實驗動物生物安全20140922

1、實驗動物的生物安全,中山大學實驗動物中心,郭中敏110822416@qq.cn,引 言,實驗動物：指經人工飼養(yǎng)、繁育，對其質量（攜帶的微生物和寄生蟲）實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學研究、醫(yī)藥、教學、生產和檢測鑒定以及其他科學實驗的動物。如大鼠、小鼠、裸鼠、豚鼠、家兔、比格犬、恒河猴、小型豬、沙鼠等。實驗用動物包括：實驗動物，野生動物，經濟動物。如牛、羊、貓、未實驗動物化的土種狗等。動物實驗：是指以實驗動物為對象和材

2、料，在設計好的符合相應條件要求的環(huán)境下進行實驗或者檢測，觀察、記錄動物的反應情況和結果的過程。,引 言,我國實驗動物以及環(huán)境設施規(guī)模和質量不斷擴大和提升，實驗動物進出口越來越頻繁，新品系不斷引進，使得我國實驗動物資源日趨豐富。實驗動物在生產、使用過程中，存在感染、繁殖病原體的可能以同時也存在向環(huán)境擴散病原微生物的危險，對人和環(huán)境都有可能造成生物安全危害。,1941年美國發(fā)生74例實驗室相關的吸入性布氏桿菌感染事故1960’s中

3、國相繼發(fā)生三起布病實驗室感染1976年英國某醫(yī)學實驗室的工作人員體檢時發(fā)現(xiàn)結核菌感染者比其他人員高5倍2003年新加坡、中國臺灣、中國CDC SARS實驗室感染事故,引 言,引 言,1999年北京某實驗室曾發(fā)生實驗人員感染流行性出血熱事件。事件起因就是操作人員被攜帶病毒的實驗動物抓咬傷而受感染引起的。,引 言,2006年長春市某高校中藥系實驗室發(fā)生學生感染流行性出血熱事件，76名學生中有10名學生受感染。整個事件起

4、因也是由于實驗操作過程中被動物抓咬傷而造成的。,經典案例,東北農大28名師生剖活羊染“怪病”2010年12月東北農業(yè)大學畜禽生產教育班30名學生進行“羊活體解剖學實驗”后，28人感染布魯氏菌病，癥狀為關節(jié)疼痛、全身乏力、流產等，嚴重者生活不能自理。,引 言,實驗動物生物安全問題已引起國、內外高度重視。2001年我國實施新版《實驗動物國家標準》，其中規(guī)定：實驗用大小鼠的等級提高到SPF級。取消普通級。2004年《北京市實驗動物

5、管理條例》，修改和增加了實驗動物生物安全方面內容，2006年第二屆北京實驗動物科學國際論壇上，日本國立大學生物安全委員會委員長佐藤浩教授提出，生物安全已成為實驗動物研究中不容忽視的重要因素。,實驗動物生物安全:是對實驗動物可能產生的潛在風險或現(xiàn)實危害進行防范和控制。由實驗動物造成的各種風險和危害包括： 生產和使用實驗動物中的各個環(huán)節(jié)，如實驗動物的引種、保種、繁育、運輸、進出口，使用實驗動物(包括感染和非感染實驗動物)進行動物實驗

6、、從事科研活動等過程中實驗動物都有可能造成各種危害。,引 言,,動物實驗造成的生物危害，已引起微生物學、生物醫(yī)學等相關學科工作者的極大關注。動物性氣溶膠和人獸共患病是形成動物實驗生物危害的重要因素。在制定防護生物危害的生物安全措施上應包括實驗室規(guī)程的制定、實驗設備的設置(一次隔離)、實驗設施的規(guī)劃(二次隔離)、個人防護用品的準備、感染動物的飼養(yǎng)和管理以及生物危害的評估等方面。,實驗動物生物安全的條件與保障國家、地方法律、法規(guī)合

