rna干擾沉默同源框基因nkx3.1對前列腺癌細(xì)胞lncap的影響

1、R N A 干擾沉默同源框基因N K X 3 ．1 對前列腺癌細(xì)胞L N C a P 的影響I n f l u e n c e o f s i l e n c i n go f h o m e o b o x g e n e N K X 3 ．1 b y R N Ai n t e r f e r e n c eo nL N C a P p r o s t a t ec a n c e r c e l ll i n e s博士研究生： 陳

2、剛導(dǎo) 師： 張元芳教授導(dǎo)師組成員： 瞿連喜副教授鄭平教授王翔副教授復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院泌尿外科二零零五年四月探討非那雄胺抑制L N C a P 增殖的分子機(jī)制，篩選特異性的治療靶點。材料與方法比較睪酮和非那雄胺對L N C a P 細(xì)胞生長的影響，利用基因芯片檢測睪酮和非那雄胺作用前后L N C a P 差異表達(dá)的基因。結(jié)果睪酮能夠促進(jìn)L N C a P 細(xì)胞的生長，但是較高濃度的睪酮抑制細(xì)胞增殖。非那雄胺能夠顯著抑制L N C a P

3、 的增殖，在9 6 條基因中受非那雄胺作用有差異表達(dá)的基因有2 9 條，其中表達(dá)上調(diào)的基因有l(wèi) 1 條，下調(diào)的基因有1 8 條；受睪酮作用有差異表達(dá)的基因有2 2 條，其中表達(dá)上調(diào)的基因有9 條，下調(diào)的基因有1 3 條結(jié)論非那雄胺抑制L N C a P 增殖可能涉及多基因、多通路的共同作用。關(guān)鍵詞前列腺腫瘤癌雄激素睪酮非那雄胺寡核苷酸序列分析L N C a P第二部分R R ^ 干擾載體的構(gòu)建以及I C K X 3 ．1 沉默效應(yīng)的驗證

4、目的構(gòu)建能夠編碼N K X 3 ．1 小干擾R N A ( s i R N A ) 的質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)染雄激素敏感性前列腺癌細(xì)胞系L N C a P ，使N K X 3 ．1 在m R N A 水平和蛋白質(zhì)水平表達(dá)沉默。材料與方法在網(wǎng)上根據(jù)專利算法設(shè)計了兩條能夠編碼N K X 3 ．1 s i R N h 的寡核苷酸單鏈以及編碼陰性s i R N A 的寡核苷酸單鏈，與G e n s c r i p t 公司提供的p R N A T —U

5、6 ．1 ／N e o質(zhì)粒S D l 2 1 1 進(jìn)行重組，并用限制性內(nèi)切酶B a m H I 和t t i n d I I I 行酶切鑒定及D N A 測序。隨后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雄激素敏感性前列腺癌細(xì)胞系L N C a P ，在不同時間點采用實時定量P C R 和w e s t e r nb l o t 在m R N A 和蛋白質(zhì)水平檢測，以驗證N K X 3 ．1 表達(dá)沉默的效果。進(jìn)一步篩選N K X 3 ．1 表達(dá)沉默的L N C a

6、 P 單克隆細(xì)胞。結(jié)果酶切鑒定與D N A 測序顯示重組質(zhì)粒中含有所設(shè)計的寡核營酸單鏈，序列正確。轉(zhuǎn)染陰性s i R N A —N 質(zhì)粒的L N C a P 細(xì)胞中N K X 3 ．1 的表達(dá)未受影響，而轉(zhuǎn)染N K X 3 ．1 s i R N AI 和N K X 3 ．1 s i R N h I I 的L N C a P 細(xì)胞中N K X 3 ．1 m R N A 和蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著下降，提示小干擾R N A 介導(dǎo)的N K X 3