作物抗蚜蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究.pdf

1、棉蚜是導(dǎo)致世界上農(nóng)作物產(chǎn)量嚴(yán)重下降的主要害蟲(chóng)之一。成若蚜群集于棉葉背面和嫩尖上，以針狀口器刺吸汁液，由于組織的細(xì)胞受到破壞，致使棉葉正反面生長(zhǎng)不平衡，葉片背面卷曲，形成卷葉，植株矮縮，受害棉苗葉發(fā)育受阻。而噴施化學(xué)殺蟲(chóng)劑嚴(yán)重污染環(huán)境，通過(guò)表達(dá)毒蛋白來(lái)抑制或殺死害蟲(chóng)可能使蚜蟲(chóng)產(chǎn)生抗性。所以尋找一種新型的抗蟲(chóng)策略既能夠有效地抵抗蚜蟲(chóng)，又是安全的，就成為一種迫切的要求。
　　 RNA干擾是近期發(fā)現(xiàn)的一種新的基因調(diào)控機(jī)制，它利用RNA序

2、列匹配，專一地識(shí)別靶基因，在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平或翻譯水平抑制靶基因表達(dá)。在農(nóng)業(yè)上RNAi技術(shù)已發(fā)展成為控制蟲(chóng)害、提高作物品質(zhì)的新方法。與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因手段相比，這一技術(shù)更具選擇性和安全性。
　　 本研究擬嘗試通過(guò)RNAi技術(shù)，降解靶基因mRNA，抑制棉蚜內(nèi)源靶基因的表達(dá)，從而達(dá)到抑制棉蚜數(shù)量的目的。根據(jù)已知生物信息學(xué)數(shù)據(jù)，通過(guò)RT-PCR技術(shù)從棉蚜中克隆了AP1，Catb5，Catb6，RPL18基因，AP1為網(wǎng)格蛋白基因，Cat

3、b5、Catb6為組織蛋白酶基因家族的兩個(gè)基因，RPL18為核糖體蛋白酶基因。這四種基因都為棉蚜的持家基因，由于Catb5、Catb6組織蛋白酶基因缺少3’端，分別對(duì)Catb5、Catb6做了3’RACE，將AP1，Catb5，Catb6，RPL18基因分別通過(guò)正向和反向插入到pBi35SG12質(zhì)粒中，構(gòu)建了pBi35SAP1，pBi35SC5，pBi35SC6，pBi35SR18四個(gè)RNAi載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將四個(gè)基因?qū)霐M南