7、格的實驗動物與和符合標準的設施生產和實驗中嚴格進行標準化的操作廢棄物的正確處理實驗動物生物安全應急預案,引 言,國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準,1、國家《實驗動物管理條例》（1988）2、《實驗動物質量管理辦法》（修訂版）（2001）3、《實驗動物許可證管理辦法（試行）》（國家：2001、廣東?。?002）4、《實驗動物種子中心管理辦法》5、《省級實驗動物質量檢測機構技術審查準則》6、國家GB14925—2010(2

8、011.10.01),國家和地方實驗動物主要法規(guī)、標準,7.《廣東省實驗動物管理條例》2010年6月2號通過； 2010年10月1號執(zhí)行第四章： 生物安全與實驗動物福利第二十二條 實驗動物發(fā)生傳染性疾病時，從事實驗動物生產、使用的單位和個人應當及時采取隔離、預防控制措施，防止動物疫情擴散，同時報告當?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門、動物防疫監(jiān)督機構；當發(fā)生人畜共患病時，還應當立即報告當?shù)丶膊☆A防控制機構。,國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準

9、,1《實驗動物微生物等級及監(jiān)測》2《實驗動物寄生蟲等級及監(jiān)測》3《實驗動物環(huán)境及設施》4《哺乳類實驗動物的遺傳質量控制》5《實驗動物配合飼料通用質量標準》6《實驗動物配合飼料衛(wèi)生標準》,國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準,實驗動物生產許可證,實驗動物使用許可證,國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準,,實驗動物分為四級：一級為普通級（cv）；二級為清潔級（cl）；三級為無特定病原體（SPF）級；四級為無菌級（包括悉生動物）。

10、目前比格犬、恒河猴、小型豬等大動物多為普通級，大、小鼠均為清潔級以上，豚鼠、家兔等有普通級、清潔級、SPF級。國際上將實驗動物分為三個級別； SPF級以上動物種群來源于剖腹產動物，微生物、寄生蟲是按國標嚴格控制。實驗動物設施分為三級：一是普通環(huán)境（潔凈度8級、10萬）；二為屏障環(huán)境（潔凈度7級、萬級）；三為隔離環(huán)境（潔凈度5級、百級）。,實驗動物及其設施的等級,隔離系統(tǒng)(Insulation system) 是以隔離器(Isolat

11、or)為主體及其附屬裝置組成的飼養(yǎng)系統(tǒng)。用作飼養(yǎng)無菌動物和已知菌動物。分正、負壓隔離器。 屏障系統(tǒng)(Barrier system) 這是清潔級、SPF級動物生產或實驗的設施。人、實驗動物、飼料、飲水、墊料、空氣及其它物品均需進行嚴格的微生物控制。人流、物流及動物流要分開。 開放系統(tǒng)(Open system) 只能進行普通級實驗動物的生產與實驗。,實驗動物及其設施的等級,屏障環(huán)境 主要用于進行SPF級、清潔級的大鼠、小鼠等小動物

12、實驗（配備飼養(yǎng)室及操作室）。,潔凈走廊,SPF動物實驗室,實驗動物及其設施的等級,實驗動物及其設施的等級屏障環(huán)境動物實驗設施設備,實驗動物及其設施的等級屏障環(huán)境動物實驗設施設備,動物生物安全實驗室和生物安全實驗室一樣，主要根據(jù)所研究病原微生物的危害評估結果和危害程度分類將動物生物安全實驗室劃分為四級：動物生物安全實驗室一級(ABSL-1) 動物生物安全實驗室二級(ABSL-2) 動物生物安全實驗室三級(ABSL-3) 動物生

13、物安全實驗室四級(ABSL-4) 涉及傳染性、中毒性、放射性、致癌性、致突致畸及致死性實驗等應在有特殊要求的生物安全實驗室（負壓）中進行，根據(jù)生物安全防護要求進行建筑，按照有關規(guī)定執(zhí)行。,實驗室及其設施的等級分類,實驗動物及其動物實驗的操作,實驗動物使用的生物安全：動物及飼養(yǎng)要求:1、引進動物進行實驗必須具備實驗動物質量合格證,隔離檢疫一周，無異常時方進行實驗。2、堅持衛(wèi)生消毒制度：定期對動物房舍和飼養(yǎng)用具進行消毒（消毒

