tuc.475在b細(xì)胞淋巴瘤中的作用機(jī)制研究

1、T —U C ．4 7 5 在B 細(xì)胞淋巴瘤中的作用機(jī)制研究R o l e o f T —O C ．4 7 5i nB —L y m p h o m a c e l l江蘇省高校自然科學(xué)研究重大項目研究生：顧欣導(dǎo)師：郁多男教授2 揚(yáng)州大學(xué)碩：b 學(xué)位論文結(jié)果：q R T —P C R 結(jié)果顯示，p 5 3 與O G T 可能的結(jié)合部位相比較未結(jié)合的顯示高表達(dá)，而T - u c ．4 7 5 卻沒有變化。p 5 3 激活1 ．5 h 以后

2、，O G T 啟動子序列表達(dá)增高，u c ．4 7 5 表達(dá)無差異；p 5 3 未激活，O G T 、T ．u c ．4 7 5 啟動子序列表達(dá)均無差異。結(jié)論：p 5 3 可與O G T 啟動子序列直接結(jié)合，與T ．u c ．4 7 5 啟動子無結(jié)合位點(diǎn)。p 5 3 激活后，可與O G T 啟動子序列結(jié)合，與T - l l C ．4 7 5 啟動子無結(jié)合位點(diǎn)；p 5 3未激活時，和O G T 、T —u c 。4 7 5 均無法結(jié)合。由

3、此可以得出O G T 受p 5 3 的直接調(diào)控，又因T ．u c ．4 7 5 位于O G T 基因中，因此p 5 3 可通過O G T 來調(diào)控T —U C ．4 7 5 的表達(dá)。第二部分研究T - u e ．4 7 5 在B 淋巴瘤細(xì)胞中的功能目的：根據(jù)長鏈非編碼R N A ：T ．U C ．4 7 5 在B 淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況‘，通過過表達(dá)或敲低T ．U C ．4 7 5 的方法，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，來進(jìn)一步探究T ．u e ．

4、4 7 5的生物學(xué)功能。‘方法：運(yùn)用實(shí)時熒光定量P C R ( q R T ．P C R ) 技術(shù)檢測長鏈非編碼R N AT ．u c ．4 7 5 和O G T 在不同B 淋巴瘤細(xì)胞和石蠟切片組織中的表達(dá)情況；構(gòu)建和克隆U C ．4 7 5 ．M S C V ．P I G 質(zhì)粒，通過短發(fā)夾R N A ( s h o r th a i r p i nR N A ，s h R N A ) 技術(shù)構(gòu)造s h l n c - u c ．4 7

5、5 ．s h R N A 質(zhì)粒，測序，擴(kuò)增質(zhì)粒；將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到2 9 3 T 細(xì)胞中，運(yùn)用q R T - P C R 技術(shù)檢測T ．U C ．4 7 5 有無過表達(dá)，檢測s h l n c ．u c ．4 7 5 ．s h R N A 有無低表達(dá)；人工制造U C ．4 7 5 - M s C v - P I G 逆轉(zhuǎn)錄病毒，人工制造s h l n c , - u c ．4 7 5 ．s h R N A逆轉(zhuǎn)錄病毒；感染B 淋巴瘤細(xì)胞3 8

6、8 9 ，使用倒置顯微鏡查看熒光，用流式細(xì)胞儀檢測感染效率，用嘌呤霉素篩選后使得感染效率約為1 0 0 ％；體外用流式細(xì)胞儀檢測周期，凋亡，細(xì)胞計數(shù)：體內(nèi)將感染3 8 8 9 的淋巴瘤細(xì)胞皮下接種到B A L B ／e小鼠，一周后取出腫瘤做免疫組化和W B 實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：運(yùn)用實(shí)時熒光定量P C R ( q R T ．P C R ) 技術(shù)檢測出長鏈非編碼R N AT ．U C ．4 7 5 和O G T 在不同B 淋巴瘤細(xì)胞和石蠟切片組織彌

7、漫性大B 中均高表達(dá)。克隆T ．1 ．1 1 3 ．4 7 5 和s h t n c —U C ．4 7 5 一s h R N A 后，測序比對1 0 0 ％；轉(zhuǎn)染2 9 3 T 細(xì)胞后，q R T ．P C R 技術(shù)檢測T ．u c ．4 7 5 相對于空載體對照表達(dá)增高，s h l n e - u c ．4 7 5 ．s h R N A相對于空載體對照表達(dá)降低；感染B 淋巴瘤細(xì)胞3 8 8 9 后，有綠色熒光且流式細(xì)胞儀檢測感染效率