番茄早疫病對幾種種農(nóng)藥的抗藥性研究

1、番茄早疫病對番茄早疫病對3種農(nóng)藥的抗藥性研究種農(nóng)藥的抗藥性研究番茄早疫病菌是番茄重要病害之一。近年來，由于一些地區(qū)推廣抗病毒病而不抗早疫病的番茄品種，導(dǎo)致早疫病嚴(yán)重發(fā)生。發(fā)病時(shí)可引起落葉、落果和斷枝，對產(chǎn)量影響很大，常年減產(chǎn)20％一30％，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)50％以上，甚至絕產(chǎn)。由于番茄早疫病具有潛育期短、再侵染頻繁、流行速率高的特點(diǎn)H1，長期使用單一藥劑防治，在藥劑的選擇壓力下病原菌容易形成抗藥性群體。目前國內(nèi)針對番茄早疫病抗藥性的研究剛剛開

2、展，這次試驗(yàn)主要測定其對嘧菌酯、腐霉利及代森錳鋅3種化學(xué)殺菌劑的敏感性，為其推廣和科學(xué)使用提供了理論依據(jù)。1材料與方法材料與方法1.1菌種的采集菌種的采集番茄早疫病菌采自于臨安的農(nóng)田及學(xué)校的農(nóng)場基地里德番茄早疫病株果實(shí)或葉片上，按隨機(jī)取樣的原則進(jìn)行。取樣后將所得的各組織分別裝入小袋隔離，帶回后對其進(jìn)行分離純化。菌株以“采集地點(diǎn)的大寫拼音開頭序號”命名。1.2供試藥劑供試藥劑95％嘧菌酯原藥，由浙江東風(fēng)化工有限責(zé)任公司提供；978％腐霉利

3、原藥，由南京仁信化工有限公司提供；8162％代森錳鋅原藥，由浙江東風(fēng)化工提供。1.3菌種的分離與純化菌種的分離與純化131孢子分離法孢子分離法用經(jīng)過滅菌的接種刀刮取發(fā)病葉背表面霉層，接入PDA(馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水l000m1)平板培養(yǎng)基表面，25℃下培養(yǎng)，待長出菌絲后，用滅菌的接種針挑取早疫菌絲轉(zhuǎn)入另外一個(gè)PDA平板培養(yǎng)基上純化菌種。132組織分離法組織分離法將采集到的病葉組織切成3～5mill的方形小塊，在7

4、5％乙醇溶液里浸2—3s，然后浸在15％的次氯酸中漂洗3min，最后用無菌水洗滌3～4次。經(jīng)表面消毒的病組織放置在PDA平板培養(yǎng)基，在25℃左右恒溫箱內(nèi)保存，直到產(chǎn)生孢子或菌絲為止(約4～5d)，用滅菌的接種針挑取孢子或菌絲，移到新的PDA平板培養(yǎng)基上。133單孢分離法單孢分離法將番茄早疫病菌在PDA培養(yǎng)基七培養(yǎng)一周后，注入4℃的無菌水，刮取氣生菌絲，紫外線照射2min，于20一22℃下干燥6h后皿內(nèi)即可產(chǎn)生大量的分生孢子。在培養(yǎng)一周的

5、菌落上用打孔器打下5個(gè)菌碟j放在PDA平板培養(yǎng)基上，用涂抹器涂布均勻。25℃培養(yǎng)24h后對已萌發(fā)的單個(gè)孢子進(jìn)行標(biāo)記，48h后再把標(biāo)記的單個(gè)菌落移入斜面培養(yǎng)基。14病原菌的確定病原菌的確定病原菌的鑒定利用赫柯氏法則，將分離出的菌株再接回到番茄葉片上，驗(yàn)證是否為病原菌。從菜園中采集健康的番茄葉片帶回室內(nèi)，用無菌水沖洗，然后在無菌的條件下用75％的酒精浸泡2min并用無菌水換洗5次，最后放到帶濾紙的滅菌培養(yǎng)皿中。用棉球包裹葉柄的基部并從各分離

6、菌株菌落的邊緣用接種針挑取直徑4mln的圓形菌落接到葉背面的兩側(cè)，每菌株接3個(gè)菌塊，置于25℃培養(yǎng)。3d后記載發(fā)病情況并觀察病斑子實(shí)體形態(tài)。15含藥培養(yǎng)基的制備含藥培養(yǎng)基的制備抗類型(RM)；大于100屬于高抗類型(RH)。2結(jié)果與分析結(jié)果與分析2.1菌株的分離與病原物確定菌株的分離與病原物確定從浙江省4個(gè)調(diào)查地區(qū)共采集分離大概100株番茄早疫病菌菌株，分別從里中垅地區(qū)、臨安周圍地區(qū)、農(nóng)林大學(xué)官塘、余杭地區(qū)采集。采用分離純化100株菌株

7、確定是否可以使番茄葉片發(fā)病。葉片被害癥狀，初呈深褐色或黑色圓形至橢圓形的小斑點(diǎn)，逐漸擴(kuò)大，達(dá)1—2cm，邊緣深褐色或黑色圓形至橢圓形的小斑點(diǎn)，逐漸擴(kuò)大，達(dá)1—2cm，邊緣深褐色，中央灰褐色，有同心輪紋，邊緣有黃色暈環(huán)。顯微鏡觀察發(fā)病葉片上子實(shí)體的形態(tài)。分生孢子梗單生或簇生，圓筒形，有l(wèi)一7個(gè)隔膜，暗褐色，大小40一90um6～8um。分生孢子長棍棒狀，頂端有細(xì)長的嘴胞，黃褐色，具縱橫隔膜。所有這些特征與番茄鏈格孢的特征一致。再由該試驗(yàn)的

8、無傷接種，認(rèn)定能引起發(fā)病的菌株即為番茄早疫病的病原菌。2.2敏感基線測定敏感基線測定從表1中的數(shù)據(jù)可以計(jì)算得到所選帶白哦菌株對腐霉利、代森錳鋅及嘧菌酯的平均EC50值。并以此作為番茄早疫病對四種殺菌劑的相對敏感基線。表1里中垅地區(qū)早疫病對腐霉利及代森錳鋅敏感基線菌株獨(dú)立回歸方程Y=abX相關(guān)系數(shù)95%置信限EC50平均EC50MIC腐霉利L2L6L27L28L29L35代森錳鋅L2L6L27L28L29L35嘧菌酯L2L6LZ27L28