14、方法及消毒劑交替使用）。3、飼養(yǎng)管理人員要定期做健康檢查。,實驗操作要求：動物實驗人員實驗操作過程中做好防護，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套;嚴格按照標準操作規(guī)程進行。,實驗動物及其動物實驗的操作,實驗動物及其動物實驗的操作屏障環(huán)境標準操作規(guī)程,SPF級動物實驗室的管理責任SPF級動物實驗室工作人員職責SPF級動物實驗室工作人員職責SPF級動物實驗室人員進出的標準操作規(guī)程SPF級動物實驗室物品進出的標準操作規(guī)程SPF級

15、動物實驗室動物進出的標準操作規(guī)程使用SPF級動物實驗室的標準操作規(guī)程,實驗動物及其動物實驗的操作屏障環(huán)境標準操作規(guī)程,SPF級實驗動物購買的標準操作規(guī)程SPF級實驗動物接收和檢疫的標準操作規(guī)程SPF級動物實驗室實驗動物飼料、飲水、墊料管理的標準操作規(guī)程SPF級實驗動物抓取和保定的標準操作規(guī)程SPF級實驗動物逃脫處理的標準操作規(guī)程SPF級實驗動物死亡和傷病處理的標準操作規(guī)程高壓蒸汽滅菌器使用與維護的標準操作規(guī)程傳遞窗使用

16、與維護的標準操作規(guī)程渡槽使用與維護的標準操作規(guī)程,實驗動物及其動物實驗的操作,不同品種、不同等級和互有干擾的動物實驗，不得在同一實驗間進行飼養(yǎng)，同一來源、相同品種、品系而用于不同實驗目的動物實驗飼養(yǎng)，也不得在同一實驗間進行。 不得將普通級動物帶進屏障環(huán)境中進行實驗，如將實驗動物帶離屏障環(huán)境進行實驗，不得再帶回屏障環(huán)境中進行飼養(yǎng)、實驗。,實驗動物及其動物實驗的操作,在進行動物實驗時，為了不損傷動物的健康，不影響觀察指標，并防止被動

17、物咬傷，首先要限制動物的活動，使動物處于安靜狀態(tài)，抓取動物前，必須對各種動物的一般習性有所了解。操作時要小心仔細、大膽敏捷、熟練準確、工作人員必須掌握合理的抓取固定方法。,實驗小鼠的抓取,實驗動物及其動物實驗的操作,實驗兔的抓取與給藥,實驗動物及其動物實驗的操作,豚鼠的抓取,實驗動物及其動物實驗的操作,實驗狗的抓取與固定,實驗動物及其動物實驗的操作,實驗動物及其動物實驗的操作,實驗動物誤傷的處理實驗動物咬傷救治在傷口上方扎止血帶，然后

18、用消毒液沖洗傷口。 如被實驗犬咬傷，首先要把臟血擠出，否則容易引起感染；傷口若比較大或自己不好處理，最以最快的速度去醫(yī)院處理。同時24小時內到防疫站注射相關疫苗。,標本處理： 動物血液及組織標本立即按實驗要求進行分離、凍存或固定處理后，分類存放。,動物實驗標本及廢棄物的處理,,廢棄物處理國務院《醫(yī)療廢物管理條例》衛(wèi)生部令《醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療廢物管理辦法》衛(wèi)生部文件《 醫(yī)療廢物分類目錄》病原體的培養(yǎng)基、標本和菌種、毒種保存

19、液等高危險廢棄物，在交醫(yī)療廢物集中處置前應就地高壓消毒。,動物實驗標本及廢棄物的處理,實驗動物使用的各種廢棄物可按《醫(yī)療廢物分類目錄》進行相應分類，并嚴格按照《醫(yī)療廢物管理條例》的規(guī)定進行處理。根據(jù)實驗動物使用的廢棄物的特征可分為感染性廢棄物：如被動物血液、體液污染的物品 病理性廢棄物：實驗動物尸體等廢棄物 損傷性廢棄物：廢棄的銳器。 藥物性廢棄物：變質或者被污染的廢棄的藥品 化學性廢棄物：具有毒性、腐蝕性、易燃易爆性

