尿液檢測(cè)MALAT-1對(duì)前列腺癌早期診斷的作用及MALAT-1沉默對(duì)前列腺癌細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、[研究目的]
　　 近年研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本-1(MALAT-1)在包括前列腺癌的較多惡性腫瘤中呈表達(dá)增高。但MALAT-1與前列腺癌的具體關(guān)系還不是很清楚，了解MALAT-1在前列腺癌組織及前列腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，進(jìn)而探究MALAT-1沉默后會(huì)對(duì)前列腺癌細(xì)胞的功能產(chǎn)生何種影響。另外，由于血清PSA篩查前列腺癌存在許多局限性，如重復(fù)穿刺等，尋找到一種特異性更高的前列腺癌診斷標(biāo)記物尤為重

2、要。所以，有必要去探究一下在尿液中檢測(cè)MALAT-1能否成為前列腺癌篩查的新方式。
　　 [研究方法]
　　 通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)MALAT-1在23對(duì)前列腺癌組織及其配對(duì)的癌旁正常組織、前列腺癌細(xì)胞系(C4-2，PC-3，DU-145，LNCaP，22RV1，LNCaP-AI)及正常前列腺上皮細(xì)胞系PWR1-E中的表達(dá)水平；設(shè)計(jì)MALAT-1-siRNA，通過(guò)定量PCR挑效率高的siRNA來(lái)轉(zhuǎn)染MALAT-1在其中表

3、達(dá)高的前列腺癌細(xì)胞系，然后通過(guò)不同試驗(yàn)觀察MALAT-1沉默對(duì)前列腺癌細(xì)胞功能的影響，包括：通過(guò)CCK-8比色、克隆形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響，通過(guò)體外的細(xì)胞劃痕試驗(yàn)、transwell侵襲試驗(yàn)評(píng)價(jià)其對(duì)細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的變化。
　　 另外，研究納入了150例需要行前列腺穿刺活檢的患者(PSA＞4.0ng/ml)，其中穿刺陽(yáng)性59例，穿刺陰性91例。收集他們的前列腺按摩(DRE)

4、后尿液離心得到沉渣，由TRIzol抽提尿沉渣總RNA并經(jīng)WTA擴(kuò)增獲得cDNA，定量PCR檢測(cè)尿液沉渣中MALAT-1、DD3(也叫PCA3)、PSA的表達(dá)水平，計(jì)算出每個(gè)樣本中MALAT-1、DD3以PSA為內(nèi)參的相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)而評(píng)價(jià)MALAT-1的診斷功能。
　　 [結(jié)果]
　　 MALAT-1在前列腺癌組織中呈高表達(dá)的占78％(18/23)，且在前列腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于正常前列腺上皮細(xì)胞(P＜0.05)。經(jīng)M

5、ALAT-1-siRNA轉(zhuǎn)染的前列腺癌細(xì)胞(22RV1，LNCaP-AI)的增殖、遷移、侵襲能力明顯弱于對(duì)照組(mock，control)，同時(shí)凋亡較對(duì)照組明顯增加，細(xì)胞周期阻滯于G0/G1。
　　 以尿液中MALAT-1的相對(duì)表達(dá)水平為指標(biāo)可以預(yù)測(cè)前列腺穿刺結(jié)果(P=0.0016)，其診斷能力與DD3相當(dāng)。ROC曲線分析，MALAT-1(AUC=0.643)和DD3(AUC=0.661)，優(yōu)于血清PSA(AUC=0.539)。