分子遺傳復習題-21道

1、非標準答案，僅供大家參考：非標準答案，僅供大家參考：1.試談真核生物與原核生物在基因組、基因結構方面的特點及相互間的主要不同點？試談真核生物與原核生物在基因組、基因結構方面的特點及相互間的主要不同點？真核生物原核生物基因組復雜，3109bp，3－4萬個基因，有重復和插入序列，無重疊基因簡單，5106bp，4000多個基因，無重復序列和插入序列，有重疊基因轉錄核內轉錄，轉錄與翻譯分開，轉錄后加工，三種RNA聚合酶，I（rRNA），II(m

2、RNA)，III(tRNA，5s，5.8sRNA)，mRNA壽命長，單順反子轉錄與翻譯偶聯(lián)，無轉錄后加工，一種RNA聚合酶，壽命短，多順反子翻譯無SD序列，掃描學說，翻譯后加工修飾SD序列，無翻譯后加工修飾2.真核基因在大腸桿菌表達的基本條件是什么？可能產生的主要問題是什么？請?zhí)岢鼋鉀Q真核基因在大腸桿菌表達的基本條件是什么？可能產生的主要問題是什么？請?zhí)岢鼋鉀Q問題的原則和方法。問題的原則和方法?！緱l件】[1]原核表達載體提供轉錄、翻譯所

3、必須的調控元件，如啟動子、轉錄終止子、核糖體結合位點等。(1)、具有能自主復制的復制子，松弛型，質粒高拷貝數(shù)，便于質粒大量制備及表達。(2)、強啟動子、強轉錄終止子，便于高水平轉錄，防止轉錄通讀。(3)、可誘導性，尤其在高表達對細胞有毒性的蛋白。(4)、合適的核糖體結合位點，提高翻譯起始效率和翻譯水平。(5)、具有多個單一酶切位點的多克隆位點，且酶切位點最好位于被檢測的表型基因上，便于外源基因插入及篩選。(6)、分子量小，便于較大外源基

4、因的插入。(7)、具有抗藥性標志，有利于插入外源基因克隆的篩選。(8)、安全，不污染環(huán)境，對人無害[2]外源基因必要條件：不含內含子（2）易于擴增，易通過感染大腸桿菌得到擴增，便于構庫及高通量篩選。（3）在多種洗脫(如低pH值)下，仍然穩(wěn)定，可以感染形成很高滴度（一般達1012)）【特點】（1）具有快速、有效、操作簡便等特點，大大簡化了多肽篩選和鑒定。（2）表型分析和基因型分析同時進行?！敬嬖趩栴}】多樣性并不是完全意義上的隨機。原因：（

5、1）建庫時，密碼子的選擇和寡核苷酸的合成，即編碼肽的基因帶有一定的偏向性。（2）庫的構建要經原核生物細胞內的層層篩選，多肽不能對宿主細胞有毒性。（3）DNA轉化效率受限。（4）篩選靈敏度。多樣性高于1012的庫，很難富集所需噬菌體肽。4.抗體工程能夠實施的理論依據(jù)是什么？抗體多樣性是怎樣產生的？抗體工程能夠實施的理論依據(jù)是什么？抗體多樣性是怎樣產生的？5.簡述大腸桿菌的復制過程。簡述大腸桿菌的復制過程。復制過程包括：復制起始，復制延伸，

6、復制終止?！緩椭破鹗肌縀.coli復制起始位點稱為iC；復制方向：雙向；主要參與蛋白：DNaA：解開iC；DnaBC復合物：DnaB：解旋酶，DnaC：協(xié)助DnaB。E.coli染色體以一個復制單位從iC開始雙向復制。在iC上形成兩個復制叉，并以大致相同的速度延伸到整個基因組。【復制延伸】復制酶為DNA聚合酶，DNA合成一定需要引物，DNA復制引物為RNA。引發(fā)酶是一種與轉錄不相關的RNA聚合酶，可以合成RNA引物，起始DNA的復制。大

7、腸桿菌的引發(fā)酶為一條單肽鏈，分子量為60KD。DNA合成必需為5’?3’，在蛋白復制體參與下DNA進行半不連續(xù)復制：復制鏈方向5’?3’，前導鏈連續(xù)復制；復制鏈方向3’?5’，滯后鏈非連續(xù)復制。DNA聚合酶I去除RNA引物。DNA連接酶封閉缺口。【復制終止】環(huán)狀DNA復制的終止：即兩個相反方向復制叉匯合，停止復制，復制體解體其后兩條親代鏈解開，通過修復方式填補空缺。終止子序列和Tus蛋白(終止子序列結合蛋白)：Tus蛋白與終止子位點te