20、 的廢棄的化學物品,動物實驗標本及廢棄物的處理,實驗動物使用的廢棄物收集●將實驗動物使用廢棄物分別置于動物廢棄物專用包裝袋或者容器內?！窀腥拘詮U棄物、病理性廢棄物、損傷性廢棄物、藥物性廢棄物及化學性廢棄物不能混合收集?！袷⒀b實驗動物使用廢棄物的每個包裝袋、容器外表面應當有警示標識，注明：單位、日期、類別等?！駨U棄物經包裝、密封后存放于暫時貯存設施，不得露天存放；暫時貯存的時間不得超過２天，由愛衛(wèi)辦或防

21、疫部門統(tǒng)一運輸、處理。,動物實驗標本及廢棄物的處理,對實驗動物廢棄物暫時貯存設施、設備要求：●遠離人員活動區(qū)和生活垃圾存放場所，方便實驗動物使用廢棄物運送人員及運送工具、車輛出入?！裼袊烂艿姆忾]措施，設專（兼）職人員管理，防止非工作人員接觸動物廢棄物?！裼蟹罎B漏、防雨水沖刷、防陽光直射、防蚊蠅、防蟑螂、防盜以及預防兒童接觸等安全措施。●易于清潔和消毒。,動物實驗標本及廢棄物的處理,●如需暫時貯存病理性廢棄物，則應當具備低溫貯存或

22、者防腐條件。●設有明顯的動物廢棄物警示和“禁止吸煙、飲食”標識。●病原體感染性動物實驗的廢棄物，需經過高壓或消毒液初步處理后再分裝收集，然后統(tǒng)一由愛衛(wèi)辦或防疫部門運輸后進一步處理。,1、人畜共患病毒性疾?。毫餍行猿鲅獰?、淋巴性脈絡叢腦膜炎病毒感染、口蹄疫、埃博拉病毒感染、靈長類痘病毒病、麻疹、雞新城疫、A型肝炎、猴免疫缺陷綜合征、狂犬病、流感、節(jié)肢動物攜帶性病毒感染。2、人畜共患立克次氏體?。篞熱,附：重要的人畜共患病,附：

23、重要的人畜共患病,3、人畜共患細菌性疾?。?布氏桿菌病、李斯特菌、猴結核病、鸚鵡熱、鼠咬熱、鼠疫、鉤端螺旋體病、沙門氏菌病、志賀氏菌病、腸炎耶森氏菌病。4、人畜共患病原蟲性疾?。汗蜗x病、包蟲病、梨形蟲病、隱孢子蟲病、阿米巴原蟲病、大腸纖毛蟲病。,1、病原體：漢坦病毒。 傳染源——帶病毒黑線姬鼠和褐家鼠，實驗大鼠也偶爾傳播。 2、傳播途徑——帶病毒的血、尿污染人皮膚破損處，也使人患病。污染塵埃飛揚形成氣溶膠吸入感

24、染。,（一）流行性出血熱（腎綜合征出血熱HFRS）,3、易感者——人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔。4、癥狀——潛伏期14天；動物無明顯癥狀；人感染后出現(xiàn)高熱、出血、休克、腎功能受損和循環(huán)衰竭，嚴重者死亡。,（一）流行性出血熱（腎綜合征出血熱HFRS）,（二）淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎,1、病原體：淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒。傳染源——帶病毒野小鼠或實驗小鼠為傳染源。2、傳播途徑——帶病毒小鼠的分泌物、排泄物污染，吸血昆蟲傳播，胎盤垂直傳播。,

25、（二）淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎,3、易感者——人，小鼠、猴、豚鼠、大鼠、地鼠、兔、狗、雞等。4、癥狀——人感染后表現(xiàn)類似流感樣癥狀，有三種表現(xiàn)：大腦型、內臟型、遲發(fā)型。,（三）口蹄疫,1、病原體：口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MDV)。是引起患病動物的口、蹄部出現(xiàn)水皰性病癥為特征的傳染性疾病。傳染源—患病的偶蹄動物。2、傳播途徑——接觸傳播,（三）口蹄疫,3、易感者——偶蹄類動物、人4、癥狀——發(fā)燒，

