紙條方法是一種