26、嘔吐，口腔組織發(fā)生紅色潰瘍腐爛(表面腐蝕性水皰)，偶有皮膚小水皰。值得注意的是，該癥狀與另外一種病毒疾病“手足口病”的癥狀類似，因此，要注意區(qū)分。,手足口病與口蹄疫的區(qū)別,病原不同：口蹄疫——口蹄疫病毒 手足口病——數(shù)種腸道病毒，如EV71病毒傳染源： 口蹄疫——染病動物 手足口病——患者和腸道病毒攜帶者傳播途徑： 口蹄疫——接觸病畜潰爛斑，偶有經口途徑

27、 手足口病——接觸病人、經口、呼吸道易感人群： 口蹄疫——發(fā)病人群廣泛 手足口病——多為3歲以下兒童,（四）布魯桿菌病,1、病原體：布魯氏桿菌 傳染源—主要是感染的羊、牛及豬等，其次是犬。2、傳播途徑——經皮膚粘膜接觸傳染、經消化道傳染 、經呼吸道或者其它如蒼蠅攜帶，蜱叮咬也可傳播本病。,（四）布魯桿菌病,3、易感者——人、羊、牛、豬、犬等。4、癥狀——長期發(fā)熱、多汗、關節(jié)痛及肝脾腫大等為特點，女

28、性易引起流產和死胎。臨床上分型為：多性期；慢性活動型；慢性期相對穩(wěn)定型。,經典案例解析,東北農大28師生剖活羊染“怪病” 2010年12月東北農業(yè)大學畜禽生產教育班30名學生進行“羊活體解剖學實驗”后，28人感染布魯氏菌病，癥狀為關節(jié)疼痛、全身乏力等，嚴重者生活不能自理。,,實驗前實驗準備：學校從養(yǎng)殖場購買了4只沒有檢驗檢疫報告的山羊，也沒有進行任何實驗室前檢驗檢疫，第二天就拿進入了實驗室。實驗室安全教育：老師交代學生們做實驗需

29、穿實驗服、戴手套，但沒有要求帶口罩。學生反映：學校沒有實驗室安全方面的課程或培訓，更沒有講到動物傳染病傳給人的問題。老師反映：有實驗室安全制度，但沒有詳細念給同學們聽。制度貼在實驗室墻上，沒有提醒同學們看，老師們對人畜共患傳染病的認識也不夠。,實驗過程中：學生：一些人并未戴手套，戴口罩者只有三兩人，還有一些學生因為戴手套不方便做實驗，摘掉手套。老師：在沒有戴手套的情況下徒手扒開羊的內臟。實驗過后個人消毒：學生沒有進行消毒，老

30、師也沒有提醒學生消毒。實驗室消毒：實驗室未經消毒，這批山羊先后共進行了五次實驗。,問題深入分析,實驗室的基本防護,應在實驗前認真閱讀實驗室操作指南和安全操作程序；實驗前應穿戴好必要的防護器具，如手套、口罩、工作服，必要時穿上膠靴、戴上護目鏡；實驗過程中應嚴格按照實驗技術規(guī)范進行操作，并禁止喝水、吃東西以及不必要的來回走動等。實驗結束后及時清理消毒地面、桌面、工具等，防止病原體污染，離開現(xiàn)場前，進行個人清潔消毒。,實驗動物福利,實

31、驗動物福利：是指善待實驗動物，即在飼養(yǎng)管理和使用實驗動物的活動中，采取有效措施，保證實驗動物能夠受到良好的管理與照料，為其提供清潔、舒適的生活環(huán)境，提供保證健康所需的充足的食物、飲用水和空間，使實驗動物減少或避免不必要的傷害、饑渴、不適、驚恐、疾病和疼痛。安死術：是指以人道的方法處死動物的技術，使動物在沒有驚恐和痛苦的狀體下安靜地并在盡可能短的時間內死亡。,動物福利觀點：人類可以合理地利用動物資源造福人類和社會，實驗動物是科學研究、社

32、會進步和人類健康不可缺少的實驗材料。因此提倡在動物飼養(yǎng)與使用中實施動物福利，給予動物必要的人文關懷?！e極倡導“3R”原則。動物福利與“動物權利”、“動物解放”等觀點是有本質區(qū)別的。,實驗動物福利,“3R”原則：善待實驗動物， 推行3R方案，即Replacement（替代）、 Reduction（減少）和Refinement（優(yōu)化）替代：1.在實驗動物替代方面，利用離體培養(yǎng)的器官、組織和細胞代替整體動物，在單克隆抗體生產、病毒疫

33、苗制備、效力和安全試驗、細胞膜研究等項目中已廣泛使用。2.用低等動物代替高等動物。3.用物理、化學和信息技術方法代替動物實驗，這些替代方法的研究和應用，都減少了實驗動物用量。,實驗動物福利,實驗動物福利,減少： 在減少動物用量方面的措施有：合并使用動物，如利用死亡的動物進行外科手術實驗；利用病理解剖實驗摘取動物的器官等；改進統(tǒng)計學設計，以少量動物獲得大量統(tǒng)計學資料；使用高質量的實驗動物，同樣可以起到以質量代替數(shù)量的作用等。優(yōu)化：

34、 在動物實驗的優(yōu)化方面：通過改良儀器設備，減少動物的痛苦；改善實驗室條件，減少對動物的刺激，避免應激反應；優(yōu)化實驗方法，盡量減少實驗動物用量，給予動物人道處死、施行安死術。,1 飼養(yǎng)管理過程中的要求,對飼養(yǎng)設備和環(huán)境的要求：按照2010版新國標要求執(zhí)行。對飼養(yǎng)管理的要求：飼養(yǎng)密度要 合理，飼料、飲水、墊料要符合國標等。,實驗動物福利,實驗動物福利要求,2 動物實驗前的福利倫理要求,對動物實驗設備的要求：應設計研制環(huán)境符合國家標

35、準各種實驗設備。 對科技人員素質的要求：要加強實驗動物科普倫理教育，提高科技人員人文素養(yǎng)和技術水平，本著愛惜動物、善待動物的理念來進行動物實驗。 對實驗設計的要求:要本著“3R”的原則，科學設計實驗方案，充分體現(xiàn)善待實驗動物。,,實驗動物福利,3 動物實驗過程中的福利倫理要求,對麻醉技術要求：要合理選擇麻醉藥物，選擇合適的麻醉途徑，具備熟練的麻醉技術，掌握好麻醉深度。人文關懷的要求：對動物要進行必要的“心理安撫”，減少應急和痛

36、苦。對實驗技術的要求：要加強對科技人員的科普培訓，提高實驗技術。,實驗動物福利,4 動物實驗后的福利倫理要求,護理要求：要正確護理實驗后忍受痛苦的實驗動物。實驗結束后對實驗動物的處理要求：實驗結束后對需要處死的動物要采用“安死術”，對尸體送至焚燒爐燒毀或按相關要求妥善處理。,實驗動物福利,附：國家關于善待實驗動物的指導性意見,……指在飼養(yǎng)管理和使用實驗動物過程中，要采取有效措施，使實驗動物免遭不必要的傷害、饑渴、不適、驚恐、折磨、疾

37、病和疼痛，保證動物能夠實現(xiàn)自然行為，受到良好的管理與照料，為其提供清潔、舒適的生活環(huán)境，提供充足的、保證健康的食物、飲水，避免或減輕疼痛和痛苦等。這是我國第一個關于實驗動物福利和動物實驗倫理的法規(guī)性文件。,,實驗動物福利,,國內實驗動物種子庫.北京維通利實驗動物技術有限公司http://www.vitalriver.com.cn/.上海斯萊克實驗動物責任有限公司 .地址：上海市松江區(qū)九亭鎮(zhèn)中心路 郵編：2